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1、小思考：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体细菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。建立基因文库，便于随时获取目的基因。 小讨论：构建基因表达载体时，没有加入启动子。 小应用：基因治疗一般针对很难用一般药物进行治疗的遗传病。,1基因拼接的理论基础 (1)DNA是生物的主要遗传物质。 (2)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。 (3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。,2外源基因在受体内表达的理论基础 (1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。 (2)遗传信息的传递都遵循中心法则阐述的信息流动方向。 (3)生物界共用一套遗传密码子。,3基因
2、工程的基本工具,DNA连接酶与DNA聚合酶的比较,一般来说，天然运载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，对某些天然的运载体进行人工改造。 限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测。 限制酶和DNA连接酶的比较,【例1】 (2009年浙江高考)下列关于基因工程的叙述，错误的是 ( ) A目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达,解析：目
3、的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物；基因工程中常用的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶；大肠杆菌为原核生物，不含有内质网和高尔基体等细胞器，不能对蛋白质进行加工，其合成的胰岛素原无生物活性。运载体中的抗性基因为标记基因，其作用是有利于筛选含重组DNA的细胞，不能促进目的基因的表达。 答案：D 评析： 本题考查基因工程的工具、目的基因的来源及标记基因的作用。,变式1：除了下列哪一项之外，其余的都是基因工程的运载体所必须具备的条件 ( ) A能在宿主细胞中复制并保存 B具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 C具有标记基因，便于进行筛选 D是环形状态的DNA分子 解析：原核细胞如细菌的核
4、DNA也是环状DNA，但不能作运载体，因为它不具备A、B、C三个条件。 答案：D,1目的基因的获取 (1)从基因文库中获取目的基因 优点：有了基因文库，就可以随时从中提取所需要的目的基因，引入受体细胞使之表达。 (2)人工合成目的基因,(3)利用PCR技术扩增目的基因 PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。PCR扩增是获取目的基因的一种非常有用的方法，也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。 目的：通过指数式扩增获取大量的目的基因。,2基因表达载体的构建 (1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，并使目的基因能够表达和发挥作用。 (2)基因表达载体的
5、组成：目的基因启动子终止子标记基因复制原点。,启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端。它是RNA聚合酶识别、结合的部位。 终止子：一段有特殊结构的DNA短片段，位于基因的尾端。作用是使转录过程停止。 标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光基因等，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因(目的基因是否导入成功)。 (3)基因表达载体的构建方法,3将目的基因导入受体细胞 (1)目的：目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 (2)受体细胞种类不同，导入方法不同,(3)受体生物不同，所用的受体细胞种类也不相同 a植物：可以是卵细胞(受精卵)、体细胞(可经组织培养成为完整植株
6、)。 b动物：受精卵(因为体细胞的全能性受到严格限制)。 (4)转化实质：目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。,4目的基因的检测与鉴定,比较基因、目的基因、基因文库 a基因是有遗传效应的DNA片段，是控制性状的遗传物质的结构和功能的基本单位，基因的脱氧核苷酸序列代表遗传信息。 b目的基因是指基因工程操作中需要的外源基因，它是编码某种蛋白质的结构基因，如生物的抗逆性基因、抗虫基因等。,c基因文库：是将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中而储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。 基因文库就相当于某种生物的基因仓库，储备着大量的同种基因，为获得大量的目的基因做准备。 DN
7、A复制与PCR技术,插入的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作运载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。 两次使用的限制酶为同一种酶，这样形成的黏性末端碱基之间互补，便于连接。 在整个工程中，只有第三步将目的基因导入受体细胞过程中不发生碱基互补配对，其他步骤均发生配对。,A过程需要的酶是逆转录酶，原料是A、U、G、C B要用限制酶切断质粒DNA，再用DNA连接酶将目的基因与质粒连接在一起 C如果受体细胞是细菌，可以选用枯草杆菌、炭疽杆菌等 D过程中用的原料不含有A、U、G、C,解析：过程是逆转录，利用逆转录酶合成DNA片段，需要的原料是A、T、G、C；是目的基因与质粒DN
