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1、如何写好课题申请书 广西医科大学科技处 张海英,常见的科研课题申报,广西科技厅 广西自然科学基金（发展计划处，基础及应用基础类） 面上项目（包括回国基金、青年基金）。 广西科技项目（政策法规与社会发展处，应用类） 广西教育厅 重点项目（重点实验室、重点学科） 一般项目 立项项目。 卫生厅：重点项目、自筹项目。 国家自然科学基金,选 题,符合科学基金的资助范围和学科性质（广西自然科学基金、国家自然科学基金等项目需仔细阅读指南），科学意义与学术价值，创新性。 上：原有研究的深入和拓展（扬长避短）。 中（没有基础）：大量阅读文献，仔细分析推敲，找出薄弱点。新颖是关键。 选题之忌: 重复研究： 不完全
2、了解前人的工作； 不阅读项目指南,不查阅资助项目汇编 研究内容甚至项目名称都与前一两年资助项目雷同，无创新性。 打一枪换一个地方。,简表填写（教育厅课题为例）,少或不用缩写词;明确,贴切;忌抽象和空泛。最好让别人一看题目就能知道你做哪方面的研究、研究对象、解决的问题。 例1：蛋白磷酸酶4在胰岛素抵抗中的作用研究蛋白磷酸酶4在TNF-诱导的胰岛素抵抗中的作用与调控机理研究 例2：核糖体蛋白L22在肺动脉高压发病中的作用研究核糖体蛋白L22参与调控人肺动脉阻力血管平滑肌细胞异常增殖的分子机制研究,题 目,摘要及主题词,想让什么样的专家评您的“申请书”？ 例1：肺动脉高压；人肺动脉平滑肌细胞；核糖体
3、蛋白L22人肺动脉平滑肌细胞；核糖体蛋白L22 ；分子机制；基因芯片 例2：心肌梗塞；心功能不全；热休克蛋白；血管生成心肌梗塞；热休克蛋白；血管内皮细胞；转基因；信号传导,主题词,摘 要,假设评审专家没有足够的时间看后面的内容，也能把握整个标书的主要内容。 400字以内，概述研究方法、内容、目标、科学意义:问题提出（即背景,12句）,研究内容为主（要体现研究思路）,意义（12句,要明确、具体）。如：“用方法（手段）进行研究，探索/证明问题，对阐明机制揭示规律有重要意义，为奠定基础提供思路”。,摘 要（例1）,胰岛素抵抗状态下肝糖异生异常是导致T2DM空腹高血糖的主要原因，其受胰岛素信号和胰高血
4、糖素信号通路调节，PGC1/FOXO1在此过程中起重要作用。本项目组前期工作中通过PGC1转录活性的高通量细胞功能筛选发现新基因CL91具有抑制效应，更重要的是其也能抑制肝糖异生限速酶PEPCK的转录活性，依赖于IRS/CRE顺式元件负调控PGC1的活性是可能的参与机制。本研究拟通过原代细胞和T2DM小鼠，从分子水平、组织水平和动物体内实验，探讨正常和胰岛素抵抗状态下新基因CL91影响肝糖异生的机制，以及在胰岛素信号和胰高血糖素信号调控下，新基因CL91和肝糖异生的关系，并阐明PGC1/FOXO1在此过程中的作用机理。本研究以PGC1/FOXO1相互作用为切入点，旨在研究胰岛素抵抗状态下新基因
5、CL91对肝糖异生的影响以及同空腹高血糖的关系，为进一步发掘CL91的基因功能以及T2DM的临床应用研究提供线索。,摘 要（例2）,胰岛素抵抗在2型糖尿病及其并发症的发病过程中起重要作用。炎性因子TNF-是导致胰岛素抵抗的重要因素之一。我们前期的研究显示，TNF-通过激活NADPH氧化酶引起氧化应激，进而活化JNK及NFB信号通路，导致胰岛素抵抗。最近研究表明，TNF-可增强蛋白磷酸酶4（PP4）的活性，而PP4是JNK及NFB信号通路活化的新的调节因子。但PP4在TNF-诱导的胰岛素抵抗中的作用尚未见报道。本项目首次探讨PP4在TNF-诱导的胰岛素抵抗中的作用与调控机理，内容包括：（1）观察
6、在TNF-诱导的肝细胞胰岛素抵抗过程中，PP4表达及活性的变化；（2）分析PP4表达及活性变化对胰岛素抵抗的影响；（3）研究TNF-对PP4活性调节机制；（4）探讨PP4作用机理，即所涉及的信号传导途径。本研究从PP4这个新视点为揭示胰岛素抵抗的发生机制奠定基础，为2型糖尿病及其并发症的防治提供新的思路。,摘 要(例3),RPE细胞的增殖和迁移是增生性玻璃体视网膜病变(PVR)主要病理过程, HSP70、HSP90与PVR的多个重要分子能相互作用，我们前期实验也证实抑制HSP90可以抑制RPE细胞的增殖。TTC36是我们实验室克隆的人全长新基因，经酵母双杂交、GST PULLDOWN和荧光共定
