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1、药物的鉴别试验,Identification test of drug,第二章,药物的鉴别试验药物的杂质检查药物定量分析与分析方法验证,药品检验工作的基本规律,Basic regularity of drug inspection,Identification test of drug,鉴别试验的定义与目的鉴别试验的项目鉴别试验的方法鉴别试验的条件,药物的鉴别试验,根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或生物学方法来判断其真伪。 鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的鉴别。 鉴别试验方法应专属，每个品种一般23条。,第一节鉴别试验的定义与目的,Te
2、st definition,中国药典凡例中的定义,鉴别项下规定的试验方法，系指反应该药品某些物理、化学或生物学等特性所进行的药物鉴别试验，不完全代表对该药品化学结构的确认。化学药物结构确认不同于上述的药物鉴别试验，其主要任务是确认所制备原料药的结构是否正确，适用于未知化合物的家别或目标对象的结构确认。,第二节鉴别试验的项目 Test items,外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。如二巯基丁二钠的描述为“本品为白色至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭”。,性 状 （Description）,CHP2010中盐酸异丙嗪的性状描述：本品为白色或乳白色结晶性粉末；有微臭，味极苦；有引湿性；
3、遇光渐变色；水溶液显酸性反应。盐酸异丙嗪片的性状描述：本品为糖衣片，除去包衣后显白色。,性 状 （Description）,溶解度：一定程度上反映了药品的纯度。药品在不同溶剂中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。 物理常数：用于药品鉴别，反映其纯杂程度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。,1.熔 点,性 状-,固体熔化成液体的温度,熔融同时分解的温度,自初熔至全熔的一段温度,物理常数,2.比旋度：在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测
4、得的旋光度。用 表示。反映手性药物特性及其纯度的主要指标。,性 状-,物理常数,维生素C的比旋度测定：+20.5 +21.5,3.吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。中国药典收载是 。这两种物理常数可用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。,如：盐酸氨溴索吸光系数测定其为233247,依 据：某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊反应或典型的有机官能团反应。只能证实为某一类化合物。 中国药典附录收载一般鉴别试验：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐无机酸盐,General identifica
5、tion test,一般鉴别试验,1.有机氟化物,2.有机酸盐,FeCl3反应,水杨酸盐,中性时呈红色,酸性时呈紫色,2.有机酸盐,银镜反应,酒石酸盐,取供试品中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，即生成游离银并附在试管内壁形成银镜。,3.芳香第一胺类,重氮偶合反应,橙黄到猩红色,-萘酚,4.托烷生物碱类,Vitali反应,醌型产物,5.无机金属盐,焰色反应鉴定:,是指某些金属或它们的挥发性化合物在无色火焰中灼烧时使火焰呈现特征的颜色的反应。这是因为这些金属元素的原子在接受火焰提供的能量时，其外层电子将会被激发到能量较高的激发态。处于激发态的外层电子不稳定，又要跃迁到能
6、量较低的基态。不同元素原子的外层电子具有着不同能量的基态和激发态。在这个过程中就会产生不同的波长的电磁波，如果这种电磁波的波长是在可见光波长范围内，就会在火焰中观察到这种元素的特征颜色。利用元素的这一性质就可以检验一些金属或金属化合物的存在。这就是物质检验中的焰色反应。,钠、钾、钙、钡的焰色反应 钠 鲜黄色 钾 紫色 钙 砖红色 钡 黄绿色 铵盐,+,-,6.无机酸根,氯化物 硝酸银鉴定法以及二氧化锰氧化法 硫酸盐 氯化钡鉴定法以及醋酸铅鉴定法以及盐酸排除法 硝酸盐 硫酸及硫酸亚铁-接触面显棕色法 与铜反应生成红棕色蒸气 高锰酸钾排除法,依 据：药物分子中的特殊基团或官能团特殊反应或典型的有机
7、官能团反应。（某一种）,Specific identification test,专属鉴别试验,四、鉴 别 方 法,化学鉴别法,光谱鉴别法,生物学法,HPLC、GC鉴别法,薄层色谱鉴别法,纸色谱鉴别法,呈色反应鉴别法,紫外光谱鉴别法,红外光谱鉴别法,沉淀生成反应鉴别法,色谱鉴别法,气体生成反应鉴别法,测定生成物的熔点,荧光反应鉴别法,1.呈色反应鉴别法 指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。 （1）三氯化铁呈色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基 （2）异羟肟酸铁反应：多用于芳酸及其酯类、酰胺类 （3）茚三酮呈色反应：用于结构中含有脂肪氨基药物 （4）重
8、氮化-偶合显色反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基 （5）氧化还原显色反应及其它颜色反应,2.沉淀生成反应鉴别法,（1）与重金属离子的沉淀反应 （2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应（3）其它沉淀反应。,多用于生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐。,常用的荧光发射形式： （1）药物本身可在可见光下发射荧光； （2）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光； （3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；,3.荧光反应鉴别法,（4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。,（1）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气。 （2）化学
