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1、抗核抗体检测 及其临床意义,宁波市李惠利医院 张瑾,风湿免疫性疾病诊断方法症状、体征 自身抗体 影像学检查 病理,风湿免疫性疾病相关自身抗体,抗核抗体谱（ANAs） 类风湿关节炎相关抗体(RF, 抗CCP等) 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 抗自身免疫性肌炎谱 自身免疫性肝病相关抗体谱 抗磷脂抗体谱,抗核抗体谱检测的意义,有助于弥漫性结缔组织病的分类和诊断抗Sm抗体是SLE的标记抗体；抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体；抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体； 观察疾病活动度和治疗反应抗dsDNA抗体 研究发病机理抗核小体抗体、抗dsDNA抗体,基本概念 ANA荧光核型 ANAs中的常见抗体
2、,抗核抗体,自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体 ANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱。 ANA新概念：抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体总称 某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等),ANA检测方法-IIF法,ANA滴度 ANA核型,ANA滴度的意义,结缔组织病的粗筛（1:160） 阳性标本还需进一步识别 感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性 ANA阴性基本可以除外SLE ANA滴度与疾病活动性无明确相关性,荧光显微镜下ANA的染色型别,均质型（H） 核膜
3、型（M) 斑点型（S） 核仁型（N） 着丝点型（ACA） 胞浆型（C） 混合型,均 质 型 (H),抗组蛋白 抗ds/ssDNA 抗核小体 主要出现在SLE中,均 质 型 (H),核 膜 型 (M),主要与抗dsDNA有关与抗原底物片固定方法和备制过程有关出现在SLE中 部分与抗核包膜蛋白有关抗板层素抗gp210出现在PBC中,核 膜 型 (M),与抗ENA成分有关抗Sm抗RNP抗SS-A抗SS-B 出现在SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM等,斑 点 型 (S),斑 点 型 (S),与抗核仁蛋白有关抗Scl-70抗RNA多聚酶I抗PM-Scl 出现在SSc中,核 仁 型 (N),核
4、仁 型 (N),与抗着丝点染色质有关存在于有丝分裂期 出现在SSc、CREST综合征等中,着 丝 点 型(ACA),着 丝 点 型(ACA),与抗胞浆成分有关 抗核糖体P蛋白（rRNP）：出现在SLE中 抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ 抗信号识别颗粒（SRP) 抗线粒体：出现在PBC中 抗高尔基体 抗溶酶体 等等,胞 浆 型 (C),见于 PM/DM,胞 浆 型 (C),ANA荧光核型小结,均质型（H）：像大饼，SLE相关 核膜型（M)： 像圈圈，SLE相关 斑点型（S）：像藕片，抗ENA 核仁型（N）：像纽扣，SD相关 着丝点型（ACA）：像满天星，抗ACA 胞浆型（C
5、）：像空心大饼,SLE PM/DM PBC相关 混合型：稀释后检测有助于区分,抗核抗体谱（ANAs）,ANAs,抗核不溶成分抗核可溶成分 （抗ENA）抗染色体DNA蛋白 抗核仁抗体,抗DNA抗体抗核小体抗体抗组蛋白 H1,H2A, H2B, H3,H4,抗Sm,U1RNP,SSA,SSB 抗Scl-70,Jo-1,PM-1 抗rRNP,PCNA.,dsDNA ssDNA,抗着丝点抗体（ACA),抗5sRNA,抗dsDNA检测方法,以短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法(IIF) ：1:5短膜虫或马疫锥虫的动基体内含有天然纯dsDNA，未经人工处理，不含组蛋白与 ssDNA，抗原性纯一特异。优
6、点：特异性好,抗dsDNA检测方法,酶联免疫吸附法（ELISA）: 100IU/ml优点：敏感性最高缺点：过于敏感，同时可能检测到ssDNA抗体和低亲和力dsDNA抗体,而这两种致病力均不强 放射免疫法(Farr): 20%优点：对高亲和度DNA抗体的检测优于CL-IIF缺点：具有放射性，对技术人员身体造成一定影响 蛋白印迹法（WB）缺点： dsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成ssDNA,导致假阳性结果不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果： everything is possible 至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。如：IIF法+ ELISA法,抗dsD
