血站核酸检测系统确认-曹谊

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1、核酸检测系统确认 （苏州市中心血站苏州市中心血站 苏州市十梓街苏州市十梓街355号号 215006） 曹谊曹谊 联系电话：联系电话：13962122981 2015-5-11 确认目的确认目的 实现血液检测过程控制要求，血液筛查实验室引入NAT 检测过程后，需保持原有检测过程稳定性、结果时效性和准确性不受影响，保证新建NAT实验室的检测过程符 合国家法规和技术标准的要求，并且与现有检测流程协 调一致。确保最大限度满足血站血液检测的常规要求和应急要求，防止生物污染带来的严重后果。 确认范围确认范围 包括检测过程确认和相关延伸确认。检测过程确认包括 检测前、中、后过程中的标本、设施、设备、计算机系

2、 统的适用性确认和检测结果的准确性确认。应涵盖从实 验室设计、检测系统选择到实验室运行效果监控全过程。相关延伸确认包括实验室人员、文件以及NAT实验室 建立所需要的组织机制。以上不包含血液检测程序以上不包含血液检测程序 NAT 检测系统确认检测系统确认 确认涉及相关方 血站的管理者、实验室人员、血站其它部门、相关设备 、试剂和耗材的供应商、法规部门和室间质评提供者等。 确认依据 血站质量管理规范、 血站实验室质量管理规范、 实验室生物安全通用要求(GB19489-2008)、 生物安全实验室建筑技术规范(GB50346-2004)、 全国艾滋病检测技术规范(2009)、 血站核酸检测试点实验室

3、技术指导意见2010 NAT 检测系统确认检测系统确认 确认可接受标准确认可接受标准 1) 人员经过培训，经考核评估证明能够胜任。职责清晰。 2) 实验室具有覆盖NAT检测全过程的质量文件体系，和实验室其它检测过程接口明 确顺畅。 3) 实验室各种设备的数量和状态能够满足实验室常规状态使用和应急状态使用。 4) 试剂、质控品和试验耗材来源稳定。试剂运输和储存符合厂商要求，能够满足实验 室应急使用。 5) 标本质量符合NAT检测要求。试验的分析灵敏度、特异性等试验特性满足试剂说明 书的要求。 6) LIS系统满足NAT 检测过程的功能需求。与MIS信息传递无误顺畅。 7) 实验室设计符合基因扩增

4、实验室的设计原则，符合血站核酸检测试点实验室技术 指导意见的要求。实验室消毒措施能有效防止交叉污染。 8) 记录体系满足所有可回溯性要求。 9) 具有可指示实验室质量体系运行效果的监控指标。 10) 参加国家级室间质评活动且成绩合格。 确认方法确认方法 预确认、同步确认、回顾确认和再确认 NAT 检测系统确认检测系统确认 1.制定核酸血液筛查策划制定核酸血液筛查策划 日日 期期 内内 容容 负责人负责人 实施人实施人 确认人确认人 2013年年5月月6日日-12日日 1. 落实检测场地 2. 论证仪器试剂及相关事宜 站办 检验科 总务科 检验科 站领导站领导 13日日-26日日 1整理规划场地

5、 2试剂仪器招标 总务科 检验科 总务科 检验科 分管分管 站长站长 27日日-6月月9日日 1实验室改造 2相关备品添置与应用 总务科 检验科 总务科 分管分管 站长站长 10日日-30日日 1设备安装确认 2软件安装调试 3. 设备运行性能确认设备运行性能确认 4核酸检测样本采集，运送，样本处核酸检测样本采集，运送，样本处 理理 流程讨论确认流程讨论确认 5. 检测流程，检测模式与结果发布确认检测流程，检测模式与结果发布确认 6编制相关检测程序文件与SOP 检验科 总务科 检验科 检验科 7月月1日日-14日日 1核酸检测相关培训与考核 2试运行 3核酸检测过程确认 检验科 检验科 分管分

