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1、骨髓细胞特异性酯酶染色标准操作程序骨髓细胞特异性酯酶染色标准操作程序1.1.检验目的检验目的急性白血病鉴别；鉴别嗜碱性细胞(阴性或弱阳性)与组织嗜碱细胞(阳性)。2.2.检测原理（包括结果计算）检测原理（包括结果计算）氯乙酸AS-D萘酚被细胞内酯酶水解，产生萘酚AS-D，再与六偶氮新品红作用，生成不溶性红色沉淀，定位于细胞质内。3.3.性能特征性能特征无。4.4.标本要求标本要求 （包括病人准备、容器、样本类型等）（包括病人准备、容器、样本类型等）4.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。4.2 标
2、本类型：骨髓。4.3 标本容器：洁净载玻片。4.4 标本存放:4.4.1 未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。4.4.2 已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存 10 年以上。4.5 标本运输:室温条件下运输。4.6 标本拒收标准：参照采集手册 。5.5.仪器和试剂仪器和试剂5.1 试剂名称:氯乙酸 AS-D 萘酚酯酶（AS-DNCE）染色液5.2 试剂来源：上海太阳生物技术有限公司5.3 试剂准备：试剂为即用式。5.4 试剂贮存：28保存，有效期九个月。5.5 试剂组成：液：30mg5,液：30ml5。5.5.l 甲醛-丙酮缓冲液(pH 6.6)5.5.2 0.067 mol/L 磷酸盐
3、缓冲液(pH 7.6)Na2HP04 8.8 gKH2P04 0.9 g蒸镏水 1000 ml5.5.3 40 g/L 新品红(new fuchsin)新品红 1 g2 mol/L盐酸液 25 ml(205)贮存，避免阳光照射，此液可长期保存。5.5.4 40 g/L亚硝酸钠制液，4保存，每周新鲜配制。5.5.5 六偶氮新品红液：使用前等体积新品红和 40 g/L亚硝酸钠液立即混合，反应 1 min。5.5.6 氯乙酸AS-D萘酚酯酶氯乙酸AS-D萘酚 5 mgN,N-二甲基在甲酰胺 2.5 ml5.5.7 底物液六偶氮新品红液 0.2 ml氯乙酸AS-D萘酚液 2 ml0.067 mol/L
4、磷酸盐缓冲液 38 ml最终pH 7.2-7.4。6.6.环境和安全环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位 15 分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。7.7.检测前准备检测前准备在玻片头端贴上标签编号。8.8.校准校准/ /定标定标无。9.9.质量控制质量控制无。10.10.标本检测标本检测10.1 新鲜涂片用冷甲醛-丙酮液固定 30 s,4。10.2 水洗。10.3 底物液孵育 30 min,(205)。10.4 水洗。10.5 苏木素液复染 10 min，水洗。10.6 结果判断：阳性反应为
5、红色颗粒，定位于细胞质中。11.11.生物参考区间生物参考区间分化好的原粒细胞至成熟粒细胞均为阳性反应，嗜酸粒细胞阴性或弱阳性。淋巴细胞为阴性。巨核细胞、血小板、幼红细胞阴性。单核细胞系阴性，偶见弱阳性反应。组织嗜碱细胞为阳性。Auer小体也呈阳性。12.12.危急值危急值无。13.13.临床意义临床意义13.1 急性白血病鉴别：急性粒细胞白血病时原粒细胞和幼稚粒细胞为阳性反应，急性淋巴白血病为阴性，急性单核细胞白血病-般为阴性反应，对于某些POX 反应阳性的单核细胞白血病鉴别意义更大。13.2.鉴别嗜碱性细胞(阴性或弱阳性)与组织嗜碱细胞(阳性)。14.14.注意事项（干扰、潜在变异、超检测
6、范围结果的处理等）注意事项（干扰、潜在变异、超检测范围结果的处理等）14.1 CAE 虽为粒细胞特异性酯酶，但粒系早期细胞中该酶反应不如MPO敏感，因此AML-M1 的典型细胞化学模式常为MPO+ 、CAE-。14.2 严格遵守操作规程，如增加温度和 pH 可导致氯乙酸萘酚分解，从而在细胞内产生非特异性酯酶反应。14.3 底物液配制后要及时使用，以免失效或降低阳性强度。14.4 ICSH 推荐法采用新品红，有的实验室选用固紫(fast blue BB)或固蓝(fast garnet GBC)，试剂也易购到。14.5 染色后应及时观察，长期保存会逐渐褪色。15.15.参考文献参考文献15.1全国临床检验技术操作规程 （第 4 版）16.16.记录表格记录表格无
