《实验一酶底物专一性》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验一酶底物专一性（31页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、生物化学实验40学时 （生物工程、生物信息、张之洞班）,生物化学技术60学时 （生物技术、应用生物技术、生物科学）,实验内容（40学时） （生物工程、 生物信息、张之洞班）,1. 酶的底物专一性（4） 2. 总糖和还原糖的测定（4） 2. 蛋白质N端分析（4） 4. 植物DNA的提取（4） 5. DNA的酶切和电泳（4） 6. 酵母醇脱氢酶的提取和纯化（12） 7. SDS-PAGE测定蛋白质分子量（8）,实验内容（60学时） （生物技术、应用生物技术、生物科学）,酶的底物专一性（4） 总糖和还原糖的测定（4） 蛋白质N端分析（4） 植物DNA的提取（4） DNA的酶切和电泳（4） 酵母醇脱氢
2、酶的提取和纯化（12） 亲和层析分离纯化蛋白质（14） Western Blot鉴定目的蛋白（14）,实验要求,按时上课，不得缺席 预习实验内容 认真观察实验现象，如实记录实验数据 独立分析实验结果，按时完成实验报告,实验室守则,保持室内安静、整洁 严格按操作规程使用仪器设备，节约试剂和实验材料 实验过程中注意水、电、门窗安全 实验完毕后，将仪器、器皿放归原处 做好实验室卫生,特别注意,若发生仪器故障其它事故，应立即切断相关电源，及时报告老师 违反操作规程造成事故、仪器损坏，将按学校有关规定赔偿,每位学生一套基本的实验物品，放置在抽屉中，对照有物品清单，每次做完实验后，清点无误后归回抽屉；每次
3、实验另外发放的实验物品，用完清洗后放置在实验台面上。每次做完实验后，由班长安排4名同学做清洁卫生，做完后必须由实验老师检查通过。,实验报告,每人1份，下次实验课前交。,生物化学实验成绩, 出勤和实验室综合表现 15分 实验报告 35分 实验课考试 50分,酶的底物专一性,实验一,目 的,了解酶的专一性 掌握检查酶专一性的原理和方法 学会排除干扰因素，设计酶学实验,实验内容,本实验以唾液淀粉酶（内含淀粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性。,原 理,酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。酶的专一性程度分为： 键专
4、一性：只要求作用于一定类型的键，对键两端基团无严格要求。如脂酶、核酶 基团专一性：只对键两端一个基团要求严格，如-、-葡萄糖苷酶，转移酶 绝对专一性：只作用于一种底物，如某些核酸工具酶 立体异构专一性：旋光异构专一性和几何异构专一性,酶的专一性,淀 粉,直链淀粉: 由200-300个-葡萄糖以-1，4糖苷键相连成一直链支链淀粉:有-1，4糖苷键和-1，6糖苷键，在直链淀粉的基础上形成分支,直链淀粉的相对分子质量比支链淀粉小，直链淀粉的分子是由许多-D-葡萄糖经过-1，4-苷键反复连接而成的线状聚合物。,直链淀粉,直链淀粉的形状并不是伸展状态的直链，而是有规律的卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有 6个
5、葡萄糖结构单位。,直链淀粉遇碘液显蓝色，加热煮沸时颜色消失，冷却后又重新显色。这个反应很灵敏，常用来检验淀粉或碘的存在。,支链淀粉比直链淀粉由更多的D-葡萄糖组成，其连接方式也有所不同。支链淀粉中D-葡萄糖之间以-1，4苷键连接成主链，每隔2025个葡萄糖单位便分枝出1个支链，支链上还有分枝，而支链的连接点即分枝处为-l，6糖苷键。,支链淀粉,支链淀粉分枝状结构,由-葡萄糖和-果糖以-1，2糖苷键相连而成的双糖,蔗 糖,Benedict反应,Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀。淀粉和蔗糖都不能反
6、应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，用颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的水解作用。,半缩醛羟基在右边，即与氧环同侧-D-葡萄糖； 半缩醛羟基在左边，即与氧环异侧-D-葡萄糖。,试 剂,淀粉酶溶液：唾液2mL 倒入10mL量筒中（不包括泡沫），用蒸馏水稀释到5mL，静置10分钟后，去掉上层泡沫和下层的沉淀。（自制） 蔗糖酶溶液：干酵母1g置研钵中，加半勺石英沙及蒸馏水少许（约4mL），用力研磨10分钟，转移到50mL离心管中，另用25mL蒸馏水洗涤研钵，并将洗涤液一起转移到离心管中，摇匀，静置5分钟，离心(离心前对称放置的两只离心管要等重配平，精确到0.01g)
7、，小心取出上清液（含蔗糖酶）备用。 （自制） 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl） （取前摇匀） 2%蔗糖溶液 Benedict试剂,Benedict试剂,在600mL蒸馏水中溶解173g柠檬酸钠和100g无水碳酸钠，冷却后稀释到850mL。在100mL热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜。冷却后稀释到150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配。,实验步骤,检查试剂,淀粉酶的专一性,蔗糖酶的专一性,思考题,观察酶的专一性为什么要设计这3组实验？每组各有什么意义？每组中蒸馏水分别起什么作用？将酶煮沸10分钟，重做可能会有什么结果？,
