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1、1,南京大学医学院附属鼓楼医院 顾光煜,全自动生化分析仪 基本知识与工作原理,2,一、自动生化分析仪的分类,根据反应装置： 连续流动式、离心式和分立式 根据反应介质： 液相化学、干式化学 根据反应通道： 单通道、多通道 根据自动化程度： 全自动、半自动 根据仪器的复杂程度： 小型、中型和大型 根据分析系统试剂开放程度： 封闭系统、开放系统,3,1.连续流动式生化分析仪,比例泵 空气分段 透析器 管道式，携带污染,4,5,2.离心式全自动生化分析仪,几乎“同步分析” 随机任选式（早期的必须按项目顺序） 比色杯人工清洗？（一次性）,6,3.分立式生化分析仪,目前使用生化分析仪主要此种类型。 比色杯
2、袋式仪器可以自动制作比色杯比色杯可以兼作反应杯比色杯不能作流动比色池（半自动）,7,4.干式生化分析仪干片分：扩散层、试剂层、指示剂和支持层。 利用“反射光度法”和“差式电位法”检测。 以液体样品中的“水”为溶剂。 理论基础：KubelkaMunk理论。,8,5.半自动生化分析仪,光源（石英卤素灯） 常用“干涉滤光片”分光 微量流动比色池。 终点法项目通常在“仪器”外孵育，时间和温度的准确性常影响测定结果。,9,例1 临床上所指的封闭式全自动生化分析仪主要是 A 质控物封闭 B 试剂封闭 C 环境封闭 D 仪器封闭 E 技术人员封闭,10,例2 全自动生化分析仪可分为小型、中型、大型，其依据是
3、： A 单通道和多通道数量 B 仪器可测定项目的多少 C 测定程序可否改变 D 仪器的复杂程度、功能和单位时间测试数量 E 是否可以同步分析,11,例3 全自动与半自动生化分析仪共同之处为 A 取样 B 加试剂混合 C 检测波长 D 孵育反应 E 清洗系统,12,例4 干化学式自动生化分析仪所用的光学系统为 A 分光光度计 B 原子吸光仪 C 反射比色计 D 固定闪烁计数器 E 免疫比浊计,13,例5 关于分立式全自动生化分析仪的比色杯的阐述，错误的是： A 比色杯可以是反应杯 B 比色杯可以自动制作 C 比色杯可以是流动比色池 D 比色杯可以是石英玻璃 E 比色杯可以是硬质塑料,14,二、自
4、动生化分析仪的安装与准备,1.工作环境空间、电源（UPS)、避免直射阳光、 环境温度和湿度、电磁辐射、化学品。 2.水 蒸馏水、去离子水、反渗透水。 3.纯水等级：一般二级二级纯水微生物含量：最大每毫升菌落数103。,15,例6 临床生化实验室一般采用NCCLS所规定的二级纯水，其微生物菌落（CFU/ml)应低于 A 1 B 10 C 100 D 1000 E 100000,16,例7 临床生化实验室用水一般采用： A 一级水 B 二级水 C 三级水 D 次级水 E 自来水,17,三、全自动生化分析仪 基本结构及工作原理,1.样品系统 专用样品杯和直接用采血试管 凝块和气泡检出功能 自动冲洗功
5、能 样品预稀释、后稀释、加倍、标准原液系列稀释等不同的稀释方式。,18,2.试剂系统 冷藏功能 液面感应及气泡检出 双试剂与多试剂 试剂瓶的防蒸发与死体积 试剂条码,19,3.条形码系统 三组成部分：扫描系统、信号整形、译码器 黑条白空相间的条码符号 光电转换元件 常用条码类型：Code39, Code128等,20,4.反应系统 4.1 反应盘 4.2 混合装置 多用特氟隆不沾涂层的搅拌棒 4.3 温控装置 理想的温度波动应小于0.1 3种方式：空气浴、水浴、恒温液间接加热 强生干化学仪用空气浴恒温,21,5.清洗系统 一般先用碱性液冲洗、再用酸性液冲洗、最后用去离子水冲洗。 6.管路系统