7、NA抗体临床意义,SLE 的血清特异性抗体 多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关 与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90可用于SLE 疾病活动期判断药物疗效观察 与SLE急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关,抗组蛋白抗体（AHA） （酶联免疫吸附法X2SD),可出现于多种结缔组织病，不具有诊断特异性SLE ：50% 活动期SLE 可达90.2%与LN相关，与SLE疾病活动性存在一定意义的相关性药物性狼疮（DIL）：90%如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等仅有AHA而无其他ANA，强烈支持DIL其他结缔组织病：23-30%如：RA、PBC、SSc等,核小体是真核细胞染色质的
8、基本复制单位，由组蛋白与DNA组成。参与SLE发病机制： 多克隆B细胞活化剂 产生ANuA，先于其他ANA 促进抗dsDNA与AHA形成 参与LN的发生,抗核小体抗体（ANuA）,抗核小体抗体临床意义,SLE标记性/高特异性自身抗体敏感性：58%-66% （优于抗dsDNA及抗Sm）特异性：98%-100% （与抗dsDNA相当） 用于SLE的早期诊断ANuA 的产生早于抗dsDNA、AHA抗dsDNA阴性者有1/41/2 ANuA阳性 与LN相关，用于SLE疾病活动性监测,ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义,抗ENA抗体 extractable nuclear antigen,可提取
9、性核抗原 成分：核酸与核蛋白，不含染色质成分 功能：参与细胞内DNA复制、RNA转录、蛋白翻译合成 来源：无种属差异，有组织不均一性 理化特性：对温度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A） 意义：抗ENA抗体是ANAs中范围最广、最为重要的一簇抗体，与疾病活动性大多无相关,抗ENA抗体检测方法,免疫双扩散法(ID) 对流免疫电泳法( CIE) 免疫印迹法(IBT) 酶联免疫吸附法(ELISA) 蛋白芯片（Protein chip）,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体,靶抗原：位于细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白， Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体,抗S
10、m：SLE的标记性抗体，是前瞻性及回顾性诊断的指标。 阳性率低： SLE （30%）抗U1RNP：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。阳性率：40 - 60%，其中SLE(30-40%) , SSc(14%) , pSS (12%) , PM/DM (15%)高滴度抗U1RNP+抗Sm- MCTD 抗U1RNP+ 抗Sm+ SLE 抗U1RNP- 抗Sm+ 实验室误差? U1RNP丢失 ?,抗rRNP抗体,靶抗原：胞浆中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白,抗rRNP抗体,SLE的高度特异性抗体，与SLE脑病相关 常在SLE活动期存在,但不会随病情的缓解
11、立即消失,可持续1-2年后才转阴。 阳性率：24% 可出现在SLE 早期（ANA及抗dsDNA阴性）,抗SSA与抗SSB抗体,靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同（细胞核内和胞浆中均可存在）pSS的SS-A存在于细胞核内SLE的SS-A存在于胞浆中SS-B主要位于细胞核内,45KD 47KD 48KD,抗SSA与抗SSB抗体,抗SS-A ：结缔组织病中出现频率最高的抗体（ 60-75%），见于pSS（75%）SLE（25%）RA（10%） SSc （24%）PBC（20%）等抗SSB：常与抗SSA相伴出现，诊断pSS更特异，见于pSS（40%）、SL