6、管 站长站长 7月月15日日 正式开展检测正式开展检测 审批审批 核酸血液筛查进行时间表：核酸血液筛查进行时间表： 2.实验室改造实验室改造 确认项目名称确认项目名称 核酸（罗氏核酸（罗氏S201）血液筛查系统确认计划）血液筛查系统确认计划 确认目的 罗氏201核酸血液筛查系统（设备、试剂 与质控 ）进行确认 和评估， 满足检验科核酸检测要求 确认内容 1 、资质确认 （总务科负责） 1 、生产商资质 2、 代理商资质：生产商具备的证明，营业执照， 代理授权书， 药品经营许可证 2、安装确认 （总务科与 厂 家负责） 1 、安装环境确认 2、 、开箱检查 3、主机与配件说明书的检点、清点 4、

7、Hamilton自动混样仪、COBAS AmpliPrep全自动核酸提取仪、COBAS TaqMan 荧光PCR扩增检测仪、混样及数据管理服务器的安装报告 3、使用性评估 （检验科负责） 1 . 罗氏S201核酸血液筛查系统（设备）运行确认，性能确认。 2. MPX1.0试剂性能验证。 3. 罗氏S201核酸血液筛查系统（设备、MPX1.0试剂与质控）操作规程 与日常维护，常见提示及常规处理。 4. 确认罗氏S201核酸筛查系统与LISWELL相关软件安装。 5. 穿越系统,海深威系统核酸MPX1.0试剂检测操作规程。 6. 培训考核与上岗证。 7. Hamilton自动混样仪、COBAS A

8、mpliPrep全自动核酸提取仪、COBAS TaqMan 荧光PCR扩增检测仪、MPX1.0试剂、核酸室内质控品说明书。 检验科确认计划检验科确认计划 3.制定确认计划制定确认计划 3.1、设备安装确认设备安装确认 3.2、罗氏、罗氏201核酸血液筛查系统设备校验确认核酸血液筛查系统设备校验确认 S201S201全自动核酸检测系统机器主要性能参数标准全自动核酸检测系统机器主要性能参数标准 混样混样Hamilton STARHamilton STAR 移液通道在机器左右侧对于底部平台的相对高度差不大于 5 counts（1 count0.0107222mm）。 所有移液通道在前后方向上运动时左

9、右偏差不大于5 counts。 单个移液通道在垂直及水平方向上偏差不大于20 counts。 所有移液通道的压力传感器检测通过无报错。 所有通道移液精度，用专用天平测试，1000uL时精准度误差不大于5， 重复性误差不大于1.5 50uL时精准度误差不大于5，重复性误差不大于2.5。 提取提取COBAS AmpliPrepCOBAS AmpliPrep 双通道移液精度，用专用天平测试，2500uL时精准度误差不大于3，重复性误差不 大于3 50uL时精准度误差不大于5，重复性误差不大于3。 双机械臂在左右及前后方向上皮带频率检测，在特定位置时皮带频率应在332Hz。 需加热位置温度测试，三个特

10、定点测试结果需在361.3，601.8，802.8。 扩增扩增COBAS TaqManCOBAS TaqMan 扩增过程中温度监控，检查60及95两点，误差分别应在58.160.9和92.5 96.9范围内。 光路检测信号值需通过专用软件分析，光强在15150之间，重复性误差不大于2 3.3、罗氏罗氏201核酸血液筛查系统运行确认核酸血液筛查系统运行确认 、性能确认、性能确认 重复性验证：（重复性验证：（MPX2.0MPX2.0） 样本：样本：32个血浆样本组成样本盘，共2套。 分组分组：每组NC 2例，HIV-1 M、HIV-1 O、 HIV-2、HCV和HBV 样品各6例 阳性浓度设置：阳

