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1、艾梅乙的实验室诊断与沟通,2,梅毒,梅毒是由苍白（梅毒）螺旋体引起的慢性、系统性性传播疾病。主要通过性途径传播，临床上可表现为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潜伏（隐性）梅毒和先天梅毒（胎传梅毒）等。是中华人民共和国传染病防治法中，列为乙类防治管理的病种。,传播途径： 性接触是主要的传染途径。 未经治疗的患者在感染后的1 年内最具有传染性（显性和隐性梅毒患者均是传染源）。随着 病期的延长，传染性越来越小。到感染后2 年，通过性接触一般无传染性。母婴传播。 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播，但妊娠时仍可再传染胎儿, 但病期越长传染性越小。,诊断,梅毒的诊断必须依靠流
2、行病学病史、临床症状及实验检查进行综合分析。 梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义。,实验室诊断,1、暗视野检查/镀银染色法 2、非梅毒螺旋体抗原血清实验（非特异性梅毒抗体，TRSUT、RPR ） 3、梅毒螺旋体抗原血清实验（特异性梅毒抗体，TPPA、TPHA、 TP-ELISA ）,暗视野显微镜检查 ： 取患者的可疑皮损（如硬下疳、丘疹等），在暗视野显微镜下检查，见到可运动的梅毒螺旋体，可作为梅毒的确诊依据。 暗视野下是非常小的纤细的发光体，长约6 14 um,8 14 个规则、紧密的螺旋。 典型的运动方式：蛇形、伸缩式、螺旋式 看到典型的TP的特征和运动方式的螺旋体便可判定为TP阳性。,
3、暗视野检查临床意义： 当标本阳性时，可确诊梅毒。 适用于早期梅毒（一二期）。 阴性不能排除梅毒诊断。 不适用于来自口腔的标本。 暗视野显微镜检查是能够立即在获得性或先天性梅毒的早期进行直接诊断的唯一标准。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验（TRSUT）, 梅毒螺旋体一旦感染人体，在3-4周产生抗类脂质抗原的IgM和IgG的混合抗体（也叫反应素）。 可做定量试验，用于判断疗效、判断病情活动程度、预后随访指标。(注意前滞现象，假阴性) 早期梅毒治疗后血清低度下降4倍认为治疗有效。 复发或再感染可阳转或滴度升高。 有些疾病可导致生物学假阳性。技术、急性热性病、结缔组织病、SLE等，但一般滴度不会超过1:8
4、，而且随着原发疾病好转，滴度可以自行下降。,梅毒螺旋体抗原血清学试验 TPPA、 TP-ELISA,以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。 感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者几乎终生阳性。 TPPA、TPHA为梅毒确证试验， 其敏感性：一期76%，二期100%潜伏97% 特异性100%，可有1%假阳性存在，如SLE。 IgM抗体可作为梅毒早期诊断或胎传梅毒诊断。,我科室目前检测梅毒主要为TP-ELISA进行筛查，阳性者进行TPPA和TRUST的补充试验。,TRUST滴度与治疗效果,治疗成功：早期梅毒患者在治疗后6个月内症状消失，且滴度有至
5、少4倍的下降。晚期梅毒或隐性梅毒在治疗后12-24个月内滴度有至少4倍的下降。 治疗失败：治疗后症状持续或重新出现；治疗后RPR滴度反而上升了4倍或以上；RPR滴度较高（1:32或以上）且在六个月内没有达到4倍的下降。抗梅毒治疗失败的病人应考虑合并HIV感染及神经梅毒的可能性。 血清固定：经正规治疗后，梅毒患者RPR一般都会转为阴性，但有1-3%的病人即使经足量抗梅治疗，滴度仍持续呈低滴度阳性，这种现象称为血清固定，其原因尚不明了。血清固定患者的滴度重又上升则提示再次感染梅毒。,疗后血清学随访,方法:TRUST时间 ： 第1年，每3个月检查1次。 第2年，每6个月检查1次。 第3年，最后1个月
