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1、肝炎病毒,病原生物学教研室,肝炎病毒（hepatitis viruses，HV）是指以侵害肝脏为主引起病毒性肝炎的一组病原体。目前公认的肝炎病毒至少有5种，即甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）和戊型肝炎病毒（HEV）。 近年还发现一些与人类肝炎相关的病毒，如GB病毒-C/庚型肝炎病毒（GBV-C/HGV）和输血传播性病毒（TTV）病毒，但由于致病性不清，均未被最后确定和命名。 此外，还有一些病毒如黄热病毒、CMV、EBV、风疹病毒等虽也可引起肝炎，但不列入肝炎病毒范围之内。,各型病毒性肝炎的比较,第1节 甲型肝炎病毒,甲型肝炎病毒（h
2、epatitis A virus，HAV）首先是Feinstone于1973年应用免疫电镜技术在急性期肝炎患者粪便中发现的。 1982年国际病毒命名委员会将其分类为小RNA病毒科肠道病毒属72型。近年又被单列为肠道病毒科的嗜肝RNA病毒属（heparnavirus）。 HAV引起的甲型肝炎是急性肝炎，主要经过粪口途径传播，可造成暴发或散发流行，潜伏期短，发病较急，一般不转为慢性，亦无慢性携带者，预后良好。,形态与结构,生物学性状,球形颗粒，无包膜: 基因组:线状+ssRNA，稳定 性高。 衣壳:20面体立体对称，由VP1VP4等4种多肽组成，其中VP1是主要的衣壳蛋白，其抗原决定簇的NT抗体，
3、能中 和所有的HAV株。至今，世界各地HAV只发现一个血清型。,易感动物和细胞培养黑猩猩、两种南美洲猴 (白髭猴和红腹狨) 以及国产猕猴属中红面猴 (Macaca speciosa) 对HAV易感，接种病毒后均可出现临床、生化和组织学上急性肝炎的改变，粪便内可检出病毒。HAV可用非洲绿猴肾细胞、人胚肾细胞、传代猴肾细胞 (Vero、BSC-1、FRhK-4、FRhK-6)、人胚肺2倍体成纤维细胞和人肝癌细胞株 (PLCPRF5) 等。但不引起CPE。因此需用免疫荧光法或放射免疫法检出培养的HAV。,生物学性状,抵抗力HAV对乙醚、酸、热 (601h) 稳定，在20贮存数年仍保持感染性。HAV经
4、高压 (12120min)、煮沸 (5min)、干热(1801h)、UV (1.1瓦1min)、甲醛 (14 000、373d)以及氯 (10ppm15ppm、30min) 等处理均可使之灭活。鉴于HAV有相当大的抵抗力，因此对肝炎患者及其排泄物处理应特别小心。,生物学性状,传染源与传播途径 传染源：多为患者和隐性感染者。患者潜伏期后期及急性期的血液和粪便均有传染性。 传播途径：主要通过粪-口途径传播。未有患急性甲型肝炎的孕妇传染给胎儿的病例。,致病性与免疫性,致病机制 HAV主要侵犯儿童和青年，且多为隐性感染: HAV 口 小肠淋巴结内增殖 血（病毒血症）肝细胞内增殖 致病（出现临床症状）。
5、机体的免疫应答也参与了肝脏的损伤，即抗HAV在肝脏与HAV结合形成免疫复合物，或Tc(CTL)对感染病毒肝细胞的攻击所致。,致病性与免疫性,潜伏期 排毒高峰,急性期 排毒量 Ab,免疫性感染后可产生持久免疫力。早期：IgM；同时，从粪便中检出sIgA抗体。恢复期：IgG，并可持续多年；特异细胞免疫应答。,致病性与免疫性,实验室诊断不依靠分离病毒，而采用下述方法：(一) 病毒检测：潜伏期末期和急性期早期，取粪便用免疫电镜检测HAV颗粒；用放射免疫 (RIA) 或酶免疫 (EIA) 法检测HAV 的抗原。(二) 血清学检查：检测抗HAV常用RIA和EIA法。检测抗HAV IgM有助于早期诊断；测抗
