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1、革兰氏染色与荚膜染色,一、目的与要求： 1、掌握革兰氏染色法和细菌荚膜染色法。 2、观察菌体的一些简单结构。 二、原理及说明： 染料：用作细菌的染料是一些含有苯环为基本单位，并具有发色基和助色基的化合物，若助色基解离后带上正电荷者，能与酸性物质结合生成盐，系为碱性染料，如番红、结晶紫、孔雀绿等；反之，助色基解离后，带负电核能与碱性物质结合生成盐，称为酸性染料。一些具有两类性质的染料称为复合染料。细菌细胞等电点PH一般在25，能与中性，碱性及弱酸性的碱性染料结合，因此，通常采用碱性染料进行染色。 染色可分为简单染色和特殊染色。 区别：前者只采用一种染料，适应于菌体一般形态的观察；后者采用两种以上
2、的染料，用于研究细胞内部的构造。,三、革兰氏染色法,革兰氏染色法是把细菌用两种性质不同的染料进行处理，根据细菌对染色反应的不同，可区分为革兰氏阳性（正反应）和革兰氏阴性（负反应）两大类群，故又称为鉴别染色法，这是细菌学中极重要的一种染色法。在正常情况下，某种细菌经过结晶紫染色。碘液媒染，再以酒精脱色，最后以番红复染；如不被酒精脱色菌体呈紫色，称为革兰氏阳性（常以G+表示）；若为酒精脱色，则被番红色复染，使菌体呈红色，称革兰氏阴性（以G - 表示）。,四：方法步骤,1、菌株：大肠杆菌；金黄色葡萄球菌 2、流程路线： 涂片 干燥 固定 草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥 碘液媒染 1min 水洗干燥
3、 95%乙醇脱色 1520秒 水洗干燥 番红复染1min 水洗干燥 镜检,(1)涂片 干燥 固定:,2,1,（2）草酸铵结晶紫染色1min 水洗干燥,（3）碘液媒染1min 水洗 干燥,（4）95%乙醇脱色1520秒 水洗 干燥,（5）番红复染1min 水洗 干燥 镜检,五、注意事项：,（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 （2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。,荚膜染色法,一、原理及说明：
4、某些细菌生长到一定阶段，在一定条件下会向细胞壁外分泌一层粘性的多糖类物质荚膜。荚膜含水份多。疏松且较薄。它受热易失水变形。所以，一般不加热固定。荚膜不易染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而将不着色的透明的荚膜衬托出来。 二、材料：钾细菌,荚膜示意图：,三、方法与步骤：,1、总路线：涂片 用1%结晶紫染色3分钟 用20%CuSO4冲洗 镜检2、涂片：,3、结晶紫染色：,4、CuSO4冲洗：,四、注意事项：,（1）不能加热固定，否则荚膜受热失水收缩，失去原形。 （2）涂片不要用力过猛，不要滴加水，以防破坏其荚膜原形.(3)要用CuSO4冲洗，不要用水。值日：58号,五、作业：,（1）大肠杆菌呈 色，是革兰氏 性菌；金黄色葡萄球菌呈 色，是革兰氏 性菌。 （2）绘出荚膜形态图。,荚膜示意图：,革兰氏染色步骤 涂片 干燥 固定 草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥 碘液媒染 1min 水洗干燥 95%乙醇脱色 1520秒 水洗干燥 番红复染1min 水洗干燥 镜检,荚膜染色步骤：涂片 用1%结晶紫染色3分钟 用20%CuSO4冲洗 镜检,
