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1、通过必修课的学，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？,通过必修课的学，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？,营养繁殖,扦插 嫁接 压条,通过必修课的学，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？,组织培养,营养繁殖,扦插 嫁接 压条,扦插,扦插,嫁接,扦插,嫁接,压条,植物组织培养简介,植物组织培养是二十世纪发展起来的新技术，近三十年来由于组织培养基础理论研究的深入，发展极为迅速，发表的文献浩如烟海，几乎以植物为研究对象的各个分支学科都在广
2、泛进行组织培养。,是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。,组织培养,一、植物组织培养的基本过程,植物组织培养的原理是什么？,思考,植物组织培养的原理是什么？,植物细胞具有全能性，即已分化的细胞，仍具有发育成完整个体的潜能。,思考,离体的植物器官、组织、细胞,脱分化,愈伤组织,再分化,根 芽,植物体,植物组织培养的基本过程,愈伤组织,二、影响植物组织培养的因素,不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同,1. 外植体的选取,大量元素： C、H、O、N、K、Ca、Mg、S 微量元素： B、Mn、Cu、Zn、Fe、M
3、o、I、Co 有机物： 甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素： 生长素、细胞分裂素、赤霉素等,2. 培养基的配制(MS培养基),MS固体培养基成分及比例,阅读课文，思考以下问题,1. 同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。,阅读课文，思考以下问题,1. 同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,有利于细胞分裂，但细胞不分化,细胞既分裂也分化,分化频率提高,3.植物激素,低： 利于芽的分化，抑制根的形成,适中： 促进愈伤组
4、织的生长,高： 利于根的分化，抑制芽的形成,生长素/ 细胞分裂素,3.植物激素,思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？,高 利于根的分化，抑制芽 的形成,适中 促进愈伤组织的生长,思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？,生长素/ 细胞分裂素,在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：,4. 消毒,在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：,4. 消毒,植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各种营养物质，这些营养物质同样为微生物提供了适合的营养。在这种培养基上，微生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力，它们生长、繁殖得更快，而且会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。,
5、菊花： H=5.8 温度控制在1822 每日光照12h,5. H、温度、光照,三、实验操作,AVSEQ09.DAT,制备MS固体培养基,外植体消毒,接种,培养,栽培,移栽,三、实验操作,制备MS固体培养基,外植体消毒,接种,培养,栽培,移栽,冲洗酒精无菌水冲洗氯化汞无菌水冲洗至少三次之上,三、实验操作,1. 高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？,思 考,此时的组织或细胞是离体的，不能体现其整个植物体的光能自养,细胞所生活的环境必需是液体有机物的营养环境。,1. 高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？,思 考,2. 培
6、养过程中为什么需要进行光照？,思 考,培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程。,2. 培养过程中为什么需要进行光照？,思 考,3. 在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,培养基的灭菌 （高压蒸汽灭菌） 外植体的消毒 （酒精、氯化汞）,3. 在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,培养基的灭菌 （高压蒸汽灭菌） 外植体的消毒 （酒精、氯化汞） 接种的无菌操作 （酒精、酒精灯灼烧）,3. 在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,培养基的灭菌 （高压蒸汽灭菌） 外植体的消毒 （酒精、氯化汞） 接种的无菌操作 （酒精、酒精灯
7、灼烧） 无菌箱中的培养；,3. 在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,培养基的灭菌 （高压蒸汽灭菌） 外植体的消毒 （酒精、氯化汞） 接种的无菌操作 （酒精、酒精灯灼烧） 无菌箱中的培养； 移栽到消过毒的环境中生存一段时间。,3. 在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,植物组织培养过程示意图,上面的示意图中还有什么地方不够完善的？,结果分析与评价,植物组织培养过程示意图,上面的示意图中还有什么地方不够完善的？,没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。,结果分析与评价,指在组织培养过程中，培养容器内滋生菌斑，使培养材料不能正常生长发育，从而导致培养失败的现象。,一、污染的定义,二、污染
8、原因,1. 细菌污染：菌斑呈粘液状，界限比较明显，一般接种后12天即能发现。主要是大肠杆菌和链球菌,2. 真菌污染：菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子。接种后310天才能发现。主要是霉菌污染。,正常苗,污染苗,1.外植体带菌,2.培养基及接种器具灭菌不彻底,3.接种操作时带入,4.环境不清洁,三、污染途径,（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁,四、污染的预防措施,（一）防止外植体带菌,1. 选择好外植体采集时期和采集部位外植体采集以春秋为宜优先选择地上部分作为外植体阴雨天勿采，晴天下午采采前喷
9、杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋,2. 室内或无菌条件下进行预培养,（一）防止外植体带菌,3. 外植体消毒,（一）防止外植体带菌,1.分装时，注射器勿与瓶接触，培养基勿粘瓶口 2.检查封口膜是否有破损,（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌,3. 扎瓶口要位置适当、松紧适宜 4. 保证灭菌时间和高压灭菌锅内温度,（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌,5.接种工具用前彻底灭菌 6.工作服、口罩、帽子等布质品定期进行湿热灭菌,（四）保证环境的清洁,1.污染瓶经高压灭菌后再清洁,2.接种环境定期熏蒸消毒、紫外灯照射或用臭氧灭菌和消毒,3. 定期对培养室消毒、防止高温,(1)快速。 常规的方法一棵花卉一年一般只能生
10、产几株或几十株，但用组织培养的方法则每年可以繁殖出几万甚至数百万的小植株。 (2)全年生产。花卉组织培养是在实验室中进行，因条件可控，所以不受季节限制，可以全年进行连续生产。而常规的无性繁殖则受季节限制，只能在花卉生长季节进行繁殖。,组织培养优点,(3)经济效益高。花卉组织培养快速繁殖所需要的空间小，在一个200平方米的培养室内一年可生产试管苗上百万株。 (4) 繁殖的种苗与母株有相同的遗传基因。可让优良的品种不断地延续。,1. 在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？,1. 在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？,植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。,2. 在选取菊花茎段的时候，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？,外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。,2. 在选取菊花茎段的时候，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？,
