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1、腹水找幼稚细胞检测标准操作程序腹水找幼稚细胞检测标准操作程序1.1. 检验目的与原理检验目的与原理1.1 检验目的：判断急性淋巴细胞白血病及其他恶性肿瘤是否有腹膜浸润。1.2 检验原理：瑞氏染色原理：瑞氏染料中含有美蓝和伊红两种染料，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。细胞核染色质的核酸与强碱性的组蛋白、精蛋白等，形成核蛋白，这种强碱性物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力，故染成红色；但核蛋白中还有少量的弱酸性蛋白及其氨基，它又与瑞氏染料中的美蓝起作用，只因其量太少，而不显蓝色，故细胞核呈紫红色。较幼稚细胞之胞浆和细胞核之核仁含有
2、酸性物质，与瑞氏染料中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色；当酸性物质各半时，则染成红蓝色或灰红色，即所谓多嗜性。 根据幼稚细胞内含有的各种酸碱性物质的不同，可以在显微镜下检测出幼稚细胞。2.2. 样本收集和贮存样本收集和贮存2.1 原始样本系统：腹水。2.2 标本类型：腹水 2-3ml，由临床医生穿刺取,标本的采集应使用标准一次性洁净硅胶试管，勿震荡或泼洒。2.2 保存条件：标本尽快制片，染色镜检。3 3试剂试剂3.1 瑞氏染液：3.1.1 试剂成分： 瑞氏染料 1.0g 无水甲醇 500ml甘油 10ml3.1.2 瑞氏染液配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解
3、，将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，倒入无水乙醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为 止，染液试剂瓶存满为止。将配制好的染液放在 3624 小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。3.2 磷酸盐缓冲液 PH6.43.2.1 脱水 Na2HPO4 1 份: 处理方法 将 Na2HPO4于蒸发皿上干燥(火燃烘烤）成粉末称量。3.2.2 无水 KH2PO4 2.6 份将脱水 Na2HPO4 1 份和水 KH2PO4 2.6 份充分混合，边研磨边混匀。3.2.3 将上述粉末 1g 加溶解于 500ml 去离子水中，混合均匀，方可使用。3.3 器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器4.4. 仪器
4、仪器显微镜 OLYMPUS 型号：CX21。4.1 开机前检查4.1.1 OLYMPUS 显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。4.2 日维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净整洁；每日下班前无水乙醇（二甲苯少用，有致癌性）清洗所有显微镜物镜（低倍镜 10，高倍镜油镜） 、目镜。5.5. 操作步骤操作步骤5.1 取材：脑脊液 1-3ml，由临床医生穿刺取,标本的采集应使用标准一次性洁净硅胶试管，勿震荡或泼洒，及时送到检验室5.2 涂片制备：脑脊液片子有检验科细胞室工作人员制备，片子要固定良好，易于染色和显微镜下观察。5.3 瑞氏染色：
5、（1）将制好的血涂片放在染色架上，加瑞氏染液 45 滴，静置 1 分钟左右，加磷酸盐缓冲液 68 滴，洗耳球混匀染液，染色约 35 分钟，水流轻轻冲掉染液，吸水纸吸干血涂片上的水分，晾干待检。5.4 镜检 5.4.1 低倍镜观察：血涂片先在低倍镜下观察，查看染色是否满意，细胞形态是否清楚，选取细胞分布良好区域高倍镜下检查。5.4.2 油镜观察：全片观察，是否找到幼稚细胞。5.5 报告书写，内容包括：阳性时：报告找到幼稚细胞。阴性时：报告未找到幼稚细胞。6.6. 检验结果报告检验结果报告检验报告在瑞美检验系统审核上报到临床科室。7.7. 参考范围参考范围阴性8.8. 临床意义临床意义找到幼稚细胞可判断有脑膜幼稚细胞浸润。9.9. 安全防范安全防范9.1 操作必要穿戴手套，必须穿工作服；工作后的台面应消毒擦洗；9.2 标本 48 小时后，统一由院内收集，处理。10.10. 参考文献参考文献10.1 全国临床检验操作规程 （第 4 版）