6、管路系统的老化或长期使用后反应废物的沉积阻塞常造成反应结果的重复性差。,22,7.比色系统 7.1 光源 卤素灯波长300800nm氙灯 波长285750nm 使用寿命1000h左右，光源能量对340nm影响最大。 7.2 比色杯 常用石英、硬质玻璃、优质塑料光径0.50.7cm。,23,7.3 单色器 朗伯比尔定律滤光片、棱镜、光栅分光多采用光栅分光多采用后分光测量技术 光源 比色杯 单色光器 检测器 7.4 检测器 发光二极管8 程序控制系统,24,9. 携带污染 常规清洗不能完全消除携带污染 9.1 常见原因 共用系统保养不当（污垢、老化）清洗液使用不当排列顺序不合理 9.2 计算 小于
7、0.3%为正常 9.3 常见组合,25,例8 自动生化分析仪比色分析常用的检测器是 A 固定闪烁计数器 B 硒电池 C 镍氢电池 D 二极管 E 光电倍增管,26,例9 自动生化分析仪的光源能量降低对单色光影响最大的波长是 A 340nm B 405nm C 450nm D 500nm E 630nm,27,例10 自动生化分析仪清洗加样针主要为了 A 提高分析精密度 B 提高分析准确度 C 防止交叉污染 D 提高反应速度 E 提高分析的灵敏度,28,例11 大多数全自动生化分析仪比色杯的光径是 A 0.50.7cm B 0.81.0cm C 1.11.9cm D 2.03.9cm E 4.0
8、cm,29,例12,30,例13,31,例14 全自动生化分析仪比色杯的材料常采用 A 光学玻璃或一般塑料 B 普通玻璃或硬质塑料 C 隔热玻璃或普通塑料 D 石英玻璃或优质塑料 E 优质塑料或普通玻璃,32,例15 目前全自动生化分析仪最常用的光栅分光方式为 A 前分光 B 中分光 C 后分光 D 前中后分光 E 前后分光,33,例16 干式生化分析仪保持恒温的方式是 A 空气式恒温器加热 B 水浴式循环直接加热 C 恒温液循环间接加热 D 金属直接加热 E 反应液直接加热,34,例17 全自动生化分析仪的试剂与样品的混合装置类型为 A 搅拌棒 B 加温 C 机械振荡 D 加样针 E 加混合
9、液,35,例18 某实验室全自动生化分析仪近两天发现部分结果明显不稳定，仪器自检正常，测定过程没有错误报警，如果是交叉污染因素，首先应考虑为 A 清洗剂的类型是否正确 B 清洗用水是否符合要求 C 管路冲洗是否彻底 D 反应杯是否需更新 E 用校准品对仪器进行重新校正。,36,例19 340nm波长属于A 可见光 B 紫外光 C 红外光 D 近红外光 E 远红外光,37,例20,38,例21,39,四、全自动生化分析仪常用分析技术,1.光谱分析技术 单波长、双波长甚至多波长 主波长，特有波长；副波长，为消除干扰而设 单波长易受溶血、黄疸、脂浊的干扰；双波长可消除上述干扰，减少杂散光、噪音干扰
10、常用双波长 比浊 340/700nm；Hb 340/380；NADH 340/380、340/405；ALP 405/476；Trinder 520/600。,40,1.1 波长选择的三个条件 待测物质的光吸收最大 吸收峰宽而钝 常见干扰物在该波长下光吸收最小 1.2 吸收光谱分析Lambert-Beer定律,41,1.3 散射光谱分析 散射光谱分析法 光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度的定律方法。 透射比浊法 散射比浊法目前，全自动生化分析仪主要采用透射比浊法。,42,2.电化学分析技术 是利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化的分析方法。 基本公式：能斯特（Ne
