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1、医院环境微生物采样方法、检验技术与注意事项,复旦大学附属中山医院 高晓东,第三十一条 环境卫生学监测：包括对空气、物体表面和医护人员手的监测。医院应每月对手术室、重症监护病房室（ICU）、产房、母婴室、新生儿病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供应室无菌区、治疗室、换药室等重点部门进行环境卫生学监测。当有医院感染流行，怀疑与医院环境卫生学因素有关时，应及时进行监测。,第三十六条 出现医院感染流行或暴发趋势时，应采取下列控制措施：一、临床科主必须及时查找原回，协助调查和执行控制措施。二、医院感染管理科必须及时进行流行病学调查处理，基本步骤为； 1、证实流行或暴发 2、查找感染源：对感染病人
2、、接触者、可疑传染源、环境、物品、医务人员及陪护人员等进行病原学检查。 3、查找引起感染的因素 4、制定和组织落实有效的控制措施 5、分析调查资料 6、写出调查报告。,空气微生物采样及检验方法 物体表面微生物采样及检验方法 医护人员手表面采样及检验方法 使用中消毒剂与无菌器械保存液 医疗器械微生物采样及检验方法 水中微生物的采样及检验方法,空气微生物监测,空气污染的监测得到足够重视 空气微生物研究的范围在不断扩大 空气微生物的诊断在不断提高 控制空气微生物的方法不断更新 对空气微生物采样方法认识不断提高,空气微生物采样方法,一、沉降法 二、浮游菌测定法,沉降法,重力沉降 静电沉降 热沉降,沉降
3、平皿法,室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2，设东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1m。 采样时，将含营养琼脂培养基的平板（直径9cm）置采样点（约桌面高度），打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min。 。,空气采样,（1）选择有代表性的采样点，一般在室内四角及室中央，放置含营养琼脂的平皿。 （2）打开皿盖（将皿盖置于平皿底下，不可仰放，以防污染），将有培养基的平皿，暴露于空气5分钟（视空气清洁程度而定），采样毕合上皿盖，记录采样时间。 （3）将已采集的培养基在6h内送实验室，置于37温箱培养48小时。 （4）记录5个平皿的菌落总数。,
4、结果计算,100cm2琼脂面积上，5分钟所降落的菌落数，相当于10L空气所含细菌数，计算结果如下：t平皿暴露于空气中的时间（分钟） N培养后，平皿上的菌落总数 A所用平皿的面积（cm2）,假如100cm2的平皿在空气中暴露5min即相当于10 L空气中的细菌数,结果判定,类区域：细菌总数10cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格； 类区域：细菌总数200cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格； 类区域：细菌总数500cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格。,缺点,1、平板沉降法属重心沉降，此法只能采集10m左右的粒子，而且不能作精确定量。因为就单个细菌而言，最大只有几个m，小到1 m以下，所以它只能
5、采集到附着于各种尘埃和气溶胶表面的细菌，难以采集到悬浮的细菌，而经空气感染更多的是由于悬浮于空气中的细菌所致。,缺点,2、采样时受周围气流、粒经大小和粒经沉降速度等因素影响，不能准确的反应空气细菌的分布水平。 3、奥梅良斯基公式规定：假如100cm2的平皿在空气中暴露5min即相当于10 l空气中的细菌数，此值是一假定值，无法定量，所以公式中的矫正数也是很不准确的。,浮游菌测定法,撞击式空气微生物采样法 离心式空气微生物采样法 洗刷空气微生物采样法 过滤空气微生物采样法 温差空气微生物采样法 静电或冲击空气微生物采样法,撞击式空气微生物采样法,采样器分别置于室内对角和中央共3个点。设置采样时间
