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1、性病的实验室诊断,2,性病实验室诊断技术,性病是一组主要通过性接触而传播的一种传染性疾病。 包括细菌、真菌、病毒、衣原体、支原体、螺旋体、原虫和寄生虫等性病实验室诊断 为临床正确诊断提供科学依据,病原体 淋球菌 梅毒螺旋体 生殖器疱疹病毒 生殖道沙眼衣原体 乳头瘤病毒 HIV病毒 杜克雷噬血杆菌 衣原体 念珠菌 滴虫 疥虫 阴虱 肝炎病毒 ,病 种 淋病 梅毒: 生殖器疱疹: 生殖道沙眼衣原体感染: 尖锐湿疣: HIV感染/艾滋病: 软下疳: 性病性淋巴肉芽肿: 念珠菌性阴道炎: 滴虫性阴道病: 疥疮: 阴虱病: 肝炎（乙、丙）： ,性传播疾病(STD)/性传播感染(STI),主要常见性病实验
2、室检测介绍,梅毒 淋病,常用梅毒检测方法,病原学检测血清学检测,病原学检查,原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。 方法：病原学检查的主要方法有暗视野显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法,暗视野显微镜检查,标本采集部位： 一期或二期梅毒的皮肤或粘膜损害有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净，轻压皮损至渗液（避免出血）。然后用载玻片印取渗液，立即检查，未破溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。 淋巴结穿刺液以无菌操作法用注射
3、器吸取0.3-0.5ml生理盐水，穿刺入淋巴结，再回吸数次，最后将吸取液涂玻片上，立即检查。,暗视野显微镜检查,制片 标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖玻片，在暗室中于暗视野显微镜上油镜观察 观察 先用低倍镜，再转至高倍镜 梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光，螺旋整齐，运动规律（旋转、伸缩或蛇行运动）,9,梅毒血清学检测方法,10,梅毒实验室操作要求,梅毒血清学试验操作和结果分析 标本的采集和分离编号或姓名登记采血、分离血清和贮存,11,梅毒实验室操作要求,试剂准备 温度、器具的校正试剂、血清和反应板恢复到试验温度试剂鉴定,12,梅毒实验室操作要求,试验操作 血清量的控制试剂量的控制旋转仪速
4、度和时间的控制,非梅毒螺旋体抗原血清试验,1、原理： 梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原的抗体，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体 2、方法：快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）,RPR,定性试验 在纸卡圆圈中加入50L待检血清，涂满整个圆圈 使用滴管和专用针头（60滴/mL），加1滴抗原悬液 旋转100rpm 8min 立即判断结果,RPR,定量试验 待检血清用生理盐水在纸卡圆圈中作6个稀释度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32 按定性试验步骤操作，以出现阳性反应的最高稀释度报告结果,RPR定量试验,中等至大的凝块为阳性（圈4和
5、7）有明确但很小的凝块为弱阳性（圈2和3）颗粒均匀分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）为阴性,非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点： 优点： *敏感性特异性好*不需要昂贵设备，简单易行*适用于大量人群的血清筛查*有效治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、判愈、复发。*20分钟可获得实验结果。*试剂与方法均已标化，各实验室间结果可比较。*试验可被内部质控和外部质控监控进行。 缺点：*敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，BFP反应和前带现象,非特异性血清试验的假阴性：1）有25%40%的未治梅毒在晚期隐性期可自然逆转为阴性，约30%的心血管和神经梅毒呈阴性。 2）前带现象（the prozo
6、nphenomenon）, 即为抗原抗体量比例不适，抑制阳性反应。一般易发生在滴度在1：500以上的标本中。 1%的II期梅毒会出现前带现象。 3）操作人员应注意实验的温度，试剂盒从冰箱取出后应恢复至室温，室温过低（10）可能出现假阴性或结果不准确。,非特异性血清试验生物学假阳性0.25%0.86%阳性标本为生物学假阳性，主要出现在自身免疫疾病的患者如内风湿性关节炎、其它病原体感染（病毒性肺炎、恶性肿瘤和麻风）、妊娠妇女。应排除技术性、生理性和生物学假阳性，并用特异性试验来证实。,非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查
7、。 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,梅毒螺旋体抗原血清试验,1、原理：用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体 2、方法：梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT)荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）化学发光免疫分析法（CLIA）梅毒IgM抗体检测（IgM）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）,梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA),原理：将梅毒的精致菌体成分包被在人工载体明
