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1、粪 便 检 验 第八组,粪便检查主要用于协助诊断消化道疾病： 1、肠道感染性疾病； 2、肠道寄生虫感染； 3、消化道出血鉴别与肿瘤筛检； 4、了解胃肠道消化、吸收功能； 5、黄疸的鉴别诊断。,粪便成分主要有： 1、未被消化的食物残渣； 2、已被消化但未被吸收的食糜； 3、消化道分泌物； 4、分解产物； 5、肠壁脱落的上皮细胞； 6、细菌，如大肠埃希氏菌、肠球菌和一些过路菌；,第一节 标本采集和处理,一、标本容器盛标本的容器应清洁、干燥、有盖、无吸水和渗漏。细菌学检查，粪便标本应采集于灭菌、有盖的容器内。,二、标本采集标本新鲜，盛器清洁、干燥。 选取有病理意义的标本，多点取样。 及时检测，标本采
2、集后于1小时内检测 完毕。,寄生虫检测应多次取样，并注意取样方式。 阿米巴滋养体等原虫检测，应及时、保温送 检。 粪便隐血检测应于试验前素食三天，并禁服 铁剂、及维生素。,第二节 理学检查,1、粪便量 2、粪便外观颜色：正常人粪便呈黄褐色，婴儿粪便呈黄绿色或金黄色糊状。常见颜色的改变见下表：,性状：正常人粪便为成形软便，婴儿为糊状便。病理状态时，粪便性状可发生改变。,（1）稀糊状或稀汁样便：常因细菌肠毒素、内源性促分泌物质、致泻物质等物质刺激肠道，导致肠蠕动亢进或肠液分泌增多所致。多见于各种感染和非感染性腹泻，尤其是急性胃肠炎。 （2）脓性及脓血便：常见于下消化道病变、各种肠炎、痢疾、急性血吸
3、虫病，结肠或直肠癌，慢性溃疡性结肠炎、肠结核。 （3）米苷样便：呈白色陶米水样，多见于霍乱、副霍乱，为白色淘米水样。,（4）柏油样便：因上消化道出血所致，隐血试验强阳性。（5）白陶土样便：主要见于阻塞性黄疸及钡餐造影术后。 （6）鲜血便：见于直肠息肉，结肠癌、肛裂、痔疮。（7）胨状便：见于慢性菌痢及过敏性肠炎。,（8）黏液便：粘液混匀于粪便中，见于小肠病变；粘液非混匀于粪便中且较集中，见于大肠病变；粘液粘附于粪便表面，常见于直肠炎；透明胶冻样粘液附于粪便表面时，见于粘液性肠炎、痉孪性便秘、情绪激动等。,3、寄生虫虫体粪便中如有虫体较大的肠道寄生虫蠕虫，如蛔虫、蛲虫、绦虫等或其片段，肉眼可见。钩
4、虫虫体需筛洗粪便后才见。,4、气味粪便的臭味与进食的种类，疾病的性质有关。病理情况：粪便恶臭一般见于慢性肠炎、胰腺疾病、消化道大出血、结肠或直肠癌；粪便鱼腥臭味见于阿米巴性肠炎；粪便酸臭味见于消化、吸收不良。,第三节 显微镜检查及其临床意义,显微镜检查内容主要包括寄生虫虫卵、原虫、细胞、真菌、结晶、食物残渣等。,（二）粪便中各有形成分的形态和意义 1、细胞 1）红细胞：正常粪便无红细胞。上消化道出血时，红细胞被破坏，粪便中难以见到。下消化道炎症或出血时可出现数量不等的红细胞，如痢疾、溃疡性结肠炎、结肠癌、直肠息肉、痔疮、急性血吸虫病等。,消化道疾病时由于炎病损伤出血，白细胞、红细胞同时存在。
5、细菌性痢疾时红细胞少于白细胞，多分散存在且形态正常； 阿米巴痢疾者红细胞多于白细胞，多粘连成堆存在并有残碎现象。,2）白细胞（脓细胞） 粪便中的白细胞常见中性粒细胞。病理情况下，中性粒细胞呈灰白色，胞体肿胀、坏死、破碎、结构不完整，胞质内充满细小的颗粒，核不清楚的中性粒细胞，常成堆出现，此时称为“脓细胞”,正常粪便，无或偶见白细胞。 结肠炎，白细胞分散存在，一般少于15个/HFP； 细菌性痢疾、溃疡性结肠炎时，可见大量的白细胞或成堆出现的脓细胞以及吞有异物的小吞噬细胞； 肠易激综合症、肠道寄生虫病时可见较多的嗜酸性粒细胞，可伴有夏科-莱登结晶。,3）巨噬细胞：常随脓细胞出现于急性菌痢的粪便中，
6、溃疡性结肠炎时，亦可偶见。 4）肠黏膜上皮细胞：见于结肠炎症、伪膜性肠炎。 5）肿瘤细胞：乙状结肠癌、直肠癌病人的血性粪便，及时涂片染色（瑞氏或HE染色）可找到成堆体积大，形态异常的肿瘤细胞。,2、寄生虫卵、原虫、滴虫 寄生虫卵：粪便中检查寄生虫卵是诊断肠道寄生虫感染的最常用的指标。粪便中常见的寄生虫卵有：蛔虫卵、钩虫卵、鞭虫卵、蛲虫卵、华枝睾吸虫卵、血吸虫卵、姜片虫卵和带绦虫卵等。原虫和滴虫：肠寄生原虫包括阿米巴原虫、隐孢子虫、鞭毛虫、纤毛虫和人芽囊原虫等。,3、结晶 粪便中检出夏科-雷登结晶，主要见于阿米巴痢疾、钩虫病以及过敏性肠炎，并同时见到嗜酸性粒细胞。 4、食物残渣在正常粪便中，食物