6、HAV IgG有助于流行病学调查；测粪便中抗HAV IgA也有助于诊断。(三) 病毒核酸检测：应用 cDNA-RNA分子杂交技术及PCR技术检测HAV的RNA，方法特异、敏感。用斑点杂交法可检出109mg核酸。,微生物学检查法,HAV感染后以隐性感染和无黄疽型病例占多数，因此传染源较难控制。 预防：一般性预防：搞好卫生。特异性预防：我国试用减毒甲型肝炎活疫苗(H2 株和L1株)；国外已生产灭活疫苗，HAV基因工程疫苗正在研制中。注 射丙种球蛋白可应急预防。 治疗：甲型肝炎为自限性疾病，经治疗可痊愈，不转慢性亦不留后遗症。用药宜简。,防治原则,第2节 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒（hepatitis
7、 B virus，HBV）属嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae）。 HBV的发现源于表面抗原的研究。 1963年Blumberg首先在澳大利亚土著人血清中发现一种新抗原，称为澳大利亚抗原（Australia antigen）；直至1968年确定这种抗原与血清型肝炎密切相关，称为肝炎相关抗原（hepatitis associated antigen，HAA）；1970年D.S. Dane在肝炎患者血清中发现具有传染性的颗粒，即Dane颗粒（Danes particle）。从而HBV被确认。HBV是乙型肝炎病原体，主要经输血、注射、性行为和母婴传播。起病徐缓，部分患者可转为慢性，少数还
8、可导致肝硬化和肝癌。,形态与结构 完整的HBV颗粒亦称Dane颗粒，直径为42nm，具有双层核壳结构： 核心颗粒：直径为28nm。颗粒内部：DNA和DNA多聚酶。颗粒表面（内衣壳）：含有HBcAg 和HBeAg 。 外壳（包膜）：厚7nm。脂质双层：含有HBsAg、PHSAr 和PreSAg蛋白质,生物学性状,小球形颗粒，直径22nm；管形颗粒，直径22nm，长度在50700nm之间；大球形颗粒，即Dane颗粒，直径42nm。,生物学性状,形态与结构,HBV基因结构及复制 HBV基因结构HBV DNA是由长链L (负链) 和短链S (正链) 组成的不完全双链环状DNA(cccDNA)，短链的长
9、度相当于长链的50%85%。HBV DNA长链载有病毒蛋白质的全部密码，有4个开放读码框架(ORF)，分别称为S、C、P和X区 。,生物学性状,HBV基因结构 S区基因：包括S基因、PreS1与PreS2基因，分别编码HBsAg、PreS1和PreS2 Ag。 C区基因：编码HBcAg，还有一个PreC区可能在病毒核心和外壳的附着及结合中起作用。 P区基因：最长，编码HBV DNA多聚酶、逆转录酶以及RNaseH。 X区基因：编码X 蛋白，可反式激活一些细胞的癌基因及病毒的基因等，可能与肝癌的发生有关。,生物学性状,HBV的复制,生物学性状,抗原组成,生物学性状,外壳： HBsAg：是机体受H
10、BV感染的主要标志之一。具有抗原性，能刺激机体产生保护性抗体，即抗HBs 。根据HBsAg抗原性差异，HBV可分为adr、adw、ayr、ayw 等4种血清型。血清型分布有明显的地区差异，并与种族有关。如欧美主要是adr型，为A基因型；我国以adr、ayw为多见。 PreS1和PreS2：存在吸附肝细胞受体的表位；其抗原性比HBsAg 更强，抗PreS1和抗PreS2通过阻断HBV与肝细胞的结合而起抗病毒作用。,生物学性状,衣壳 HBcAg：HBcAg主要定位于感染细胞核内，不易从患者血清中检出。但HBcAg也可在肝细胞膜表面表达，宿主CTL作用的主要靶抗原。HBcAg抗原很强，能刺激机体产生
11、抗HBc，但无中和作用。检出高效价抗HBc，特别是抗HBc IgM则表示HBV在肝内处于复制状态。 HBeAg：HBeAg可作为HBV复制及血清具有传染性的标志。急性乙型肝炎进入恢复期时HBeAg消失，抗HBe阳性；但抗HBe亦见于携带者及慢性乙型肝炎血清中。,抗原组成,易感动物和细胞培养 只有黑猩猩对HBV易感，接种后可发生与人类相似的急慢性感染。体外细胞培养尚未成功。近年来应用基因克隆技术，可使HBV基因转移给小鼠或转染细胞株。将病毒DNA导入肝癌细胞后，病毒可复制并在细胞中表达HBsAg、HBcAg和HBeAg。有此细胞株可持续地产生Dane颗粒。这些细胞培养可用于抗HBV药物的筛选、疫
