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1、临床微生物标本的正确采集运送和保存,凉州医院检验科微生物室,临床微生物实验室的任务,就是对临床送检的感染性标本进行病原菌的定性或定量分析，为患者的治疗提供帮助。 只有分离到病原菌，才有可能进行药物敏感性试验，临床医生才能够根据药敏结果进行针对性治疗。,微生物检验是一个多步骤的综合分析过程,从标本的采集到病原体的镜检、培养、鉴定、药物敏感性试验，乃至最终的结果判读和解释，每一步都可能影响最终检测报告的准确性。 因此为有效控制分析过程中的各种影响因素，不断提高微生物检验的质量，则需要对微生物检验过程的分析前、中、后三阶段进行全面质量管理。 没有质量保证的检验不仅不能为临床诊断和治 疗提供可靠的信息
2、依据，甚至会误导对疾病 的诊断和治疗，给病人带来痛苦和损失。,分析前的内容,患者的信息收集 医师开检验医嘱 样品收集 样品识别、标记、运送、处理和存储等 直至实验室样品处理过程。当标本送达实验室时，要检查标本和申请单（以确保符合标本接受的要求），并在申请单上记录送检时间和日期。,标本采集和运送,标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关 键！ 但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成,所以也是最不容易做好的事,而且不知道问题所在之处，由此引发的最主要后果是阳性率下降，这也是临床医生最不能接受的问题.,样本收集-安全性 （医务人员必须防止接触感染病源体）,样品必须在防漏、密封的容器中运
3、送； 注射器必须去掉针头并加盖； 必须包括患者识别/条形码标志信息； 与样品伴随的标签、要求必须置于防渗、可封口的单独得塑料袋内。,标本拒收的原则,不正确的转运温度 不正确的转运工具 延长转运时间 未贴标签或错贴标签的标本 容器被压碎或有裂缝,标本泄漏 有明显污染,干涸的标本 标本量不够，小时重复的标本（血液培养除外）,标本正确采集 运送和保存的意义,严重影响临床微生物实验室对感染标本中致病菌分离培养的阳性率,影响医院感染病原菌的监控,影响临床诊断,影响抗菌药物的合理选用和降低耐药菌的产生,影响感染的治愈率,对预测或及时发现医院感染的暴发流行、杜绝感染蔓延、研究医院感染的发病机制、制定有效的医
4、院感染控制措施等，均具有十分重要的意义。,标本采集和运送的基本原则,采集的时间应在疾病早期、急性期和症状典型时，尽量在抗菌药物使用前采集标本。,发现医院感染应及时采集微生物标本作病原学检查，二、三级医院微生物标本送检率不应低于70%。,标本采集时应严格执行无菌操作，必须从实际感染的部位得到临床标本，减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。,必须取得足够量的标本，以满足培养的要求。材料不足可能产生假阴性的结果。,以棉拭采集的标本如咽拭、肛拭或伤口拭子，立即送检。,盛标本的容器须用商品无菌盒或经灭菌处理，但不得使用消毒剂。送检标本应注明标本来源和送检目的。,所有标本采集后立即送至实验室，最好在2h以
5、内。床旁接种可提高病原菌检出率。,送检标本必须注明姓名、年龄、性别、采集日期、临床诊断和检验项目，使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明选用何种抗菌药物。,血液与骨髓标本的采集,通常采血部位为肘静脉。当肘静脉不明显时,可采用手背部、手腕等处静脉。幼儿可采用颈外静脉采血.切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。,采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养基前，应严格消毒血培养瓶口,注入后轻轻摇匀,动作需快,防止血液凝固。血培养瓶应在避光室温保存，不必置冰箱保存。,皮肤消毒程序,严格执行三步法： 1)70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上。 2)1%2%碘酊作用30s
