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1、骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序1.1. 检验目的检验目的急性白血病类型鉴别；诊断遗传性过氧化物酶缺乏症。2.2. 检测原理（包括结果计算）检测原理（包括结果计算）pereira 建立的碘化钾 MPO 染色法，安全、实用，其原理未明。一般认为髓过氧化物酶分解H2O2，产生新生态氧，后者氧化 KI 析出碘，碘与 W-G 结合，生成颗粒状沉淀定位于细胞浆中。3.3. 性能特征性能特征无。4.4. 标本要求标本要求 4.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。4.2 标本
2、类型：骨髓。4.3 标本容器：洁净载玻片。4.4 标本存放:4.4.1 未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。4.4.2 已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存 10 年以上。4.5 标本运输:室温条件下运输。4.6 标本拒收标准：参照采集手册 。5.5.仪器和试剂仪器和试剂5.1 试剂名称：瑞吉氏染色液、过氧化物酶染色液。5.2 试剂成份：5.2.1 氧化瑞吉氏染色液：Wright 染色剂粉 1 gGiemsa 染色剂粉 0.5 g甘油 10 ml无水甲醇 500 ml加 30% H202 50100 ul，储存于棕色瓶，备用。5.2.2 过氧化物酶染色液：100 l 碘化钾溶液 和 1
3、ml 磷酸盐缓冲液混和。 （1）磷酸盐缓冲液：0.067 mol/ L 磷酸盐，pH 5.8（2）碘化钾溶液：碘化钾 500 mg，蒸镏水 50 ml，储存于棕色瓶，备用。5.3 试剂来源：自配试剂。6.6. 环境和安全环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位 15 分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。7.7. 检测前准备检测前准备在玻片头端贴上标签编号。8.8. 校准校准/ /定标定标无。9.9. 质量控制质量控制无。10.10. 标本检测标本检测10.1 在干燥的骨髓涂片或外周血涂片体尾处用红
4、蜡笔划两条平行线，防止染液溢出；在两条平行线间滴加氧化瑞吉氏染色液，并布满，立即滴加等量过氧化物酶染色液，染色 1-2 分钟；在显微镜下观察到阳性对照，即用过氧化物酶染色液冲洗；晾干，镜检。10.2 结果判断：阳性反应为棕红色至蓝黑色颗粒状定位于细胞质内，阴性反应时胞质为无色，细胞核为浅蓝色或浅紫红色。粒细胞系随着细胞的分化及 MPO 含量的增多，阳性程度逐渐增强，至中幼粒细胞时阳性颗粒充满胞质，有的可覆盖细胞核。嗜酸粒细胞及 Auer 小体呈强阳性。11.11.生物参考区间生物参考区间11.1粒细胞系统：原粒细胞大多数呈阴性反应，有的可出现少量蓝黑色颗粒。自早幼粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳
5、性反应，并随细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强。中性分叶核细胞为强阳性反应，嗜酸粒细胞阳性反应的程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光性，嗜碱性粒细胞呈阴性反应。112单核细胞系统：原始单核呈阴性反应，幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应，阳性颗粒少而细小，弥漫分布，有的可呈阴性反应。11.3其他细胞：淋巴细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞、浆细胞和组织细胞均呈阴性反应。有的吞噬细胞可呈阳性反应。12.12. 危急值危急值无。13.13. 临床意义临床意义13.1 急性白血病类型鉴别：急性髓细胞白血病(AML)多呈阳性反应，以 M3 和 M2 反应最强，M4 和M5 反应较弱。急性淋巴细胞白血病(ALL)和 M0 呈阴性反应。13.2.诊断遗传性过氧化物酶缺乏症。14.14. 注意事项注意事项14.1 一次配制的氧化瑞吉氏染色液可用数月至数年而不变质。14.2 AML-M3 细胞内 MPO 含量高，可适当缩短染色时间。14.3 当涂片上细胞较多或阳性反应着色弱时，可适当延长染色时间，但不超过 2 min。 15.15.参考文献参考文献15.1 全国临床检验操作规程 （第 4 版）16.16.记录表格记录表格无