8、A重组阶段，需要限制酶切断质粒DNA，再用DNA连接酶将目的基因与质粒连接在一起；如果受体细胞是细菌，则不应该用致病菌，而炭疽杆菌是致病菌；过程是基因的表达过程，原料中含有A、U、G、C。 答案：B 评析： 本题考查基因工程的操作步骤,变式2：采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是 ( ) 将毒素蛋白注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A B C D,解析：根据基因工程一般要经历四个步
9、骤分析，上述操作是正确的。将毒素蛋白注射到棉受精卵中，没有获得目的基因，将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中，没有将目的基因与受体细胞结合，所以是错误的操作。 答案：C,1基因工程的应用 (1)植物基因工程成果 抗虫转基因植物(抗虫棉是转入Bt毒蛋白基因培育的)。 抗病转基因植物(病毒外壳蛋白基因、病毒复制酶基因)。 抗逆转基因植物(生物的抗性基因)。 转基因改良植物(营养价值、实用价值、观赏价值)。,(2)动物基因工程成果 提高动物生长速度(外源生长激素基因)。 改善畜产品的品质。 转基因动物生产药物(牛、山羊等动物乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素、抗胰蛋白酶)
10、。 转基因动物作器官移植的供体(导入调节因子抑制抗原决定基因表达或除去抗原决定基因，培育没有免疫排斥反应的转基因克隆器官)。,(3)基因工程药物 来源：主要来自转基因工程菌。 成果：淋巴因子、抗体、疫苗、激素等。 作用：预防和治疗人类肿瘤、心血管疾病、遗传病、各种传染病、糖尿病、类风湿等疾病。,(4)基因治疗 概念：是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，是目前治疗遗传病最有效的手段。 成果：将腺苷酸脱氨酶基因转入患者淋巴细胞中，治疗复合型免疫缺陷症。,方法 a体外基因治疗：先从病人体内获得某种细胞，如T淋巴细胞，进行培养。然后，在体外完成基因转移，再筛选
11、成功转移的细胞扩增培养，最后重新输入患者体内。 b体内基因治疗：直接向人体组织细胞中转移基因的治病方法。如1994年美国科学家利用经过修饰的腺病毒作载体，成功地将治疗遗传性囊性纤维化病的正常基因转入患者肺组织中。,2蛋白质工程 (1)概念：是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 (2)过程：预期蛋白质功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到对应的脱氧核苷酸序列。,(3)蛋白质工程与基因工程比较,动物基因工程主要为了改善畜产品的品质，不是为了产生体型巨大的个体。 基因治疗目
12、前只是处于初期的临床试验阶段，在临床上尚未开展这方面的治疗。 DNA分子制作探针进行检测时应检测单链，即将双链DNA分子打开。 Bt毒蛋白基因产生Bt毒蛋白并无毒性，进入昆虫消化道被分解成多肽后产生毒性。 青霉素是青霉菌产生的，不是通过基因工程生产的。,由于密码子具有“简并性”，故由某种特定氨基酸序列所推测出的脱氧核苷酸序列可有多种，即逆推所得的基因可有多种。 应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质的改造，主要原因如下： a任何一种天然蛋白质都是由基因编码的，改造了基因即对蛋白质进行了改造，而且改造过的蛋白质可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造，即使改造成功，被改造过的蛋白质分子还是无法遗传的。
13、b对基因进行改造比对蛋白质直接改造要容易操作，难度要小得多。,【例3】 科学家将干扰素基因进行定点突变，然后导入大肠杆菌表达，使干扰素第17位的半胱氨酸改变成丝氨酸，结果大大提高干扰素的抗病活性，并且提高了储存稳定性。该生物技术为 ( ) A基因工程 B蛋白质工程 C基因突变 D细胞工程,解析：基因工程是通过对基因的操作，将符合人们需要的目的基因导入适宜的生物体，使其高效表达，从中提取所需的基因控制合成的蛋白质，或表现某种性状，蛋白质产品仍然为天然存在的蛋白质；蛋白质工程却是对控制蛋白质合成的基因进行改造，从而实现对其编码的蛋白质的改造，所得到的已不是天然的蛋白质。题目中的操作中涉及的基因显然
14、不再是原来的基因，其合成的干扰素也不是天然干扰素，而是经过改造的，是人类所需的蛋白质，因而整个过程利用的生物技术应为蛋白质工程。 答案：B,评析： 本题考查基因工程的应用,变式3：近年来基因工程的发展非常迅猛，科学家可以用DNA探针和外源基因导入的方法进行遗传病的诊断和治疗，下列做法中不正确的是 ( ) A用DNA探针检测镰刀型细胞贫血症 B用DNA探针检测病毒性肝炎 C用导入外源基因的方法治疗半乳糖血症 D用基因替换的方法治疗21三体综合征,解析：镰刀型细胞贫血症是由于基因突变引起的疾病，用珠蛋白的DNA探针可以检测到；用DNA探针也可以很方便地检测出肝炎患者的病毒；半乳糖血症是由于体内缺少
15、半乳糖苷转移酶，将带有半乳糖苷转移酶的基因导入半乳糖血症患者的体内，可以治疗这种疾病；21三体综合征是由于患者多了一条21号染色体，不能用基因替换的方法治疗。 答案：D,1(2009年江苏高考)苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。,(1)将图中的DNA用Hind、BamH完全酶切后，反应管中有_种DNA片段。 (2)图中表示Hind与BamH酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得_种重组质粒；如果换用Bst与BamH酶切，目的基因与质粒连接后可获得_种重组质粒。,(3)目的基因插入质粒
16、后，不能影响质粒的_。 (4)图中的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的TDNA导入植物细胞，并防止植物细胞中_对TDNA的降解。 (5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞_。,(6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的_基因频率的增长速率。 解析：(1)BamH在中有2个切点，Hind在中有1个切点，故可切出4种DNA片段。(2)因Hind切出的末端与BamH切出的末端不同，则重组的质粒有2种。Bst与BamH切出的末端相同，则有1种重组质粒。,