6、为每点2min，空气流量为25lmin，细菌培养方法同沉降法。,计算公式,细菌数(cfu/m3)=n/FT1000F为采气流量（Lmin）；T为采样时间（min）；n为平均菌落数（CfU平皿）。,撞击式空气采样仪,FA-1型多级撞击式空气微生物采样器 FA-2型撞击式空气微生物采样器,FA-1型多级撞击式空气微生物采样器,整个仪器是由采样器以及抽气泵、流量计、玻璃平皿所组成。 采样器是6层有微小孔眼的铝合金圆盘。圆盘下放琼脂平皿，每圆盘间有密封胶圈，在通过三个弹簧卡子把圆盘牢固地联在一起。每个圆盘上有400个成环行排列、逐层减小、尺寸精确的小孔，标准采样流量为1立方呎（28.3L/min）。,
7、FA-2型撞击式空气微生物采样器,该采样器是依据安德森采样器而设计制造的，它模拟人体呼吸道的解剖结构及其空气动力学特征，采用惯性撞击原理，将悬浮在空气中的微生物粒子，按大小等级分别收集在采样介质表面上，然后供培养及做进一步的微生物分析，求出空气微生物粒子数量及其大小分布的特征。,浮游菌测定法,撞击式空气微生物采样法 离心式空气微生物采样法 洗刷空气微生物采样法 过滤空气微生物采样法 温差空气微生物采样法 静电或冲击空气微生物采样,离心式空气微生物采样法,当采样器通电后，借助采样器内叶轮的高速旋转，把距离40cm范围内的空气吸进采样器，由于离心力的作用，空气中的粒子冲击到含有琼脂培养基的塑料条上
8、，而空气呈螺旋状离开采样器涡壳流出。,菌落计算,菌落形成单位CFU/m3=琼脂培养基条上的菌落数40采样时间（min） 琼脂培养基的表面积为341cm2。,浮游菌测定法,撞击式空气微生物采样法 离心式空气微生物采样法 洗刷空气微生物采样法 过滤空气微生物采样法 温差空气微生物采样法 静电或冲击空气微生物采样,冲击法（AGI）根据冲击原理当气流以足够的线速度冲击采样器中液体及附近表面时气溶胶粒子可捕获在液体中。所测定的细菌浓度较为准确。第一次国际空气生物学会议上AGI采样器被推荐为标准采样器。AGI冲击法捕获率约为撞击法4倍，平皿沉降法的3倍,大容量空气微生物采样法,大容量采样器的采样流量为70
9、01000升/分，主要是为了采集空气中含量较少的病原体微生物（如某些病毒等），以及洁净环境（如制药车间、病房等）微生物气溶胶粒子，这些环境中气溶胶粒子浓度很低，甚至在几立方米的空气中才有几个粒子。提高采样的流量，增大对低浓度病原微生物气溶胶粒子，特别是一些病毒粒子的捕获机会，以追踪空气传播的来源。,空气中悬浮微生物测定方法,浮游菌测定法优点,1、能够采集浮游在空气中的微生物粒子，这种粒子可随人们呼吸运动进入呼吸道内，因而具有卫生学意义。 2、采样效率高，采样量准确，采样时不受粒经大小、沉降速度和气流影响，能准确的表示出空气中细菌的实际含量。,理想的采样法应具备的条件,能快速测定微生物粒子浓度
10、直接判定悬浮物的种类 测量气溶胶的粒谱 灵敏度高，使用方便,空气微生物采样方法 空气微生物消毒方法,空气微生物消毒方法,空气消毒,物理消毒,化学消毒,紫外线灯照射 静电吸附 空气过滤 ,消毒剂熏蒸如过氧乙酸熏蒸 喷雾如用含氯消毒剂、过氧乙酸进行超低容量喷雾消毒， 用一些消毒器械即时产生的化学因子进行消毒，如可以用臭氧进行空气消毒。,空气消毒可采用最简便易行的开窗通风换气方法，每次开窗10到30分钟，使空气流通，让病菌排出室外。,物理除菌,紫外线灯,无毒、经济、有效、方便 照射30min至1h基本能使室内空气达类环境标准。2h达类环境标准，照射后3h内空气仍达类标准。 而罩式、车式及固定贴墙式均
11、因其罩背面空气阻挡了2040的紫外线照射，而降低了杀菌效果和维持时间。 要强调最佳安装方式、合理安排消毒间隔时间，照射时保持室内清洁干燥、灯管无尘，温度60时适当延长照射时间是保证消毒效果所必须的。,物理消毒,物理消毒,静电吸附,静电吸附式空气消毒机消毒：此类消毒机采用静电吸附原理，加以过滤系统，不仅可过滤和吸附空气中带菌的尘埃，也可吸附微生物。使用一台大型静电式空气消毒器，消毒30分钟后，可使一个2030m2的房间达到国家有关卫生标准。,物理消毒,静电吸附,静电灭菌空气净化机最大的优点是在动态、静态环境中均有较好的灭菌效果，因为在紫外灯开着消毒时，人是不能在室内工作的，而无菌室的工作人员流动