8、胶颗粒上，这种致敏粒子和检测样品中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋抗体。,TPPA的结果判读,+试剂盒内部阳性对照 1、1：2560 2、阴性 3、1：160 4、阴性 5、1：320,梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验,原理：用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺旋体为抗原，或重组抗原包被固相，检测特异性梅毒螺旋体抗体,快速试验-免疫渗滤法,在试纸条上包被螺旋体特异性抗原成份，如47kD、15kD抗原，利用免疫渗滤技术，将试纸条插入待测血清，观察血清与特定抗原成份的反应 可在10分钟之内得到结果，快速、方便 是特异性螺旋体实验 需要进一步验证方可用于临
9、床诊断,梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如TRUST等)初筛阳性标本的确证试验。 梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体抗体试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不能作为疗效观察的指标。 TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。,梅毒血清学试验结果的临床意义总汇,TRUST TPPA 意义RPR TP-ELISA_ _ 排除梅毒 一期梅毒的早期 + + 现症梅毒(梅毒孕妇所生 的婴儿除外) + - 生物学假阳性- + 早期梅毒经治疗后,淋病,淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,简称淋球菌
10、)引起的各种化脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾病. 淋球菌为革兰阴性双球菌，大小约0.60.8m。通常成对生长，形如双肾样，两菌接触面平坦。 淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌脑膜炎球菌及其他共栖奈瑟菌在生物学上有许多相似性，可通过生化特性加以鉴别,淋病的实验室诊断方法,直接显微镜检查，观察淋球菌细胞； 分离培养淋球菌； 非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原或DNA（EIA, PCR/LCR）,标本的采集和运送-取材部位,男性异性恋者:采集尿道标本，有口淫史者加取咽部标本；同性恋者: 采集尿道、直肠及咽部标本. 女性采集宫颈标本，必要时从尿道、直肠、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材； 幼女采集阴道分泌
11、物； 新生儿眼炎患者采集眼结膜分泌物，对其母亲采集宫颈、尿道及直肠标本。,标本的采集和运送-运送,淋球菌的抵抗力弱，对热敏感，不耐干燥。取材后标本若不能立即接种于选择性培养基上时，需采用运送系统。置于非营养型运送培养基中的标本应在12小时内送到实验室，接种于选择性培养基，分离阳性率可达90%以上。超过24小时则分离阳性率下降。,直接显微镜检查,染色方法:革兰染液美兰染液姬姆萨染液荧光抗体,直接显微镜检查,原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黄白色脓性分泌物，其多形核白细胞内可找到革兰染色阴性的双球菌。 方法：革兰染色为一传统方法，革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性
12、菌。,革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌,美兰染色,直接显微镜检查的临床意义,男性淋菌性尿道炎的尿道标本敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。 宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时敏感性仅4070%。不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。 亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。,淋球菌培养,1原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。 2、方法特点： 敏感性 81100%。特异性 100%,淋球菌培养,培养法为诊断淋病的金标准. 对女性淋病的确诊
13、应做淋球菌培养 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 培养的敏感性81100%。 培养的优点有： 特异性极高（100%）； 可发现无症状淋球菌感染患者； 可确诊儿童性虐待； 可用于进一步作药敏试验； 可用于治疗后的判愈试验。,淋球菌培养-选择性培养基,评价培养基质量的一个重要指标:男性淋菌性尿道炎标本的革兰染色与培养的符合率应达95%100%。如果革兰染色阳性/培养阴性的比率较高则表明选择性培养基的质量欠佳,淋球菌培养-接种标本,取材后标本应尽可能及早接种。培养基应先置于室温中预温。将取材的拭子转动涂布于平皿的上1/4范围，然后用接种环分区划线，以保证获得较纯的单个菌落。,接种标本-四区
14、划分接种,淋球菌培养-培养条件,淋球菌培养-观察结果,培养24小时后检查平皿，此时没有菌生长的平皿应继续培养至48小时，仍无菌生长才可丢弃，作出淋球菌培养阴性的报告。 对选择性培养基上分离的直径在0.51mm，无色、灰白色的半透明菌落应作进一步鉴定。,淋球菌培养-观察结果,淋球菌氧化酶阳性,淋球菌培养-淋球菌的确证试验,糖发酵试验 免疫学试验 -荧光抗体染色-协同凝集试验 酶底物试验 DNA探针试验,糖发酵试验,糖发酵试验检测奈瑟球菌分解特定糖类(葡萄糖、麦芽糖、乳糖及蔗糖)产酸的能力。根据淋球菌仅分解葡萄糖，脑膜炎球菌分解葡萄糖和麦芽糖，乳屑奈瑟球菌分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖或不分解这些糖类，可将淋球菌与可能在淋球菌选择性培养基上分离出的其他奈瑟球菌加以鉴别。,糖发酵试验-奈瑟球菌属的糖发酵特征,淋球菌的鉴定特征,淋球菌培养的临床意义,谢谢,