7、残渣均系已充分消化后的无定形细小颗粒。未经充分消化的食物残渣，常见的有以下几种： 脂肪小滴 淀粉颗粒 肌肉纤维 结缔组织 植物纤维及植物细胞,第四节 化学检查及其临床意义,一、隐血试验概念：隐血是指上消化道有少量出血时（每日出血量少于5ml），而且红细胞因被消化分解,肉眼不见粪便改变颜色，并且粪便涂片显微检查未能检出红细胞。而需用其他间接方法才能证实的出血。隐血试验的方法有化学法和免疫法两种 。,1、化学法隐血试验（OBT） 试验原理：血红蛋白中含铁血红素具有过氧化物酶的活性，能分解过氧化物，催化色原物质而呈色，呈色的深浅反映了血红蛋白的含量，即出血量的多少。 常用方法：主要有邻联甲苯胺法，联
8、苯胺法，匹拉米洞法，愈创木酯法等。,假阳性情况：如外源性干扰； 假阴性情况：如外源性与内源性干扰,联苯胺法 【原 理】于粪便内加入易被氧化的物质（联苯胺等）及放氧的物质（H2O2）,经粪便内血 液的作用（血色素中的铁卟啉环有过氧化酶作用）分解过氧化氢放出O2-，使联苯胺被氧化而致颜色。 【检查方法、结果及优缺点】1.方法 联苯胺法 无色孔雀绿法 单克隆抗体OB试验取联苯胺粉少许置于玻片上，滴加冰醋酸2-3滴，再加3% H2O2 2滴，取粪便少许与以上试剂混匀，观察结果。,2、免疫法隐血试验 原理：该试验所有的抗体可分为两类，一种为抗人血红蛋白抗体，另一种为抗人红细胞基质抗体。 常用方法有免疫单
9、扩法、对流免疫电泳、免疫扩散法、酶联免疫吸附试验、反向间接血凝法等。,免疫法不必控制饮食，且敏感性和特异 性都高于化学法。 假阳性情况：高灵敏度可造成假阳性， 故不宜用于日常筛检。 假阴性情况：主要检测下消化道出血， 以及带现象。,临床意义：粪便隐血试验主要用于消化道出血、消化道肿瘤的筛检和鉴别。 隐血阳性： 1、见于消化道出血、药物致胃粘膜损伤（如服用阿司匹林、糖皮质激素）、肠结核、克罗思病、胃病（胃溃疡、胃炎）、溃疡性结肠炎、结肠息肉、钩虫病及肾病综合症出血热、消化道恶性肿瘤等。,2、消化性溃疡与肿瘤出血的鉴别：隐血试验对消化道溃疡的阳性诊断率为40-70，呈间断性阳性；而消化道恶性肿瘤诊
10、断阳性率可达95，且呈持续性阳性。,第五节 粪便的细菌学检查,正常人的肠道中栖居大量的不同种类的微生物，组成人类健康极为重要的体内微生态环境参与营养、消化、吸收及清洁肠道，维护健康的作用。腹泻因病原菌或病毒在在肠道繁殖引发，引起腹泻细菌种类多。本实验主要介绍疑为沙门菌或志贺菌属感染者或带菌者的粪便标本（或直肠拭子）中致病菌的分离和鉴定。,由于肠道中存在大肠埃希菌等很多条件致病菌，其与肠道致病菌的主要区别之一是：大多数条件致病菌可分解乳糖，而绝大多数肠道致病菌则不分解乳糖。分离肠道致病菌多用含乳糖的弱选择性鉴别培养液（如麦康凯琼脂等）以及对大肠埃希菌等条件致病菌有较强抑制作用、而又有利于肠道某些
11、致病菌（如沙门菌及志贺菌属）生长繁殖的强选择性鉴别培养液。,粪便标本常见的病原菌： G菌：葡萄球菌属、白色假丝酵母菌、艰难梭菌、结核分枝杆菌、蜡样芽孢杆菌G菌：志贺菌、沙门菌、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、亲水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌,试剂与器材,菌株：伤寒沙门菌 培养基：麦康凯和SS琼脂平板 各种生化反应培养液及革兰氏染液等试剂（可参见微生物的自动分析及附录）沙门菌多价“O”（A-F组）及单价“O”诊断血清、“H”因子诊断血清,标本的采集,由于粪便中细菌种类很多，故应根据检查目的的不同选择适宜的培养液或用适当方法处理，尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。不能认为粪