6、检查。,胎传梅毒实验室诊断标准,婴儿可自母体获得IgG，TPPA和ELISA等试验均可呈假阳性。 暗视野检查阳性。 非梅毒螺旋体抗原血清试验持续阳性。 非梅毒螺旋体抗原血清抗体滴度是母亲的4倍以上。 患儿早期IgM阳性。 随访18个月观察。 注应取婴儿静脉血进行检测，而不是脐带血。,神经梅毒的实验室诊断,梅毒患者出现神经症状者，或者经过驱梅治疗无效者，应作脑脊液检查。这一检查对神经梅毒的诊断、治疗及预后的判断均有帮助。检查项目应包括：细胞计数、总蛋白测定、RPR及TPPA试验等。 梅毒血清学试验（TRUST、TPPA）阳性。 脑脊液异常（WBC计数 10*10 /L、蛋白500mg/L）。 脑
7、脊液VDRL（玻片法检测IgM抗体实验）试验阳性。,我科梅毒的检测为每周一三五，周一三五才抽血的要下个时间才能检测。 如临床需要我科可进行快速金标检测，对于阳性者需做TRSUT检测，判定其是否为活动期梅毒，一般金标阳性者TP- ELISA基本为阳性，而梅毒抗体IgG为终身携带，其TPPA基本为阳性。 对孕妇和新生儿母亲为阳性者可按一下流程进行：,艾滋病,人类免疫缺陷病毒（HIV），即艾滋病（AIDS，获得性免疫缺陷综合征）病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。1981年，人类免疫缺陷病毒在美国首次发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒，属逆转录病毒的一种。 检测：全国艾滋病检测技术规范2
8、015年修订版,逆转录病毒，其结构上的多种特异蛋白质作可为我们检测的目标,如gp120,gp41,p17,p24等,HIV感染以后的血清学动态,HIV检测,1、样本的采集和处理 全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品可用于HIV抗体检测 全血、血清、血浆可用于HIV抗原检测 抗凝全血可用于CD4+和CD8+淋巴细胞测定 血浆可用于病毒载量、基因型、耐药检测 淋巴细胞富集液、全血可用于HIV核酸定性定量、基因型检测和HIV-1分离培养,2、样本的保存 未检测标本：短期内（1周）可放于2-8，一周以上应存放于-20一下。用于核酸检测的样品4天内检测可放于4度，3月以内放-20度，3月
9、以上放-70度保存。 检测后标本:初筛有反应及时进行补充试验，样本应置于带盖试管内，并标记唯一的编码姓名种类和采集时间。筛查阴性标本按具体要求决定（2-8度冰箱保存7天后按医疗废物处理）,HIV抗体检测要点,1、筛查试验有反应，须做补充试验。 补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验，特定条件下的替代检测，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核酸定性和核酸定量试验）。替代检测包括三种酶联免疫试验、三种快速试验或酶联免疫加快速试验。 2、筛查试验无反应，不应做补充试验,结果报告,筛查报告
10、 筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；筛查有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性“，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；初筛报告为”HIV感染待确定”（09版为HIV抗体待复检），不能出具阳性报告。 HIV抗体筛查报告需由一名检验人员和一名审核者签字。并同时报告院感保健科和临床。,确证报告：由确证试验室出具，我科为初筛实验室，只能出具待确定的结果，送市疾控做确证试验。筛查有反应须送疾控的标本送检必须要有病人的身份证信息，基本信息（电话号码、婚姻状况等），并有我科盖章签字的复检单，送检标本须7日内送检。,关于HIV检测弱阳性的问题 妇产科出现过孕
11、妇HIV检测弱阳性的情况，虽考虑为孕妇特殊人群导致的假阳性，但依然应该引起重视，遇到初筛弱阳性的情况，我科建议重新采血用两种试剂进行复检，若有任意一种有反应，则须送市疾控进行确证试验。 弱阳性不排除初期感染抗体效价低的情况。 HIV初筛无反应不能排除窗口期的情况，尤其对于高危人群、有冶游史、职业暴露等情况，建议隔3个月、6个月、1年均进行随访检测。,乙肝,乙肝是由乙型肝炎病毒感染引起的，以肝脏炎性病变为主，并可引起多器官损害的一种疾病。少数晚期可转化为肝硬化、肝癌。是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种疾病。 乙肝病毒。是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科，HBV 的抵抗力较强，对低温、