7、位等结果显示，它可特异性和HSP70、HSP90相互作用，这提示在PVR中它可能参与了HSP70和HSP90的活性调控。本研究拟在前期工作基础上，采用细胞水平的基因超表达和RNA干扰等技术，观察TTC36过表达或表达沉默对RPE细胞的影响，并运用二维电泳、基因芯片方法对TTC36的生物学功能进行深层次的分析，进而通过建立PVR兔模型，探讨TTC36与HSP70、HSP90相互作用对PVR发生发展的影响，以及具体作用的机制，从而为探索PVR的发病机制和找到新的治疗靶点奠定基础。,摘 要(例4),骨桥蛋白（osteopontin,OPN）是一种分泌性钙结合糖硫酸化蛋白，在肿瘤的发生发展中起到重要的
8、促进作用。在胶质瘤组织中OPN存在多种mRNA的剪接变异体，其表达模式及功能目前仍缺乏深入研究。本研究拟通过检测临床标本中OPN不同剪接变异体的表达并结合病人资料分析OPN各剪接变异体与肿瘤病理级别及病人预后的关系，同时构建靶向OPN的慢病毒siRNA表达载体及OPN各剪接变异体的突变型慢病毒表达载体，混合导入胶质瘤细胞中，在抑制内源性总OPN基因表达的同时特异性地回复表达某一种OPN的剪接变异体，观测OPN不同剪接变异体对肿瘤细胞生长的影响，并探讨其上下游信号通路调控蛋白的表达差异，从而阐明胶质瘤中OPN各剪接变异体的表达与肿瘤病理级别及病人预后的关系，及其的功能、相应的调控机制和产生的可能
9、原因，同时寻找基于OPN及其相关信号传导通路的人脑胶质瘤基因治疗的最优化策略。,摘 要(例 5),近年来研究发现原发性高血压（EHT）是一种慢性低度炎症性疾病，且为环境因素与遗传因素长期共同作用的结果 。本课题拟采用病例对照研究方法，收集原发性高血压（EHT）患者和正常对照人群各1000例，对研究人群的盐摄入情况、饮酒、吸烟、营养状况、血压、血脂及工作压力等情况进行详细调查，采用ELISA法检测血清中Toll样受体2、4表达并采用高通量的TaqMan MGB荧光定量实时PCR技术对Toll样受体2和4（TLR2和TLR4）基因进行基因分型，以探讨高血压患者TLR2、4表达情况、TLR2和TLR
10、4基因多态性与原发性高血压的关联，从而研究原发性高血压炎症相关基因-基因、基因与环境的交互作用，为进一步揭示和验证原发性高血压的炎症分子机制提供参考依据。,立项依据（项目的研究目的和意义）,说明要做什么？为什么要做？ 研究现状评述(国际研究现状、国内研究现状)。 分析别人工作中存在的问题，从而凝练并提出问题，阐述重要性和科学问题，解决及意义。 由已有的研究引出假设。 抓住关键点，说明自己的前期工作(在前期工作中发现了什么)。 研究思路叙述。 可能意义的分析。 小结. (重点用黑体字)。 参考文献（2030条左右） ：权威、新（近3年内，最好是当年的）、有自引。,研究内容、目标、拟解决的关键问题
11、,总体要求：范围合适;重点突出;关键问题选择准确 注意：小题大做、深做;不要大题小做、浅做。 目标：具体、明确、新颖（可以是假说）。 例： 背景： 炎症细胞产生的新因子(A)具有(离体)促心肌细胞肥大的作用。 目标： 探讨A促进心肌细胞肥大的作用及机制。 探讨心肌肥厚发病的新因子A的作用及机制。 探讨联接炎症反应与心肌肥厚发病的新因子A的作用及机制。,研究内容,研究内容：为完成本课题（论证假说）从不同方向（角度、层次）研究（紧扣目标，层次分明，突出重点，逻辑性强）。 例：1.心肌肥厚发病过程中A因子的动态变化与疾病表现关系；2.补充外源性A因子对心肌细胞肥大的影响；3.阻断内源性A因子对心肌细
12、胞肥大的影响；4.A因子发挥效应是否通过已知的心肌肥大因素；5.A因子效应的分子机制； 6.动物模型验证体外的结果。,拟解决的关键问题,完成本研究在理论上和技术上的“瓶颈”,应简述对策。 例1: 1.证明A是心肌肥厚发病的新因子是拟解决的关键问题。从分子(gain of function and loss of function)、细胞(功能)和整体(动物模型、患者)不同层面探讨。 2.另一个拟解决的关键问题是明确A因子发挥效应是否通过已知的心肌肥大因素。采用RNA干扰和激动剂、抑制剂等方法来证实。,拟解决的关键问题(例2),胡须体觉皮层局灶性脑缺血模型的建立。此模型制作技巧性较强，手术操作精
