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1、实验 9,影响酶促反应的因素 温度、pH、激活剂及抑制剂,实验目的,1.学习酶的催化作用特点及影响酶活力的主要因素 2.学习测定酶活力的实验方法,实验原理,生物机体广泛存在各种不同功能的酶，催化不同的生物化学反应：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水;唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽糖，用碘显色或本尼迪试剂可以检验酶催化的水解反应产物，并比较反应速度，从而衡量酶的比活性。通过试管颜色反应，可以定性研究影响酶活性的因素。,酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强度等因素的影响。一般，温度每增高10，反应温度增加一倍，但同时，酶作为蛋白质，温度过高会发生变性逐渐失活，反应速度达到最大
2、值时的温度称为某种酶的最适温度。酶活力与环境酸碱度密切相关，某种酶只在一定pH范围才具有活力，酶活最高时的pH称为该酶的最适pH。Cl-可以使淀粉酶的活力增加，是其激活剂；而Cu2+ 使淀粉酶的活力下降，是其抑制剂。,实验器材,材料：唾液试剂：0.1% 蔗糖，0.1%淀粉， 1% 淀粉，0.2 mol/L Na2HPO4, 0.2 mol/L NaH2PO4, 1% NaCl, 1% CuSO4,1% Na2SO4,本尼迪试剂，碘水，用具：50 mL 烧杯 2 ，试管，玻璃漏斗，刻度移液管（2mL,5 mL) ，1000 uL移液器，37恒温水浴，冰浴，电炉，沸水浴， 6孔白瓷板，一次性吸管,
3、实验操作与现象,酶液的收集制备漱口后，收集唾液 0.5mL,加入30倍去离子水稀释，混合。配制酶促反应液时，其它组分均用刻度移液管进行；最后添加酶液时，可用移液器；显色反应，可用一次性吸管滴加试剂。,实验操作与现象,酶的专一性,结论：唾液淀粉酶专一性催化淀粉水解。,无酶对照,底物对照,二 温度对酶活力的影响,结论：本次实验条件下，唾液淀粉酶最适温度为？ 0 可逆性抑制酶活性；沸水浴则使酶变性失活。,操作注意：严格控制温度，碘显色反应均在控温处进行。酶活力较大、小的组，可以调节酶用量，或室温代替37 进行。,三 pH对酶活力的影响,结论：实验测得唾液淀粉酶的最适pH为？,四 离子对酶活力的影响,在白瓷盘中滴加2滴碘液，反应开始后每1-2min各管取两滴反应液，碘显色观察；记录最先显著变浅的管号和反应时间。将所有试管取出，加入2滴碘液，比较颜色。,结论：实验测得Cl-是唾液淀粉酶的？而Cu2+是？,讨论： 1. 酶催化反应的主要特征有哪些？ 2. 实验考查的各项因素对酶活性的调节机制？ 3. 酶活性在代谢途径中的快速调节方式有哪几种重要的方式？ 4.本次实验中影响实验成败的关键环节有哪些？ 5.你认为本项实验设计还可以有哪些改进？为什么？,