12、干燥、紫外线、一般浓度的化学消毒剂都能够耐受，但6510 小时 、煮沸10 分钟 或高压蒸气均可灭活HBV。含氯制剂、环氧乙烷、戊二醛、过氧乙酸和碘伏等也有较好的灭活效果。,传播途径,1.血液传播：血液传播是乙肝传播途径中最常见的一种，比如输血过程中被感染，但是随着医学的进步，此现象得以了有效控制，但是尚未杜绝。 2.医源性传播：医源性传播也就是说在就医的过程中被感染，目前多数存在的是微量注射或接种而引起的感染，因此要特别注意注射、接种、纹身等使用的各种医疗器具。 3.母婴传播：患急性乙肝或携带乙肝表面抗原的母亲可将乙肝病毒传给新生儿，尤其携带乙肝表面抗原的母亲为主要的感染类型。 （值一提的是
13、乙肝免疫球蛋白可以有效地抑制乙肝母婴的传播，有效率可达百分之九十以上。） 4.性传播：乙肝病毒的性传播是性伙伴感染的重要途径，这种传播亦包括家庭夫妻之间的传播。 注：成年人感染乙肝病毒后，因为免疫系统比较完善，所以有可能及时清除乙肝病毒。,乙肝的检测,1、乙肝两对半定量： 为乙肝病毒表面抗原（HbsAg）抗-HBs（乙肝病毒表面抗体） HBeAg（乙肝病毒e抗原） 抗HBe（乙肝病毒e抗体） 抗-HBc（乙肝病毒核心抗体） 2、乙肝DNA定量 3、乙肝mRNA定量,浅谈乙肝两对半,HBsAb是乙肝唯一有效的保护性抗体。高危人群HBsAb浓度值100 mIU/ml，具有足够的保护作用。 HBsA
14、g可提示存在乙肝病毒的感染。 HBeAg提示乙肝复制活跃，传染性强。 HBeAb提示乙肝复制被抑制，可能好转，传染性弱。 HBcAb提示感染过或接触了乙肝病毒。,乙肝两对半常见模式,1、- - - - - 过去和现在均未感染HBV 2、- - - - + 曾感染HBV，急性感染恢复期 3、- - - + + 过去和现在均已感染过HBV 4、- + - - - 预防注射疫苗 5、- + - + + 既往感染；急性HBV感染恢复期 6、- + - - + 既往感染；急性HBV感染已恢复 7、+ - - - + 急性HBV感染；慢性HBsAg携带者 8、+ - - + + 急性HBV感染趋向恢复；慢
15、性HBsAg 携带者，传染性弱 9、+ - + - + 急性或慢性，传染性极强 10、+ - - - - 急性HBV感染早期，HBsAg携带者 11、+ - + - - 急性HBV感染早期，传染性强 12、- - + + + 急性感染中期 13、+ - + + + 急性感染趋向恢复；慢性携带者 14、+ - - + - 急性感染趋向恢复 15、- - - + - 急性感染趋向恢复 16、- + - + - HBV感染已恢复,乙肝DNA检测，一般DNA定量10的5次方表示病毒载量大，复制活跃，传染性强。10的2次方表示复制量低，传染性低。 乙肝mRNA检测，由于乙肝病毒生活史复制过程必须生成mR
16、NA,所以现在最新的研究表示，mRAN在提示乙肝病毒复制的过程优于乙肝DNA和两对半。但目前我科无法开展此项目。,讨论,大三阳肯定比小三阳严重？ 第一：如果“小三阳”DNA检测呈阴性，肝功能、B超等均长期正常，说明病毒已不复制，无传染性，所以无需隔离与治疗。这种情况约占“小三阳”患者总数的6070，如果一味追求转阴而服用大量治疗性中西药物只会增加肝脏负担，甚至招致不良后果。 第二：“小三阳”还有一种表现为乙肝病毒DNA低水平复制（PCR检测105），肝功能正常或轻度异常，称为慢性乙肝病毒残留期。这种情况约占“小三阳”患者总数的20，目前国内对此种患者最容易忽视。如果不积极治疗，任其发展，可导致肝硬化、肝癌。 第三：最严重的是乙肝病毒DNA高水平复制（PCR检测105），肝功能不正常，称为“e抗原阴性的慢性乙肝”。这种情况约占“小三阳”患者总数的10，它的特点是病毒复制活跃，传染性强，是由于乙肝病毒变异所致。这种“小三阳”反而比“三大阳”严重，其转化为肝硬化、肝癌的几率更高。,两对半及HBV-DNA全阴就是没有乙肝？ 在乙肝继发的肝病及肝癌晚期情况中，因为肝细胞被破坏殆尽，乙肝病毒无容身之处，所以无法查到其抗体，同样的，也无法检测到乙肝病毒的DNA。 依然不能排除乙肝病毒有变异的可能性和检测方法的局限性。 所以乙肝病人应该定期复查乙肝两对半、乙肝DNA、肝功能及相关检查。,
