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1、梅毒检测方法的对比,杨晓亮,梅毒螺旋体,苍白梅毒螺旋体，抵抗力极弱人是唯一的传染源先天性：母婴传播后天性：主要是以性传播，也可经输血 传播,一期梅毒,感染3周后左右，出现无痛性硬下疳，感染性极强,二期梅毒,发生于出现硬下疳2-8周，全身梅毒疹，淋巴结肿大，传染性极强,三期梅毒,发生于感染2年后，也可长达10-15年，慢性肉芽肿。,快速、准确、尽早地检测出梅毒螺旋体成为头等大事！,梅毒检测现状,梅毒螺旋体检查血清学检查法,梅毒螺旋体检查,暗视野显微镜检查、直接免疫荧光实验（）及梅毒螺旋体镀银染色检查，其中的特异性较高。适用于一、二期梅毒有病损者的患者，受取材及特殊显微镜限制，耗时长，难以为临床所
2、接受。,镀银染色,暗视野,血清学检查法,感染梅毒后，人体内会产生两类抗体：直接针对TP的特异性抗体是针对类脂质的抗体，无特异性,血清学检查法,非螺旋体抗原试验(非特异性试验)螺旋体抗原试验(特异性试验),非特异性试验,类脂质为抗原检查病人反应素的试验方法,世界卫生组织确认诊断梅毒的标准试验有：1、性病研究实验室(VDRL)试验（国外常用） 2、不加热血清反应素(USR)实验 3、快速血浆反应素(RPR)试验（国内常用） 4 、甲苯胺红（TRUST）试验（国内常用）,性病研究实验室(VDRL)试验,用心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原与待测56加热灭活血清反应，由于摇动、碰撞，形成抗原抗体复合物，而
3、形成肉眼可见的凝集颗粒，即为阳性反应。本法可作定量及定性试验，试剂及对照血清已标准化，费用低。此法常用，操作简单，需用显微镜读取结果，缺点是一期梅毒敏感性不高。,不加热血清反应素(USR)实验,USR是VDRL抗原的改良，使用血清无需加热，敏感性及特异性与VDRL相似，试验结果可用肉眼观察,快速血浆反应素试验（RPR）,RPR则是USR的改良，将抗原包裹在活性炭颗粒上，敏感性及特异性与VDRL相似，优点是肉眼即可读出结果。,甲苯胺红试验（TRUST）,TRUST是RPR抗原的改良，将RPR试剂中活性炭颗粒换成甲苯胺红颗粒。,TRUST法与RPR法的对比,对非特异性反应素抗体导致的阳性标本：TR
4、UST试剂稳定性强TRUST检出率和重复性高TRUST试剂中表面包裹抗原的甲苯胺红颗粒比RPR试剂中的活性炭颗粒小更易耐受振荡导致,非特异性试验的优点,标准化抗原，敏感性相似一般用于初筛和疗效随访操作简易，费用低廉,非特异性试验的缺点,敏感性和特异性差生物学假阳性高假阳性可出现在急、慢性感染,妊娠,高丙种球蛋白血症,结缔组织病,溶血性贫血和其他自身免疫性疾病,也可出现在老年人和一些健康人,但多数情况下查不出原因。,特异性试验,原理：以梅毒密螺旋体本身或非致病的密螺旋体为抗原,以检查病人血清中抗密螺旋体的特异性抗体。,目前应用的方法,密螺旋体荧光抗体吸收（FTA-ABS） 梅毒密螺旋体血凝试验
5、(TPHA) 梅毒密螺旋体凝集试验 （TPPA） 蛋白印迹试验 (WB) 酶联免疫吸附试验 (ELISA) 聚合酶链反应(PCR) 胶体金免疫层析法（GICA）,密螺旋体荧光抗体吸收（FTA-ABS）,被认为是当前敏感性和特异性最高的试验方法 窗口期短：在1期梅毒头几天就可以测出特异性抗体F3G但提取物为活菌，存在潜在危险性，故其应用受到很大限制。操作难度大，不做首选,梅毒密螺旋体血凝试验 (TPHA),特异性高易操作和定量试剂昂贵、不易保存和标准化生物学假阳性率低。,梅毒密螺旋体凝集试验 （TPPA）,将TP Nichols株的精制纯化抗原包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的TP
6、抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体TP抗体,并且可用来测定抗体效价。,TPPA和TPHA对比,TPPA包含了梅毒螺旋体的所有片段，敏感性更高 ，结果更易观察TPPA试剂稳定性、特异性、敏感性批间差优于TPHATPHA（试剂保存时间短，批间差大）,蛋白印迹试验（WB）,免疫印迹法检测梅毒特异性抗体敏感度等于或高于其它同类方法特异性与ELISA和TPPA两种方法相同免疫印迹法敏感度高,特异性好,操作简单,不需特殊仪器设备,阴阳性结果界线分明,易于判断,适应于临床广泛开展。,酶联免疫吸附试验 (ELISA),原理为双抗原夹心法,采用梅毒抗原包被在酶标板上,
7、 以辣根过氧化酶标记物的梅毒抗原,测定梅毒感染的特异性抗体。,优点,特异性和敏感性均为96%（与FTA-ABS法比较）操作简便，可大批量完成标本的检测易于自动化，成本低试剂稳定，保存时间久,缺点：,假阳性较之TPPA高分析原因：1、试剂敏感性高（宁可错杀三千 不可放过一个）2、人为操作,聚合酶链反应(PCR),优点：直接检测TP的DNA物质,在早期梅毒、先天性及神经性梅毒诊断中敏感性和特异性高缺点：普通实验室操作中容易造成PCR污染仅用于检测病原,故并不能取代梅毒血清学检测方法。,胶体金免疫层析法（GICA）,使用胶体金作为标记物的一种固相膜免疫测定方法,检测梅毒特异性抗体,采用了双抗夹心法二
8、期梅毒、三期梅毒、晚期潜伏梅毒的阳性试验符合率为100%,在一期梅毒中的敏感度为80%85%,对早期梅毒的敏感性均较差。,如何选择血清学试验？,WHO推荐用VDRL、RPR、TRUST对血清进行过筛试验出现阳性者再用ELISA、TPPA等特异性方法做确认试验,TRUST（+），ELISA（+）、TPPA（+）TRUST（+），ELISA（-）、TPPA（-）TRUST（-），ELISA（+）、TPPA（+）,漏检,综上所述，RPR法和TRUST法虽操作简便、敏感性和特异性不够理想、早期和晚期梅毒检出率较低，且易受主观判断、溶血等因素干扰TPPA法和TPHA法敏感性好、特异性强，是梅毒的确证方法，但条件要求较高、操作繁杂ELISA敏感性和特异性较好、性能稳定且能仪器自动化等优点，其应用范围日益广泛,我们临床上对血清学试验选择，应选用TP-ELISA，TRUST法进行过筛试验，阳性标本再用TPPA可将标本进行确认试验三种方法联合应用，才能保证正确、快速的检测梅毒抗体。,问题：如何解释检测结果？,TRUST假阳性,ELISA假阳性,既往感染,谢谢,