11、性浓度设置：0.5倍LOD 2例、1.0倍LOD 2 例和3.0倍 LOD 各2例。 操作人员：操作人员：3名 实验室：实验室：3个 S201S201设备：设备：3套 测试方法：测试方法：各由一位操作人员使用一台 cobas s 201仪器系统 进行实验，每天使 用3 个批号 的试剂测试2套样本盘，分两 轮实验完成，每个地点连续测试5天。 测试总数测试总数：每个浓度共测试180（23352=180） 结论：结论：这些结果经统计学方法分析后出，在不同的实验条件下 （试剂批号、操作人员、时间、测试地点），针对五种被测物， cobas TaqScreen MPX二代检测试剂在cobas s 201系

12、统上具 有可重复性。 重复性验证：（重复性验证：（MPX1.0MPX1.0） 样本：样本：NC ，HIV-1 M、HIV-1 O、HIV-2、HCV和HBV阳性 样品 阳性浓度设置：阳性浓度设置：0.54倍LOD和3倍LOD 分组：分组：每组2例阴性，2例阳性，共4个样本。 操作人员：操作人员：3名 实验室：实验室：3个 S201S201设备：设备：3套 测试方法：测试方法：在每个地点对4个小组和4个对照组使用3种试 剂盒批号进行5天测试 测试总数测试总数：每个浓度共测试180（4335=180）次， 共2160次（12180=2160）测试 分析方法：分析方法：所有合格的可重复性数据均通过计

13、算每个小 组成员中反应性测试结果的百分数而获得。数据针对试 剂盒批次和地点/操作人员进行分析。 结论：结论：该研究阐明了cobas TaqScreen MPX测试在不同 批次试剂盒和测试地点/操作人员之间具有重复性。 交叉反应验证：（交叉反应验证：（MPX1.0MPX1.0） 样本：样本：17种微生物组成的样本盘（12种病毒培养株，4 种细菌菌株和1种酵母菌株） 样本数量：样本数量： 测试方法：测试方法：微生物加入到病毒阴性的正常人血浆中，稀 释后终浓度为3.0倍LOD，用MPX1.0检测试剂进行检测。 结论：结论：1.1.加入微生物均为阴性反应，被检测的微生物与 MPX1.0试剂之间没有交叉

14、反应。 2.2.对于所有加入了HIV-1 M组、HIV-1 O组、HIV- 2、HCV 或HBV的微生物样本，结果均为有反应阳性。所 检测的微生物不会对cobas TaqScreen MPX1.0测试产 生干扰。 交叉反应验证：（交叉反应验证：（MPX2.0MPX2.0） 样本：样本：20种微生物组成的样本盘（13种病毒培养株，6种细菌 菌株和1种酵母菌株） 微生物浓度：微生物浓度：浓度为106病毒颗粒、拷贝或PFU/mL 样本数量：样本数量： 测试方法：测试方法：微生物加入到病毒阴性的正常人血浆中，稀释后终 浓度为3.0倍LOD，用MPX2.0检测试剂进行检测。 结论：结论：1.1.加入微生

15、物均为阴性反应，被检测的微生物与MPX2.0 试剂之间没有交叉反应。 2. 。对于所有加入了HIV-1 M组、HIV-1 O组、HIV-2、 HCV 或HBV的微生物样本，均获得了反应性结果。被检测的微 生物对cobas TaqScreen MPX2.0检测试剂没有干扰。 3.4、MPX试剂性能验证试剂性能验证 灵敏度验证：（灵敏度验证：（MPX1.0） 样本：样本：WHO的HBV国际标准（NIBSC code 97/746）、 WHO的HCV 第二版国际标准（NIBSC code 96/798）， HIV-1 M组、HIV-1 O 组和HIV-2的Roche标准，Roche HIV-1 M组的标准品具有溯源 性。HIV-1 O组和HIV-2病 毒原种的浓度值由供应商给出提供，该浓度是以电子 显微镜颗粒计数为基础的。当时尚无关于HIV- 1 O组和 HIV-2