12、便中细菌含量多，粪便标本的采集就无须无菌操作。粪便标本的采集也应遵循无菌操作的原则。若便器或标本容器不洁而污染了变形杆菌，就可能影响病原菌的分离检出，甚至把污染菌误报，造成误诊。,标本的采集,采样的时期应合适。疑似痢疾患者应在发病初期、用药前采取标本。粪便标本采集时应挑取无尿液污染的有脓血、黏液部分的粪便23g（液状粪便可挑取絮状物），盛于无菌容器内送检。 在无法获得粪便时，可采用直肠拭子，即用灭菌棉拭子经0.9%氯化钠溶液或增菌培养液湿润后，插入肛门内)45cm处，轻轻转动一圈后取出，插入无菌试管（Cary Blair系统运送管）或保存液中送检；疑似伤寒患者应在发病23周内采集粪便标本。,标
13、本的采集,在无法获得粪便时，可采用直肠拭子，即用灭菌棉拭子经0.9%氯化钠溶液或增菌培养液湿润后，插入肛门内)45cm处，轻轻转动一圈后取出，插入无菌试管（Cary Blair，卡布系统运送管）或保存液中送检；应采集可疑粪便，如立即患者粘液脓血便、霍乱患者的米泔水样便等。以为换乱患者，硬质碱性蛋白胨水中。 除婴幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。 粪便标本如不能立即送检，可将标本放入甘油盐水保存液中，或保存于冰箱内（勿超过2小时）。,粪便标本的细菌学检验程序,粪便标本或肛拭子道标本,涂片,增菌培养,直接分离,报告,革兰染色；动力学观察与制动试验（KIA、MIU）,初步报告,需氧培养,GN增
14、菌液或亚硒酸增菌液,碱性蛋白胨,TCBS平板或其它碱性平板分离,SS平板MAC平板EMB平板,副溶血性弧菌选择平板,菌落形态生化反应,菌落形态、生化反应、抗血清凝集药敏,菌落形态、生化反应、抗血清凝集药敏,步骤与方法,革兰氏染色 志贺菌与沙门菌：急性腹泻患者的粪便标本划线接种于SS平板和MAC平板。 慢性腹泻患者志贺菌或携带者应接种GN增菌液，沙门菌接种亚硒酸盐增菌液，再转种SS平板与MAC平板，观察小的、透明或半透明、无色或浅黄色的可以菌落生长，有时SS平板可见中心黑色菌落（H2S）。 挑选三个可疑菌落分别接种三支KIA、MIU培养基，观察结果。 挑取菌落进行革兰氏染色，观察细菌形态、排列。
15、 采用伤寒沙门菌诊断血清进行血清学鉴定。,步骤与方法,生化反应鉴定第2日观察平板上有无可疑菌落，用接种针于上述平板中挑取单个可疑菌落（无色、半透明、光滑、较小）23个，分别接种至23管双糖培养液内，置37培养1824h。第3日观察细菌生长情况，根据表102初步鉴定细菌种类，然后取双糖培养液上 的菌落进行系列生化鉴定。 表 不同肠道细菌在双糖培养液培养结果（教学实验模拟标本的结果） 序号 上层（乳糖） 下层（葡萄糖） 动力 可能结果 1 + + 有 大肠埃希菌 2 + 有 伤寒沙门菌 3 + 无 痢疾志贺菌,步骤与方法,血清学最终鉴定根据双糖培养液及系列生化反应结果判断，最后利用血清学实验对细菌
16、进行最后的确定。 如果初步鉴定结果为沙门菌属，则取双糖培养液斜面上菌苔与沙门菌多价“O”（A-F组）诊断血清作玻片凝集实验，如凝集即为沙门菌属，然后分别与A-F组的单价“O”诊断血清作玻片凝集实验定组，最后以H因子诊断血清作玻片凝集实验以定型（种），必要时可用因子诊断血清定型。 如果根据双糖培养液及系列生化反应结果判断，初步鉴定结果为志贺菌属，则取菌苔与志贺菌属多价诊断血清作玻片凝集实验以定组，必要时可用因子诊断血清定种或型。,步骤与方法,若为较典型的沙门菌生化反应，但与A-F组多价“O”诊断血清又不发生凝集反应，应考虑可能为有VI抗原的沙门菌，可将菌制成悬液以100加热30分钟以除去VI抗原后，再做血清学鉴定。 如为较典型的志贺菌生化反应又不与其多价诊断血清发生凝集，则可用同样方法加热1001小时以破坏其K抗原，再做玻片凝集反应鉴定之。 在细菌的血清鉴定中，最常使用的方法是凝集反应，其基本原理是细菌为颗粒性抗原，当与相应的抗体混合时，在一定浓度的电解质条件下，可出现肉眼可见的凝集现象。,
