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1、实验室生物安全 平山县疾控中心,前 言,生物安全是重要的国际热点问题 我国2003年上半年爆发流行的SARS和2004年有可能从实验室传播出去的SARS病例引起了社会的普遍关注。,前 言,国务院拟定了病原微生物实验室安全管理条例，卫生部颁发了行业标准微生物和生物医学实验室生物安全通用准则,将实验室的安全管理提升到依法管理的层面上。,定 义,1、生物危害：由生物因子形成的潜在的危险。 2、实验室生物安全：避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施。,定 义,3、生物因子：一切微生物和生物活性物质。 4、病原体：可使人、动物或植物致病的生物因子。,定 义,5、实验室生物
2、安全防护：实验室工作人员所处理的实验对象含有致病的微生物及其毒素时，通过在实验室设计、使用个体防护装置、严格遵从标准化的工作及操作程序和规程等方面采取综合措施，确保实验室工作人员不受实验对象侵染，确保周围环境不受其污染。,定 义,6、危险废弃物：有潜在生物危险、可燃、易燃、腐蚀、有毒、放射及对人和环境有害的一切废弃物。,定 义,7、气溶胶：悬浮于气体介质中的粒径一般为0.001 -100m的固体或液体微小粒子形成的相对稳定的分散体系。,定 义,8、微生物危害评估：对食盐微生物和毒素可能给任何环境带来的危害所进行的评估,病原微生物的类别：,依据病原微生物的传染性、实验室感染的机会、感染后对人或动
3、物的危害程度，以及是否有有效的预防和治疗措施的因素，病原微生物被分为四类：,病原微生物的类别,第一类病原微生物是指在通常情况下不可能引起人或动物疾病的微生物；,病原微生物的类别,第二类病原微生物是指能够引起人或动物疾病，在正常情况下对实验室工作人员、社区、动物或环境不会引起严重危害，发生实验室暴露可能引起严重感染，但有有效的预防和治疗措施的微生物；,病原微生物的类别,第三类病原微生物是指能够引起严重的人或动物疾病，在个体之间的偶然接触不会造成病原传播，但有有效的预防和治疗措施的微生物；,病原微生物的类别,第四类病原微生物是指能够引起严重的人或动物疾病，而且容易在个体间发生直接或间接传播，通常没
4、有有效的预防和治疗措施的微生物。,传染性微生物危险组的划分,危险组1（低个体危害，低群体危害）,危险组2（中等个体危害，有限群体危害）,危险组3（髙个体危害，低群体危害）,危险组4（髙个体危害，髙群体危害）,实验室人员可能受到感染的途径,吸入含病原体的气溶胶引起感染 能产生气溶胶的操作或事故包括：离心、溢出或溅出、混合、混旋、研磨以及开瓶时产生。,摄入病原体 能造成经口摄入病原体的操作或事故包括：口吸吸管、液体溅入口、在实验室吃东西、饮水、化妆、抽烟、不良习惯等,由皮下或黏膜透入 含传染源的液体溢出或溅洒在皮肤或黏膜上；皮肤或黏膜接触污染的表面或污染物；以及通过从手到面部的动作造成（如戴眼镜
5、、揉眼等)。,意外接种 被污染的针尖刺伤;被刀片或碎玻璃片割伤;动物或昆虫咬伤或抓伤等。,建造生物安全实验室的目的,主要保证下列三个方面的安全： 人员安全 环境安全 样品安全,生物安全实验室分级,按生物安全等级划分: BSL1(P1)实验室: BSL2(P2)实验室: BSL3(P3)实验室: BSL4(P4)实验室:,生物安全实验室分级,BSL1(P1)实验室: 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物。,生物安全实验室分级,BSL2(P2)实验室: 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人和环境具有中等潜在危害的微生物 。,生物安全实验室分
