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1、21，三体综合征产前诊断,泸州医学院第三组满分PPT,案例,张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不正常，前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表姐曾生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕前无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少吸烟量。两人核型检查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的AFP , hCG 和uE3检查结果阳性，再进行B超检查胎儿情况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某所孕胎儿具有21三体综合
2、症的高风险，建议进行产前诊断。,孕妇就诊,常规筛查,综合分析风险值,孕期检查,进一步确诊,羊膜穿刺,产前诊断,产前诊断是在遗传咨询的基础上，主要通过遗传学检测和影像学检查，对高风险胎儿进行明确诊断，通过对患胎的选择性流产达到胎儿选择的目的，从而降低出生缺陷率，提高优生质量和人口素质。产前诊断又称宫内诊断。它是为了了解胎儿在子宫内的健康情况，有无先天性畸形或遗传病，用某些特殊检查方法在子宫内对胎儿进行诊断，以便及早采取措施避免残疾儿的出生，提高出生人口的素质，是有生学的重要组成部分。,案例,张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不正常，前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表姐曾
3、生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕前无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少吸烟量。两人核型检查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的AFP , hCG 和uE3检查结果阳性，再进行B超检查胎儿情况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某所孕胎儿具有21三体综合症的高风险，建议进行产前诊断。,产前诊断方法,1.X线检查 2.超声波检查 3.胎儿镜 4.羊膜穿刺术 5.绒毛吸取术 6.脐带穿刺术 7.孕妇外周血分离胎儿细胞 8
4、.植入前诊断,一、实验目的,掌握遗传病的产前诊断过程，通过对21三体综合征的诊断设计，培养运用遗传学现代技术解决医学实际问题的能力。,二、实验原理,1. 羊水中有一定数量胎儿脱落细胞，通过羊膜穿刺获取羊水中的胎儿细胞，经体外培养后通过G显带实验进行核型分析，判断染色体是否畸形，诊断是否患有21三体综合征。,2. G显带是指以 Giemsa 染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先于2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。,三、实验材料、试剂及器材,（1）器材：离心管，离心机，天平
5、，37温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，直柄虹膜镊，滴管。（2）药品：pH6.8 PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,取材,1、腹部备皮，排光膀胱，平卧位常规消毒后铺无菌洞巾。2、麻醉，一般不必需要，精神紧张者或可用普鲁卡因或利多卡因麻醉。,取材,3、选择穿刺部位，经B超胎盘定位后避开胎盘。 中期妊娠时，一般选择在耻骨联合上3横指相当于子宫下段处，于腹中线或其左右侧旁，扪及囊样感的部位做穿刺；也可于宫底与耻骨联合连线中点或左右
6、任何一侧穿刺。 晚期妊娠时，先扪清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎儿颈背部空隙处或胎儿肢体侧空隙处穿刺。,取材,4、确定穿刺部位后，以2021号腰椎穿刺针垂直刺入腹壁，通过腹壁及宫壁两次阻力，当有落空感时即进入羊膜腔，抽出芯针，见羊水溢出，接上注射器，顺利抽得清亮羊水，再次证实在羊膜腔内后，可注射药物。如欲做羊水检查，则抽取羊水20ml立即送检。 5、穿刺完毕后拔出穿刺针，局部压迫5分钟，穿刺部位敷以无菌纱布，胶布固定。,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,细胞体外培养,无菌超净台上将羊水注入50ml无菌离心管内，1500r/min常温离心10min，移去
7、上清，留约0.5ml上清液，枪尖混匀，分装吸取至3个60mm培养皿（falcon），每皿添加4ml羊水完全培养基，37 5%CO2培养箱中培养6-7d。,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,制片,培养6-7d后，倒置显微镜下观察细胞生长情况，有若干梭形型细胞克隆生长，每个克隆细胞状态较好且形成细胞岛，更换新鲜培养液，每天观察，2-3d后，每个细胞岛已长成一个个较大克隆且细胞融合度达70%-80%，并出现数目不等的较多圆形，类圆形透亮细胞时，可进行细胞收获，收获前一天或当天更换培养液，加入秋水仙素，终浓度为0.1微克每毫升，作用4-4.5h,镜下观察有大量“鱼眼样”透明细胞出
8、现时，即可收获。吸取培养上清至一新离心管，加入0.25%胰酶，37消化2min，1000r/min离心10min，弃上清，加入0.075 mol/L KCl 低渗液，3712-13min，用3:1甲醇/冰醋酸预固定和固定后，滴片，常规G显带。,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,显带,1、将制好的染色体标本，置7275烤箱中烤片3h。2、放入预温至37的0.025%胰酶溶液中（pH=7.27.4）消化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间。,显带,3、在Giemsa 染液中染色10min，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。4
9、、镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,结果判断,(1)标准型占患者总数的92.5%，患儿体细胞染色体有47条，有一条额外的21号染色体，核型为47，XX（或XY）+21。其发生机制为亲代（多为母亲）的生殖细胞在减数分裂时染色体不分离所致。,核型分析,纯合型,结果判断,(2)嵌合型仅占21-三体综合征的2.5%-5%，是指受精卵在有丝分裂期间染色体不分离而导致的，因此只是部分而不是所有的细胞存在缺陷。患儿体内含有正常和21-三体细胞二种细胞株，形成嵌合体，核型为46，XX（
10、或XY）/47，XX（或XY）+21，其临床表现随正常细胞所占百分比而定。嵌合型的患儿的智商较其它两型高，临床并发症的发生率也相对较少。,核型分析,易位型,结果判断,(3)易位型约占全部病例的2.5%5%，多为罗伯逊易位，即着丝粒融合，其额外的21号染色体长臂易位到另一近端着丝粒染色体上。最常见为D/G易位，D组中以14号染色体为主，核型为46，XX（或XY）-14，+ t（14q;21q），少数为15号染色体。另一种为G/G易位，是由于G 组中两个21号染色体发生着丝粒融合，形成等臂染色体，核型为46，XX（或XY）-21，+ t（21q；21q）。,易位型先天愚型,五、注意事项,（1）胰蛋
11、白酶浓度和处理时间随气温高低有所不同。一般规律是标本存放时间越长，在胰蛋白酶当中处理时间越长。太新鲜的标本，染色体会出现毛茸现象。片龄很长的标本往往会导致斑点状的染色体。 （2）胰蛋白酶温度：温度越高，反应的速度就越快，一般是室温，但温度必须稳定至少20min。 （3）胰蛋白酶处理的时间：如果细胞呈紫蓝色，说明胰蛋白酶的作用时间不够，如果细胞呈桃红色，说明作用时间刚好。,综上总结给与遗传建议： 若出现上述情况则为21三体综合症。就目前的医疗水平而言，21-三体综合征既没有方法治愈也没有方法预防，建议该孕妇不宜生育该患儿。如果核型为46，XX(XY) 则没有21三体综合症，可以生下小孩。,thank you,
