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1、血细胞形态检测检测标准操作程序血细胞形态检测检测标准操作程序1.1. 检验目的与原理检验目的与原理1.1 检验目的：白细胞、血小板有无数量及质量异常；红细胞形态异常改变。1.2 检验原理：瑞氏染色原理：瑞氏染料中含有美蓝和伊红两种染料，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。细胞核染色质的核酸与强碱性的组蛋白、精蛋白等，形成核蛋白，这种强碱性物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力，故染成红色；但核蛋白中还有少量的弱酸性蛋白及其氨基，它又与瑞氏染料中的美蓝起作用，只因其量太少，而不显蓝色，故细胞核呈紫红色。较幼稚细胞之胞浆和细胞核之核仁含
2、有酸性物质，与瑞氏染料中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色；当酸性物质各半时，则染成红蓝色或灰红色，即所谓多嗜性。 2.2. 样本收集和贮存样本收集和贮存2.1 原始样本系统：全血。2.2 标本类型：EDTA 抗凝血 2ml,标本的采集应使用标准一次性采血管，充分混匀，勿震荡。2.2 保存条件：EDTA 抗凝血在室温可稳定 24 小时；收集后的标本应该尽快检测,4 小时检测完毕。 3 3试剂试剂3.1 瑞氏染液：3.1.1 试剂成分： 瑞氏染料 1.0g 无水甲醇 500ml甘油 10ml3.1.2 瑞氏染液配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解，将研磨好的染液倾
3、倒入试剂储存瓶中，倒入无水乙醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为 止，染液试剂瓶存满为止。将配制好的染液放在 3624 小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。3.2 磷酸盐缓冲液 PH6.43.2.1 脱水 Na2HPO4 1 份: 处理方法 将 Na2HPO4于蒸发皿上干燥(火燃烘烤）成粉末称量。3.2.2 无水 KH2PO4 2.6 份：将脱水 Na2HPO4 1 份和水 KH2PO4 2.6 份充分混合，边研磨边混匀。3.2.3 将上述粉末 1g 加溶解于 500ml 去离子水中，混合均匀，方可使用。3.3 器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器4.4. 仪器仪器显微镜 OL
4、YMPUS 型号：CX21。4.1 开机前检查4.1.1 OLYMPUS 显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。4.2 日维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净整洁；每日下班前无水乙醇（二甲苯少用，有致癌性）清洗所有显微镜物镜（低倍镜 10，高倍镜油镜） 、目镜。5.5. 操作步骤操作步骤5.1 取材：EDTA 抗凝静脉血、耳血、手指血5.2 血涂片制备：取耳血或指血静脉血一滴置于载玻片一端，用推片以 30450均匀推成厚薄适宜，头体尾清楚、长度 35cm 的血膜（血膜边缘距 1cm 左右） ，注意：耳血手指血第一滴血要去掉，静脉血要
5、充分混匀后吸取适量涂片。5.3 瑞氏染色：（1）将制好的血涂片放在染色架上，加瑞氏染液 45 滴，静置 1 分钟左右，加磷酸盐缓冲液 68 滴，洗耳球混匀染液，染色约 1015 分钟，水流轻轻冲掉染液，吸水纸吸干血涂片上的水分，晾干待检。5.4 镜检 5.4.1 低倍镜观察：血涂片先在低倍镜下观察，查看染色是否满意，中、尾部细胞分布情况，如破损细胞过多，细胞涂片不合格，需要重新涂片检查；观察全片有无血凝块，出现血小板聚集成堆可能血液标本不合格，需要重新采血检查，低倍镜下主要用于：估计白细胞和血小板数量上的变化，增高/明显增高，偏低或极度减低，观察低倍镜下全骗有无幼稚细胞。5.4.2 油镜观察：
6、选择细胞分布均匀的部位进行分类 100 个白细胞，主要包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞五类细胞百分比，常见的异常细胞主要有:原始/幼稚细胞、异形淋巴细胞、有核红细胞等；高倍镜下观察血小板数量和质量上的变化，血小板聚集成堆，畸形血小板等。5.5 报告书写，内容包括：5.5.1 红细胞形态改变：常见有红细胞大小不等、小红细胞、大红细胞，中心淡染区扩大，嗜多色红细胞，豪焦氏小体，有核红细胞等。5.5.2 白细胞分类及形态改变。分类 100 个白细胞是否见有核红细胞。5.5.3：血小板数量和形态改变。5.5.4：诊断意见：描述血细胞有无异常形态改变。6.6. 质量控制质量
7、控制参加每年卫生部 3 次形态学室间质评工作7.7. 检验结果报告检验结果报告检验报告审核完毕，门诊和病房报告单在指定处打印。8.8. 参考范围参考范围血细胞形态无明显异常。9.9. 临床意义临床意义病理性增多： 中性粒细胞：急性化脓感染、粒细胞白血病、急性出血、溶血、尿毒症、 急性汞中毒、急性铅中毒等。 嗜酸性细胞：过敏性疾病，如支气管哮喘、寄生虫病、某些传染病。如猩红热、某些皮肤病如湿疹、某些血液病如嗜酸性粒细胞白血病及慢性粒细胞白血病等 碱性细胞：慢性粒细胞白血病转移癌及骨髓纤维化等。 淋巴细胞：百日咳、传单、慢性淋巴白血病、麻疹、腮腺炎、结核传染性肝类等。 单核细胞：结核、伤寒、亚急性
8、感染性心膜炎疾病、黑热病、单核细胞白血病、急性传染病恢复期等。10.10. 安全防范安全防范10.1 操作必要穿戴手套，必须穿工作服；工作后的台面应消毒擦洗；10.2 为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要开盖，如果看样本是否凝固开盖看后仍立即盖上；不要在空气当中暴露太长时间。开盖时要戴口罩。10.3 遇到样本洒出，被污染的区域应立即戴手套用吸水纸把污染物吸干，用 20000mg/L 金星消毒液喷洒消毒 30 分钟左右，用沾有 500mg/L 金星消毒液的抹布将污染区擦干净，待自然干后，重新使用。擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。10.4 阅完的血涂片，统一收集在专用玻片收集容器（黄色小黄桶） ，收集容器装满时，由工作人员上交到院玻片废物统一处理部门消毒处理。10.5 血液标本 48 小时后，按血常规标本处理办法处理。11.11. 参考文献参考文献11.1 全国临床检验操作规程 （第 4 版）