11、rnst)方程。 测量电极与参比电极 K+电极 颉氨霉素；Na+ 玻璃电极；Cl- 银氯化银电极；CO2 气敏电极,43,例22,44,例23,45,例24,46,例25,47,例26,48,例27,49,例28 钠电极属于 A 晶体电极 B 气敏电极 C 玻璃电极 D 酶电极 E 膜电极,50,例29 很多分析仪都采用双波长或多波长的光路技术，是为了减少 A 试剂的干扰 B 样品中黄疸、溶血、脂血的干扰 C 仪器光源的波动 D 批间差异 E 批内差异,51,例30,52,例31,53,例32,54,五、全自动生化分析仪常用测定项目 的反应原理,终点分析法 连续监测法 干化学分析法 电化学分析
12、法,55,1. 常用分析方法连续监测法的定义终点法定义零级反应期一级反应期,56,2. NAD(P)H系统指示的反应 还原型NAD(P)H在340nm有吸收峰；氧化型NAD(P)则没有。,57,2.1 利用NAD(P)HNAD，吸光度下降的：ALTASTLD-PUNK+酶法TCO2酶法,58,2.2 利用NADNAD(P)H，吸光度升高的： CK CK-MB TBA LD-L Glu-HK TBA,59,3. Trinder反应 Glu-GOD 肌苷肌氨酸氧化酶法 尿酸 GPO-PAP T-Ch,HDL/LDL-Ch,60,4.苯衍生物指示反应 ALP GGT NAG,61,5.免疫透射比浊法
13、 型胶原 TnI Hs-CRP，LP(a) 尿微量白蛋白，前白蛋白 胱抑素C 载脂蛋白,62,6. 离子选择电极法 K+ Na+ Cl- TCO2,63,7. 常见受溶血影响较大的项目 K+ LDH CK AST ALT Mg,64,8.终点法反应的项目 Glu-GOD，肌苷肌氨酸氧化酶法，尿酸，TG-GPO-PAP，T-Ch，9.速率法反应的项目 ALT，AST，ALP，GGT，TBA，CK,LD， Glu-HK，UN，NAG，,65,9.其他 9.1 反应底物 ALT L丙氨酸-酮戊二酸ALP 磷酸苯二钠 9.2 用全血标本：糖化血红蛋白,66,例33,67,例34,68,例35,69,例
14、36,70,例37,71,例38,72,例39,73,例40,74,例41,75,例42,76,例43,77,例44,78,例45,79,例46,80,例47 关于ALT测定中，叙述正确的是 A L-丙氨酸与-酮戊二酸为反应底物 B NADH在氧化还原反应中起作用 C 第一步反应中的L-丙氨酸将进入下一步反应 D 在偶联反应中，生化仪将在455nm处检测吸光度下降速率 E LD主要作用于第一步反应,81,例48 若遇到溶血标本时，受影响较小的项目是 A LDL-C B LDH C CK D AST E ALT,82,例49 在下列反应中，需要谷氨酸脱氢酶的是： A 酶速率法测定尿素 B 葡萄糖
15、氧化酶法测定 C 肌苷酶法测定 D 尿酸酶法测定 E 胆固醇酶法测定,83,例50 血清前白蛋白测定，临床上常用的方法是 A 溴甲酚绿法 B 凯氏定氮法 C 双缩脲法 D 免疫比浊法 E 磺柳酸法,84,例51 酶法测定甘油三酯常用的方法是 A 终点法 B 速率法 C 免疫比浊法 D 化学修饰法 E 固定时间法,85,例52 自动生化分析仪中连续监测法的读数方式 A 在一定的时间范围内连续读各吸光度值 B 反应尚未开始和反应终点时各读取吸光度值 C 终点附近读两个检测点取均值 D 在终点附近读取两点，计算两点吸光度的差值 E 每经过比色窗口即读取一个吸光度,86,例53 全自动生化分析仪上测定血清（浆）载脂蛋白的方法为： A 免疫扩散法 B 免疫火箭电泳法 C 免疫透射比浊法 D 酶法 E 免疫散射比浊法,87,例54 酶活性浓度测定不考虑下列哪些因素影响 A pH和离子强度 B 底物浓度 C 激活剂 D 反应温度 E 抑制剂抑制反应的类型,88,谢 谢！,