6、级,BSL3(P3)实验室: 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗,生物安全实验室分级,BSL4(P4)实验室:适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播和传播途径不明，目前尚无有效的疫苗和治疗方法的致病微生物及其毒素。,根据以上定义，生物医学实验室的工作人员,因接触可能含有致病微生物的标本，其工作场所应达到BSL2(P2)防护要求,BSL2(P2) 实验室建设应注意的问题: 应注意实验室设计与建造、实验室安全设备与个体防护、实验室制度建设和操作要点三方面的内容：,一、实验室的设计与构造,
7、根据WHO和我国卫生部已发布实施的微生物和生物医学实验室生物安全通用准则，实验室的设计与建造应注意以下几个方面：,一、实验室的设计与构造,1、选择有资质的施工方； 2、实验室门宜带锁、可自动关闭； 3、每个实验室均应设置洗手池，洗手池宜设置在出口处；,一、实验室的设计与构造,4、 实验室围护结构内表面和地面应光滑不透水，易于清洁无缝隙，不适宜用地毯。 5、实验台表面应能防水，耐酸碱、耐有机溶剂、耐热，耐用于消毒的相关化学物质；,一、实验室的设计与构造,6、 实验室中的器具应牢固,各种器具和设备之间应保持一定距离以便于清洁。 7、应设置实施各种消毒方法的设施如高压灭菌器、化学消毒装置等对废弃物进
8、行处理；,一、实验室的设计与构造,8、应有专门放置生物废弃物的容器； 9、应设置洗眼装置； 10、实验室出口应有发光指示标志；,一、实验室的设计与构造,11、 采取自然通风的实验室应有可开启的窗户，并设置纱窗； 12、采取机械通风的实验室应不少于每小时3-4次的通风换气次数；,一、实验室的设计与构造,13、安装生物安全柜时要考虑到房间的通风和排风,不会导致生物安全柜超出正常参数运行。生物安全柜应远离门，远离能打开的窗，远离行走区，远离其他可能引起风向和压力混乱的设备，保证生物安全柜气流参数在有效范围内。,二、生物实验室安全设备及个体防护,实验室工作人员所处理的实验对象含有致病微生物及其毒素时,
9、通过在实验室建造、使用个体防护装置、严格遵从标准化的工作及操作程序和规程等方面采取综合措施。,二、生物实验室安全设备及个体防护,1、实验室应配备必要的生物安全柜或其他物理遏制装置并正确使用，以二级以上（含二级）生物安全柜为宜。,二、生物实验室安全设备及个体防护,2、 当必须在生物安全柜外处理微生物时，需采取面部保护措施如眼镜、口罩、面罩或其他防护装置。,二、生物实验室安全设备及个体防护,3、 在实验室内工作必须使用专用的防护性工作服。实验室人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室。,二、生物实验室安全设备及个体防护,4、 可能接触潜在传染源、被污染的实验台表面或设备时，需带手套。当检测工作结
10、束时或手套破损时，应摘除手套。一次性手套不得重复使用。戴手套不能接触“洁净”设施表面（如键盘、电话等），也不宜到实验室外摘除。脱掉手套后，要洗手。,二、生物实验室安全设备及个体防护,5、可能产生致病微生物气溶胶或出现溅出的操作，应在生物安全柜或其他物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备。若选用真空采血管或带安全罩的离心杯，则离心可在开放实验室内进行，而采血管或离心杯须在生物安全柜中打开或在离心机中静置30分钟后打开。,I级生物安全柜：工作状态时对人员及环境提供保护，但不保证实验对象不受污染。 II级生物安全柜（A1、A2、B1、B2型）：工作状态下遵守操作规程时既保护工作人员不受侵害，也保证实
11、验对象不受污染。 III级生物安全柜：手套箱式，确保人体与柜内物品完全隔绝。,生物安全柜的种类,II级生物安全柜Airflow,（1）从工作台开口处向内进入的气流最低流速平均为0.38米/秒(0.75ft/min)； （2）由向下的气流和从开口处向内进入的气流混合后部分经HEPA高效过滤形成向下的气流进入工作区，部分（30%气流）经HEPA过滤后外排在室内； （3）允许经HEPA过滤的外排气流在实验室内排放； （4）被污染的管道和气流通道为正压状态。 （5）A型BSC适合用于符合BSL1、BSL2、BSL3级中挥发性毒性的化学品和挥发性放射核物质试剂的实验。这类化学物或核放射物随循环气流回到工