12、苗制备及HBV致病机制研究等。,生物学性状,抵抗力 HBV 对理化因素的抵抗力相当强：对低温、干燥、紫外线、醚、氯仿、酚等均有抵抗性。高压灭菌 (12115min)、0.5%过氧乙酸、5%次氯酸钠、3%漂白粉液、0.2%新洁尔灭等均可使HBV失活。但应指出，HBV的感染性与HBsAg的抗原活性并非一致。如10010min或pH2.4处理6h均可使HBV失去感染性，但仍保持HBsAg的抗原活性。,生物学性状,传染源和传播途径传染源急性、慢性乙肝患者及HBsAg无症状携带者均为传染源，特别是无症状的HBsAg携带者做为传染源危害性更大。,致病性和免疫性,乙型肝炎主要是经血液或注射途径传播即非胃肠道
13、的感染 (parenteral infection)： 1.血液、血制品传播：有少数HBsAg阴性、而HBV DNA阳 性的血液仍可引起感染。 2.医源性传播：通过注射、手术、采血、拔牙、内窥镜检查、预防接种、针刺、纹身、各种医疗器具、甚至工作人员的手，均可传播乙型肝炎。 3.母婴传播主要是在围产期，分娩时新生儿经产道接触或吸吞入含HBV的母血、羊水、或分泌物所致，少数可由于宫内感染(10%)，也可通过母乳、体液或密切接触而传播。 4.接触传播：日常生活中如共用牙刷、洗澡刷子、剃须刀等可引起HBV感染。通过唾液传播的可能性也应受到重视。性交，尤其男性同性恋亦可传播HBV。因此，在西方国家将乙肝
14、列为性传播疾病(STD)之一。尿液、鼻液、汗液和粪-口传播的可能性很小。,致病性和免疫性,传播途径,致病机制 乙型肝炎的临床表现呈多样性，可表现为无症状病毒携带者、急性肝炎、慢性肝炎及重症肝炎等。HBV的致病机制，除了HBV对肝细胞直接损害外，主要是通过宿主的免疫应答引起肝细胞的病理改变的临床表现。,致病性和免疫性,1细胞介导的免疫病理损伤2体液免疫所致的免疫损伤3自身免疫所致的损伤,致病性和免疫性,免疫性 体液免疫：抗HBs：中和体液中HBV，使其失去感染性。抗PreS2：封闭病毒与肝细胞表面的PHSA受体，阻止病毒吸附于肝细胞。抗Hbe：可通过与肝细胞表面HBeAg结合后，通过补体介导而参
15、与破坏病毒感染的肝细胞。细胞免疫：主要依靠CTL。CTL对HBV感染的肝细胞(靶细胞)有直接杀伤作用。据认为，针对HBcAg的CTL在清除HBV感染的靶细胞中有较重要的作用。,致病性和免疫性,NT抗体,HBV与原发性肝癌HBV感染与原发性肝癌的发生有密切关系，其依据是：经流行病学调查表明，乙型肝炎患者及HBsAg携带者的原发性肝癌发生率明显高于未感染人群（危险性高217倍）；用与HBV分子生物学相似的土拨鼠肝炎病毒 (WHV) 可诱发土拨鼠原发性肝癌。而未感染鼠则无一只发生肝癌；用HBVDNA探针与肝癌组织进行Southern 印迹核酸杂交时，获得阳性结果，说明肝癌细胞染色体上整合有HBVDN
16、A。,致病性和免疫性,最常用的是采用血清学方法检测患者血清中HBV抗原、抗体，并根据这些标志进行分析判断。近年来，临床上也常采用PCR技术对乙型肝炎进行辅助诊断。,微生物学检查法,检测HBV抗原、抗体常用的方法有RIA、ELISA法，间接血凝、反向间接血凝，对流免疫电泳、双向琼脂扩散法等，其中最敏感的方法是RIA、ELISA。检测的项目主要是HBsAg和抗HBs、HBeAg和抗HBe、以及抗HBcIgM和抗HBcIgG，必要时也可检测PHSA、PreS1和PreS2的抗原和抗体。上述各项检查组成一套乙型肝炎病毒抗原抗体检测系统 (HBV血清标志) 。,微生物学检查法,1. HBsAg：感染性（+）；传染性（+）；抗HBs： NT抗体，免疫力（+）； 2. HBcAg：DNA复制标志，血清中（-），肝细胞核内（+）；抗HBc：无中和作用，包括抗HBc IgM ：急性乙肝抗HBc IgG：恢复期 3. HBeAg：感染性（+）；传染性（+）；恢复期（-）；抗Hbe：无中和作用，恢复期（+），携带者，慢性（+）； 4. PreS1、PreS2和PHSA受体：新感染（+）；抗PreS1、抗PreS2： NT抗体，恢复期（+）；,