6、或10%碘伏60s，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上。 3)70%酒精脱碘。对碘过敏的患者,用70%酒精消毒60s，待酒精挥发干燥后采血。,培养瓶消毒程序,70%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，作用60s。 用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞子表残余酒精，然后注入血液。 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行第二次穿刺，应换针头）直接注入血培养瓶，或严格按厂商推荐的方法采血。 血标本接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。,对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之0.51h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。 特殊的全身性和局部感染患者采血培养的建议.可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症
7、、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎 ，应在不同部位采集23份血标本。不明原因发热，如隐性脓肿，伤寒热和波浪热，先采集23份血标本,2436h后估计体温升高之前（通常在下午）再采集2份以上。,应在病人发热初期或寒战、发热高峰时采集.每次成人5-10ml，婴幼儿1-5ml，培养基与血液之比10：1为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。,采血量,怀疑菌血症应尽早采血，体温上升阶段采血可提高阳性率，但要防止因等待而延误时机。对已用抗菌药物而又不能停药者，可在下次用药前采血。,每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与皮肤污染菌。,怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁菌病的病人
8、,一般一日应作三次培养,必要时追加次数.,对疑为细菌性骨髓炎或伤寒的病人，在病灶部位或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培养。,瓶数及血量,结论1： 绝对不能只用一瓶, 3-5套血培养为好寒战升温之间应采血20毫升分装两个瓶内 先分配在需氧瓶10ml，然后剩余的入厌氧瓶内，因为真菌、绿脓杆菌、窄食单胞菌只长在需氧瓶内。 结论2：2-5天内不必重复取血 结论3：只有可疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关sepsis时，才要有间隔地(1h至24h)几次取血监测、捕捉、指导治疗；特别是金葡菌时。,接种厌氧血培养瓶的意义,培养严格厌氧菌 部分兼性厌氧菌在厌氧瓶生长更好或更快 早期报告部分
9、血培养结果 只做需氧瓶，至少降低1-3%的血培养阳性率,尿液标本的采集,尿液标本的采集及运送,有下列情况之一者，应进行尿培养 有典型的尿路感染症状； 肉眼脓尿或血尿； 尿常规：白细胞和/或亚硝酸盐阳性； 不明原因的发热，无其他局部症状； 留置导尿管的病人出现发热； 膀胱排空功能受损； 泌尿系统疾病手术前。,清洁的中段尿：是最常用的方法。,女性,采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口,男性,必须翻转包皮冲洗，用0.1%新洁尔灭消毒尿道口，灭菌纱布擦干后收集尿液,导尿管导尿 优点 减少污染该程序可能导致尿道细菌落进入膀胱并增加医源性感染的危险。不推荐该方法。,留置导尿者,用碘酒
10、消毒尿道口处的导尿管壁，用空针细针头斜穿管壁抽吸尿液,消毒后解开接口，弃取导尿管前段尿、留取无污染的膀胱内尿液数毫升送检 注意不能从集尿袋的下端口采集尿液，尿袋内尿液不能用于培养，导尿管末端的尿液也不能用于培养；长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。本法滞留导管会使膀胱带有细菌，尽可能不采用。,不可从集尿袋的下端管口留取标本,尿厌氧菌培养,采集困难的婴幼儿中段尿 小儿收集包；对于无自控能力的小儿可用收集包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以在检验结果阴性时才有意义。如果结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复检。,培养结果与病情