13、细，目前国内还没有应用此模型的报道。目前我们研究组成员已在美国学习掌握了此模型的制作技术。 神经干细胞移植技术要求较高，移植后存活率低是难点。我们应用robos受体抑制剂R5体外处理神经干细胞，去除抑制轴突生长的Slits/robos信号系统的作用，然后进行干细胞移植，同时结合外周胡须刺激，以期为移植的干细胞提供一个更好的生存环境，从而增加干细胞的存活率。 移植的干细胞与宿主细胞之间建立突触联系，是干细胞移植治疗最终成功的关键，也是难点。我们拟用Hoechst 33342 和GFP(绿色荧光蛋白) 双标记干细胞，再通过免疫荧光染色，直观显示干细胞与宿主细胞之间突触联系情况。,拟解决的关键问题(
14、例3),本项目基于人肝癌细胞系HepG2 的前期研究，提示新基因KL92 可能参与肝糖异生的调控，但是，原代细胞实验是否支持这一假设？本项目通过分离正常C57BL/6J 和ob/ob 小鼠原代肝脏细胞，进行体外培养；同时，构建腺病毒表达载体，转染原代细胞后，在较高的转染效率保障下，对前期肝癌细胞系中发现的现象进行原代细胞验证。 本项目目前的理论推论是基于细胞正常状态下的结果，但是在T2DM 或肝脏胰岛素抵抗的情况下，其分子作用机制有如何的变化？本项目将研究在胰岛素抵抗状态下，新基因KL92 对肝糖异生的调控功能。对于HepG2 细胞系的诱导，主要采用Glucosamine 法进行；对于原代肝细
15、胞，主要根据不同状态来源的模型小鼠进行原代细胞培养。此外，还拟通过动物水平和人体水平，比较T2DM 状态下和正常状态下，新基因KL92在不同组织间的表达差异规律，如经费支持抗体制备成功，还可通过western Blot/免疫组化方法检测蛋白水平的分布规律。本项目组中，有三位临床医师参与，能保证T2DM 患者肝组织的活检取样。 KL92 对肝糖异生的调控是否依赖于PGC1/FOXO1 分子靶点的作用，且在不同的胰岛素信号通路和胰高血糖素信号通路活化的状态下会发生什么样的变化？通过腺病毒介导的KL92 过表达或RNAi，通过设立FOXO1 组成型激活以及dominant-Negative突变体共转
16、染组（质粒构建已经完毕），通过下游效应的改变从而进行阐述。,研究方案要合理,环环相扣,设计好对照组,列出具体的方法和技术（先进、可靠、有创新）,技术路线可用流程图（即实验程序,不要太繁）。 选用的有关方法必须与研究目标直接关联，既通过什么样方法完成研究目标。 研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析其实就是把一个问题讲具体了。 简述具体的实验方法，使评审者相信申请人确实掌握了该方法。 尽可能使用经典的、公认的研究方法。如果使用的不是经典或公认的方法，解释该方法比经典方法的好处、可信度等。,研 究 方 案,该申请在理论上是否可行。 实验设计是否合理。 重点放在研究方法和研究方案的可行性上： 已掌
17、握的研究方法； 材料来源； 实验条件； 前期工作基础； 项目组人员结构。 可行性分析除了对本单位的研究实力进行恰当的分析外，最好找一家比自己单位强的合作伙伴，把他们的软硬件条件也加进去，现在的项目越来越看重多单位合作。,可行性分析,研究基础扎实：前期我们在淋巴增殖性疾病的发病机制、生物学特性及预后相关因素方面做了大量工作，为实施本课题奠定了良好的基础，包括 。 研究目标切实：本课题的相关研究是建立在我们前期研究结果之上,以及我们对miRNA如何调节基因表达和在肿瘤发生机制中作用的深入认识的基础上,确保了研究目标的切实可行。 临床标本充足：。 技术平台与硬件设施完善：已具备了良好的分子生物学和细胞生物学技术平台,例如：; 也具有先进完善的仪器设备,主要有。 团队年轻优秀：课题申请者; 课题组成员结构合理,涵盖了本课题所需的各学科的人才。 研究经费充足：申请者目前主持, 从经费上进一步为本课题顺利完成提供保证。 区内、国内及国际合作与交流：与建立并保持长期学术交流和合作关系,共同开展。,
