《实验9影响酶活性的因素》由会员分享,可在线阅读,更多相关《实验9影响酶活性的因素(11页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、实验 9,影响酶促反应的因素 温度、pH、激活剂及抑制剂,实验目的,1.学习酶的催化作用特点及影响酶活力的主要因素 2.学习测定酶活力的实验方法,实验原理,生物机体广泛存在各种不同功能的酶,催化不同的生物化学反应:过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水;唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽糖,用碘显色或本尼迪试剂可以检验酶催化的水解反应产物,并比较反应速度,从而衡量酶的比活性。通过试管颜色反应,可以定性研究影响酶活性的因素。,酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强度等因素的影响。一般,温度每增高10,反应温度增加一倍,但同时,酶作为蛋白质,温度过高会发生变性逐渐失活,反应速度达到最大
2、值时的温度称为某种酶的最适温度。酶活力与环境酸碱度密切相关,某种酶只在一定pH范围才具有活力,酶活最高时的pH称为该酶的最适pH。Cl-可以使淀粉酶的活力增加,是其激活剂;而Cu2+ 使淀粉酶的活力下降,是其抑制剂。,实验器材,材料:唾液试剂:0.1% 蔗糖,0.1%淀粉, 1% 淀粉,0.2 mol/L Na2HPO4, 0.2 mol/L NaH2PO4, 1% NaCl, 1% CuSO4,1% Na2SO4,本尼迪试剂,碘水,用具:50 mL 烧杯 2 ,试管,玻璃漏斗,刻度移液管(2mL,5 mL) ,1000 uL移液器,37恒温水浴,冰浴,电炉,沸水浴, 6孔白瓷板,一次性吸管,
3、实验操作与现象,酶液的收集制备漱口后,收集唾液 0.5mL,加入30倍去离子水稀释,混合。配制酶促反应液时,其它组分均用刻度移液管进行;最后添加酶液时,可用移液器;显色反应,可用一次性吸管滴加试剂。,实验操作与现象,酶的专一性,结论:唾液淀粉酶专一性催化淀粉水解。,无酶对照,底物对照,二 温度对酶活力的影响,结论:本次实验条件下,唾液淀粉酶最适温度为? 0 可逆性抑制酶活性;沸水浴则使酶变性失活。,操作注意:严格控制温度,碘显色反应均在控温处进行。酶活力较大、小的组,可以调节酶用量,或室温代替37 进行。,三 pH对酶活力的影响,结论:实验测得唾液淀粉酶的最适pH为?,四 离子对酶活力的影响,在白瓷盘中滴加2滴碘液,反应开始后每1-2min各管取两滴反应液,碘显色观察;记录最先显著变浅的管号和反应时间。将所有试管取出,加入2滴碘液,比较颜色。,结论:实验测得Cl-是唾液淀粉酶的?而Cu2+是?,讨论: 1. 酶催化反应的主要特征有哪些? 2. 实验考查的各项因素对酶活性的调节机制? 3. 酶活性在代谢途径中的快速调节方式有哪几种重要的方式? 4.本次实验中影响实验成败的关键环节有哪些? 5.你认为本项实验设计还可以有哪些改进?为什么?,