12、较大，进出较频繁，因此要靠紫外灯灭菌是不理想的，而静电灭菌空气净化机在动态时也能不断净化空气。,物理消毒,物理消毒,静电灭菌空气净化机,(l)高效灭菌，灭菌率达到9998，菌落数小于3个皿小时； (2)高效除尘，洁净度可达一万级以上； (3)去除有毒、有害气体及致癌物质； (4)产生轻负离子，改善空气品质； (5)采用模糊控制、人体感应、定时遥控。,物理消毒,臭氧消毒,臭氧对室内空气微生物有较好的消毒作用，还可祛除气味，使用简便。在相对湿度70%条件下，臭氧浓度应20mg/m3，消毒时间应30min。臭氧对人有一定毒性，对金属和橡胶有腐蚀作用。,化学消毒,其它化学消毒剂,（1）过氧乙酸熏蒸，1
13、 g/m3过氧乙酸熏蒸，作用60分钟，对室内表面和空气中的细菌、脊髓灰质炎病毒均有很好的杀灭作用。气溶胶喷雾消毒，0.10.2过氧乙酸（喷液量20 ml/min）作用3060分钟。0.2%过氧乙酸溶液按1000 ml/m2用量拖地，关闭门窗熏蒸30min。均有很好的杀菌效果。过氧乙酸有较强的刺激性和对物品腐蚀性。 （2）过氧化氢气溶胶喷雾，1.53过氧化氢喷雾，20 ml/m3 作用3060分钟，对室内物体表面和空气均有较好消毒效果。且过氧化氢刺激性较小、无毒。 （3）乳酸熏蒸，10乳酸于紧闭门窗情况下，加热熏蒸2030分钟，也有一定的杀菌效果。,化学消毒,空气消毒方法的选择,1、自然通风是最
14、经济、简便和有效的保持室内空气新鲜、减少细菌浓度的方法。在有人或无人在情况下均可使用。对防止非典的传播有很重要的意义。 2、在出现呼吸道传染病人后，单一的使用空气消毒方法，即使空气中的微生物全部被杀灭，但由于污染表面的微生物没有被杀灭，很快又可污染空气。这种情况较合理的方法应物体表面消毒和空气消毒同时进行，可选用过氧乙酸或过氧化氢等消毒剂进行喷雾或熏蒸。,3、人在时的空气消毒方法，可选用循环风消毒机或静电等空气消毒器进行连续动态消毒处理。使用这种空气消毒方法时，应结合室内表面的卫生清洁处理或先用消毒剂对污染表面进行消毒，以保证空气消毒效果。,空气消毒方法的选择,空气消毒注意事项,1、对物品的腐
15、蚀，过氧乙酸、臭氧等消毒剂对物品有不同程度的损坏，使用时浓度不宜过高、喷量不宜过大，必要时，消毒后应及时用清水擦洗。2、用消毒剂进行空气消毒时需关闭门窗，人员应离开消毒场所，消毒完成后应先打开门窗通风，待消毒剂驱除后方可进入。,空气消毒注意事项,3、紫外线照射时，不能直接照射暴露皮肤，眼睛不能直视紫外线灯。以免对皮肤、眼睛造成伤害。4、个人防护，用过氧乙酸等消毒剂进行喷雾消毒时，消毒人员应做好个人防护，如戴好口罩、眼镜、手套等。,空气微生物采样及检验方法 物体表面微生物采样及检验方法 医护人员手表面采样及检验方法 使用中消毒剂与无菌器械保存液 医疗器械微生物采样及检验方法 水中微生物的采样及检
16、验方法,采样时间,选择消毒处理后4h内进行采样,采样方法,用5cm5cm灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积100cm2，连续采样4个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭于1支；在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投人10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。,检验方法,采样结果计算方法：细菌总数(cfu/cm2)=平板上菌落数稀释倍数/采样面积(cm2),将采样管用力振打80次以上，按照污染程度作相应的稀释后用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿内加人已熔化的45-48的营养琼脂18-20ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置37温箱内培养48h，计数菌落数。,戳印法,在检验时，只需在现场打开皿盖，将略突出于培养皿口平面的培养基轻轻往被检物品表面一按，盖上皿盖，在培养箱内培养一定时间后计菌落数。此数值即为10cm2被检物品表面上的细菌数，无需任何换算即可同消毒标准和公共场所卫生标准加以比较。十分快捷、方便，甚至没有无菌室和专门检验人员也可顺利完成操作。是目前最理想的用于公共场所物品表面细菌污染程度监测的方法。,