12、E （10%）临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞、平 滑肌受累、光过敏、血管炎、皮损、紫癜、淋巴结肿大、WBC减少有关ANA阴性的SCLE：常为抗SSA 抗体阳性。,抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体),靶抗原：组氨酸tRNA合成酶胞浆中的磷酸蛋白,抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体),PM/DM的标记抗体，阳性率20-30% 抗体效价与疾病活动性相关 抗Jo-1抗体综合征：急性发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎（相对轻） ,肺间质病变 其他抗合成酶抗体：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ,抗ScL-70抗体,靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物主要存在核仁中 SSc的标记抗体，
13、阳性率20-30% 多见于dSSc，病情进展快，提示预后不良 与ILD、弥漫性皮肤硬化有关，而PAH少见,主要靶抗原：着丝点蛋白-B 多见于ISSc，病程缓慢，提示预后较好 CREST综合征：软组织钙化（C）,雷诺现象（R）,食道功能障碍（E）,指端硬化（S）,毛细血管扩张（T），但并非标记抗体，也见于孤立性雷诺现象、SS、PBC、AIH等 国外文献：与PAH相关，而ILD少见中国人群：未发现与PAH相关，但ILD少见,白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义. 中华微生物学和免疫学杂志.2011（5）:452-455.,抗着丝点抗体(ACA),Take Hom
14、e Massage,ANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，尤其在靶抗原阴性时。 ANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗胞浆成分抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线粒体等。 抗核仁型抗体常与SSc有关。 抗均质型或核膜型抗体常与SLE有关。,Take Home Massage,抗dsDNA：SLE特异性抗体，与LN及疾病活动度有关，至少两种方法联合检测（如：IIF法+ ELISA法）。 抗核小体、抗组蛋白、抗dsDNA三抗体阳性者强烈提示增殖性LN。 与疾病活动性相关的抗体：抗dsDNA、抗核小体、抗组蛋白、抗Jo-1、抗rRNP 与预后相关的抗体：抗Scl-70（差）、ACA（好）,案例
15、1,女性，34岁 游走性多关节痛，雷诺现象半年 RF 56U/L；抗CCP抗体阴性； ANA 1：320 胸部CT：轻度肺间质病变 诊断？治疗？,（核仁型）,UCTD ILD 发展为 SSc可能性大 Pred+CTX,案例2,男性，50岁 双腕关节炎、雷诺现象半年 ANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性 胸部CT：轻度肺间质病变右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎 诊断？,复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性 诊断：抗Jo-1抗体综合征 Pred+T,案例3,女性 32岁 手指关节痛2月 ANA（+）S1:80 抗SSA（+）135 抗Ro52（+）110 三大常规正常； ESR CRP 正常；补体
16、正常；RF 87IU/ml； 诊断？ 治疗？,CTD SLE待随诊，重用HCQ,案例4,女性，40岁 4年前多浆膜腔积液、低补体血症、ANA 1：320、抗SS-A+、抗SS-B+，诊断为“系统性红斑狼疮可能性大”，予“pred+CTX”治疗好转后“pred 10mg qod +HCQ”维持。 15天前新发面部皮疹（丘疹鳞屑型）、脱发； 尿常规：PRO 阴性；尿四蛋白：轻度增高； 补体下降（C3 50mg/dl C4 7.4mg/dl）； 抗dsDNA（IF） 1：320 抗核小体 + 抗组蛋白+； 诊断？治疗？,SLE，SLEDAI 8分， pred1mg/kg/day+CTX,案例5,女，28岁，面部红斑，尿蛋白（+） ； ANA 1:1280H；抗dsDNA（IF/ELISA）： 1:40/800 ； C3 40mg/dl C4 6mg/dl ； 诊断？治疗？ 治疗半年后蛋白尿（+）；ANA1:320H；抗dsDNA （IF/ELISA）：1:20/400 ；C3 66mg/dl C4 8mg/dl； 治疗？ 治疗1年后蛋白尿（-）； ANA1:160H；抗dsDNA （IF/ELISA）：阴性/250 ；C3 86mg/dl C4 12mg/dl； 治疗？,