9、结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体。 （3）含碘有机药物，经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。,4.气体生成反应鉴别法,紫外光谱鉴别法,对比吸收光谱特征参数,比较吸收度比值一致性,对比吸收光谱一致性,P77,1,2,测定max，或同时测定min；测定一定浓度的供试液在max处的A规定和E规定 和A1/A2经化学处理后，测定其反应产物的 吸收光谱特性。,美法仑,红外光谱鉴别法,对比供试品红外吸收光谱与药品标准红外光谱的一致性，尤其是指纹一致性。,试样制备方法：压片法、糊法、膜法、溶液法,特征区,指纹区,4000125
10、0cm-1,1250400cm-1,原子吸收法(Atomic Absorption)利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度进行定性、定量分析。,X射线粉末衍射法 晶体对X射线会产生衍射现象,不同的物质有其特定的衍射图（药物的晶型） NMR:化学结构的确定 MS：分子量信息,色谱鉴别法,在色谱技术中，流动相为气体的叫气相色谱(Gas Chromatography, GC) ，流动相为液体的叫液相色谱(Liquid Chromatography, LC)。固定相可以装在柱内，也可以做成薄层。前者叫柱色谱，后者
11、叫薄层色谱。 根据色谱法原理制成的仪器叫色谱仪，目前，主要有气相色谱仪和液相色谱仪。,利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（比移值或保留时间）进行的鉴别试验。采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，并进行比较，根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪。,薄层色谱鉴别法 TLC,GC和HPLC鉴别法,高效液相色谱法（HPLC） HPLC(High Performance Liquid Chromatography ) 是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段: 高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器 广泛应用于各个领域: 医药,环保,石化,生命科学,食品
12、工业,农业 无论在技术上,理论上,还是在应用上仍有较大的发展空间,经典液相色谱,现代高效液相色谱,手动进样器配件,正相色谱柱与反相色谱柱：,流动相极性小于固定相极性的情况即正相色谱；硅胶柱、氨基柱,极性相互作用大的保留时间大，反之保留时间小。洗脱顺序：非极性、弱极性、极性。,流动相极性大于固定相极性的情况，称为反相色谱；C18 、 C8 洗脱顺序：极性、弱极性、非极性,检测器的种类,检测器是高效液相色谱仪的核心部件之一。其作用是将色谱柱流出物中样品的各组分含量变换为可观测的电信号，经有关仪器记录下他们的谱峰。色谱工作者根据峰的位置、形状及大小对未知物进行定性、定量处理。由于液体状态的流动相和样
13、品的许多物理性质非常接近，所以寻找一种通用性强、灵敏度高的检测器是比较困难的。检测器的种类有很多，目前常用的有如下几种： 紫外吸收检测器(UVD) 荧光检测器(FD) 电化学检测器(Electrochemical Detector ) 示差折光检测器 (RID) 蒸发光散射检测器,光谱图是某一个时刻各个波长下的吸光度值。,色谱图是某一波长下各个不同时刻的吸光度值；,DAD检测器,tR定性鉴别,色谱的文献来源,国外,色谱杂志（Journal of Chromatography） 液相色谱杂志（Journal of Liquid Chromatography）1978年创刊。关键词“色谱”。,国内
14、,分析化学、分析测试学报、色谱、理化检验（化学分册）、分析仪器、分析测试技术与仪器、分析测试仪器通讯、分 析实验室； 环境化学、石油化工； 药物分析杂志、中草药和药学杂志等,back8,显微鉴别法,生物学法,利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法,主要用于抗生素、生物药物以及中药的鉴别,通常分为生物效应鉴别法和基因鉴别法两大类.,按对象目的不同可分为：免疫鉴别法、细胞生物学鉴别法、生物效价鉴别法、纯指标鉴别法、DNA遗传标记法，mRNA差异显示鉴别法,指纹图谱与特征图谱鉴别法,（一）溶液的浓度 （二）溶液的温度 （三）溶液的酸碱度 （四）试验时间 （五）干扰成分的存在,鉴别试
15、验条件,应该对专属性与耐用性进行鉴别,鉴别方法验证:,是否准确？,微少条件变化 是否允许？,1、反应灵敏度和空白试验,六、鉴别试验的灵敏度（sensitivity）,最低检出量（minimum detectable quantity） 最低检出浓度（minimum detectable concentration） 空白试验（blank test）：在与供试品鉴别 试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。,（二）提高反应灵敏度的方法,加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集 在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很浅时，可利用加入少量与水互不相溶的有机溶剂，浓集有色生成物，使其在有机溶剂中颜色变深，易于观测。 2. 改进观测方法 如将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。,总结：一般鉴别试验,川北医学院 药分教研室,Thank You !,1、药物的性状反映了药物的物理性质，一般包括（ ）、（ ）、（ ）。,2、,