11、不符时,可经耻骨上皮肤穿刺采集无污染的膀胱内尿液,送检标本以晨起第一次尿液为佳,用无菌容器留取中段尿5-10ML立即送检。不能立即送检者，室温保存不应超过2小时，4冰箱保存不超过8小时。 。怀疑为尿道炎时，应收集最初3-4ml尿液。,室温耽搁稍久 尿内细菌明显增多 影响病原菌与污染菌的区别,标本的验收,1.申请单验收：检查申请单是否完整，申请单除患者的基本信息外还应包括标本的收集时间，收集方式，是否以用抗生素。对申请单不完整应与临床医生联系；2.标本的验收：检查标本标示是否与申请单相符；检查容器有无溢漏，渗出，是否加盖。检查送检时间是否超过规定的标本保存时间。对标示不符，送检容器不合格，送检时
12、间超过规定时间的标本应注明原因，退回，要求重新留取。,痰液标本的采集,清水反复漱口 用力咳嗽从呼吸道深部咳出 置无菌容器,痰量少者用雾化吸入导痰,咳痰,对于小儿可轻压胸骨柄上正方以诱导咯痰,咳痰乏力或昏迷的病人,吸痰管经鼻腔或口腔抵达气管腔内吸引痰液,纤维支气管镜直接在病灶部位采集,但不可完全避免咽喉部正常菌群的 污染,双侧肺部感染伴人工气道 （气管切开或气管插管）患者,吸痰管经人工气道估插至肺支气管水平吸引,重症、难治、或伴免疫抑制、或疑似厌氧菌引起的医院内肺部感染,环甲膜,经气管吸引,经胸壁穿刺肺吸引,经纤维支气管镜,人工气道作防污染双套管毛刷,人工气道防污染支气管肺泡灌洗,标本应尽快送检
13、，不能及时送检者室温保存2h 暂存4冰箱保存24h一般每天只需做1次。,室温搁置数小时 定植菌呈过度生长: 1.送检目的不合适者，如咽拭子、咳痰、吸出的分泌物做厌氧菌培养无意义，应拒收。2.申请单填写应完整无误。3.痰标本呈水样或唾液样，有明显食物残渣、灰尘纸屑者拒收。4.涂片白细胞和鳞状上皮细胞计数：白细胞10/ 低倍镜或鳞状上皮细胞25/低倍镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。5.标本容器必须符合规定，溢漏、无盖着拒收。6.送检时间超过2h拒收。7.同时、同部位或同一天两份相同检测的标本，应与申请医师协商处理。,伤口 烧伤创面 脓液的采集,无菌生理盐水擦洗病灶表面,用无菌棉拭取病灶
14、深部的脓液和分泌物以无菌拭子采取脓液或病灶深部的分泌物置于无菌容器送检；注意尽量取化脓组织与正常组织交界处的脓汁，因为脓汁中心的细菌以大部分死亡，交界处的活菌较多，会提高阳性率。慢性炎症由于污染严重，可采取感染部位的组织，研磨后接种。,置无菌容器或运送培养基内送检,对已破溃的脓肿,瘘管则以无菌方法采取组织碎片,穿刺或引流。一般先用穿刺或手术引流的方法采集。采集前先用2.5-3%的碘酊和75%酒精消毒皮肤后无菌注射器抽取脓液送检,也可于切开排脓时用无菌棉拭采样,对未溃破的脓肿,对防线菌的标本,常用无菌棉拭积压瘘管,选取流出脓汁中的硫磺样颗粒盛于无菌容器内送检,也可将灭菌纱布塞入瘘管内,次日取出送
15、检.,对范围较大的烧伤创面,应从不同部位采集多份标本送检.采集部位应首先清楚污物,以碘酒、酒精消毒皮肤,防止表面污染菌混入标本影响检测结果. 1.采集前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂，应在用药之前采取。2.对大多数开放伤口，采集前应清创，去除表面菌群。3.除非有渗出物，干燥结痂伤口一般不做培养。4.闭合脓肿应取渗出物和脓肿壁标本，不用拭子采集。开放性脓肿处理同开放伤口。5.不要仅仅送检脓液，应在病灶活动区域或基底部采集标本，最好是组织标本。,标本验收与拒收,1.检查盛装标本的容器是否符合无菌要求，是否有残漏、破裂或明显污染. 2.检查盛装标本的容器标签与申请单是否相符，送检目的不要只写“伤口
16、”应注明解剖来源自闭合伤口还是开放伤口. 3.检查标本是否适量，是否及时送检。送检时间过长者应拒收。 4.标本涂片革兰染色若发现上皮细胞，提示标本已被污染，一般不适合再做培养。 5. 未写部位的拒收。,粪便标本的采集,排便后,挑取有脓液、粘液部分的粪便约2-3g（液状粪便则取絮状物）盛于无菌容器送检,如为稀便,可直接收集1-2ml于无菌容器中,及时送检.,自 然 排 便 法,宜选用肛拭采集,对不易获取粪便患者或婴幼儿,将拭子前端用无菌甘油水湿润后插入肛门约4-5cm（幼儿约2-3cm）处，轻轻旋转擦取肠表面粘液后退出置无菌容器或运送培养基送检,操作中应严格执行无菌技术 (1)粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2h。如不能及时送检可加入pH70的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24h。使用改良Cary-Blair培养基时，不能运送培养志贺氏菌的标本。(2)直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2h。(3)高度怀疑霍乱弧菌感染的标本运送必须符合特殊标本的安全要求。(4)直肠活检标本用粪便容器送检，内盛少量无菌生理盐水以防止沉淀。,