12、作区时对实验不产生影响的实验。,CLASS II （A1）生物安全柜,CLASS II （A2）生物安全柜,（1） 通过工作区开口处进入的气流最低 流速为0.5米/秒（100ft/min）； （2） 经过HEPA过滤后的向下气流是由共用外排风道中的向下的气流和内向气流组成； （3）全部外排到室外的气流（30%）均经过HEPA高效过滤； （4）所有经生物污染的管道和气流通道均为负压状态或被负压管道或气流通道包围。 （5）适用于符合BSL1、BSL2、BSL3中带有极微量挥发性毒性的化学品和用痕迹量核放射物做添加剂、同时当上述化学物随循环气流回到工作区时对实验不产生影响的实验。 （6）它与CLAS
13、S II A型气流方向相同，但与CLASS A型不同的是，它30%外排气是接管道排到室外的。,（1）从工作台开口处向内进入的气流最低流速平均为0.5米/秒(100ft/min)； （2）经过HEPA高效过滤的向下气流大部分由未经污染的向内进入的气流和循环气流组成； （3）大部分被污染的向下的气流（70%）通过专用的管道经HEPA过滤后接管道外排至室外； （4）所有受生物污染的管道和气流通道均在负压状态下或被负压的管道或气流通道包围。 （5）B1 型BSC于符合BSL1、BSL2、BSL3级中的只有极微量挥发性毒性化学物或有痕迹量放射核物质做添加物的微生物研究，这类化学物或核放射物随循环气流回到
14、工作区时对实验不产生影响的实验。,CLASS II B1生物安全柜,（1）从工作台开口处向内进入的气流最低流速平均为0.5米/秒（100ft/min）； （2）来自实验室内或室外的经过HEPA过滤的向下气流 （即：向下的气流中没有在安全柜内循环的气流）； （3）所有向内进入的气流和向下的气流均通过HEPA过滤后排到室外而不在柜内循环，也不能排入实验室；100%接管道外排。 （4）所有的被污染的管道和气流通道都在负压状态下或被直接外排的负 压管道或气流管道所包围。 （5）B2型BSC适用于符合BSL1、BSL2、BSL3中的使用少量的挥发性化学品和用痕迹量核放射物做添加剂的微生物实验研究。,CL
15、ASS II B2生物安全柜,-全封闭的、气密结构的通风柜 通过与柜体联结的橡胶手套进行操作；柜内保持至少120Pa的负压(0.50wg)；供气通过HEPA抽入内；外排的气流经过双层HEPA过滤或经HEPA后再经燃烧处理。 CLASS III 型BSC适用于符合BSL1、 BSL2、BSL3、BSL4的生物实验。,CLASS III生物安全柜（手套柜）,级级级生物安全柜的区别,BSC 表面风速 %气流 排风系统 (m/s) 再循环 排出 级 0.36 0 100 硬管道 级A1型 0.38-0.51 70 30 排到室内或套管式的连接 级A2型 0.51 70 30 排到室内或套管式的连接 级
16、B1型 0.51 30 70 硬管道 级B2型 0.51 0 100 硬管道 级 气密结构 0 100 硬管道,三、实验室安全制度建设 和操作要点,（一）生物安全员和安全委员会,1.生物安全员：确保实验室始终如一的遵守安全规程。具体职责： 对技术方法、化学药品、材料和仪器进行周期性的内部安全检查； 证实技术人员有能力操作感染性物质；,（一）生物安全员和安全委员会,对所有人员进行持续的安全指导，及时提供安全信息； 调查意外事故和潜在传染物并及时向安全委员会汇报、提出建议；,（一）生物安全员和安全委员会,对可能与实验室工作有关的疾病或缺勤、及据档案记载可能为获得性感染的人员提供帮助； 确保对污染事故按净化程序处理，并形成详细的书面材料归档保存；,（一）生物安全员和安全委员会,
