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1、乙 肝 检 验 1 2 3,山医大二院检验科贾铁文,健康大讲堂,病毒性肝炎(viralhepatitis)是由各种不同的肝炎病毒引起的一组以肝脏损害为主的传染病。类型 病因 血清标志物 甲肝: 甲型肝炎病毒(HAV) 抗HAV-IgG/IgM 乙肝: 乙型肝炎病毒(HBV) 乙肝两对半、前S1/S2 丙肝: 丙型肝炎病毒(HCV) 抗HCV-IgG/IgM 丁肝: 丁型肝炎病毒(HDV) 抗HDV-IgG/IgM 戊肝: 戊型肝炎病毒(HEV) 抗HEV-IgG/IgM,病毒性肝炎,临床症状: 恶心、呕吐、厌油、乏力、食欲减退、肝功能异常 黄疸 无症状感染或自限性隐性感染 慢性肝炎或肝衰竭病理
2、改变:以肝细胞变性、坏死、炎症反应为特点。,病毒性肝炎,乙肝:全称为乙型病毒性肝炎,是一种由乙型肝炎病毒(HBV)感染机体后所引起的疾病。 乙型肝炎病毒是一种嗜肝病毒。,乙型病毒性肝炎,乙肝流行的地区分布图,乙型肝炎感染呈世界性流行,不同地区HBV感染的流行强度差异很大; 据世界卫生组织报道,全球约20亿人曾感染过HBV,其中3.5亿人为慢性感染者,每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝癌(HCC)。,乙肝流行现状,国内现状: 乙型病毒性肝炎在我国是一种高发传染病,人群感染率达60%左右; 我国现有乙肝病毒携带者1.2亿人,占世界乙肝病毒携带者3.5亿人的1/3; 根据
3、推算,我国现有慢性乙肝患者约3000万人,每年新发生的急性肝炎病人就有120多万,其中甲型肝炎约占50%,乙型占25%,丙型占5%,戊型占10%,其他型及未定型占10%。 每年约有30万人因晚期肝病而死亡。,乙肝流行现状,乙肝病毒本身并不损伤肝脏 损伤肝脏的本质是人体清除病毒的免疫反应,乙型病毒性肝炎致病机理,免疫系统,免疫功能低下 (慢性乙肝),免疫功能健全 (清楚病毒),免疫功能超敏 (重型肝炎),免疫耐受 (HBV携带者),幼龄感染 成年感染,90%慢性化 10%清除病毒 急性肝炎 1%暴发肝炎,非活动性携带 慢性肝炎 (HBeAg) (HBeAg + ),40%肝硬化,95%清除病毒
4、5%慢性感染,非活动性携带 慢性肝炎 (HBeAg ) (HBeAg + ),1520%肝硬化,中国人感染HBV起始于幼龄期,各种传染途径的本质都是 血液传播,医源性传播,性传播,母婴传播,血液,血液,血液,乙肝病毒的传播途径,什么是血液传播,血液传播的条件:病毒的数量、接触的程度 通常理解的血液传播途径:输血、共用针筒 易被忽略的血液传播的途径:共用剃须刀,共用牙刷,共用毛巾,纹身、纹眉、穿耳、洞鼻、环耳廓等,因刀具的不洁造成传播。 中国因不安全注射造成的乙肝感染者不少于3600万人 中国疾病预防控制中心,乙肝病毒的传播途径,接吻、共餐、共同工作,共餐共宿舍,大量流行病学工作证明无传染危险。
5、中国疾病预防控制中心病毒性肝炎知识问答 ,蚊虫叮咬不能造成传播:有人已做过研究,蚊体内无乙肝病毒繁殖,蚊叮人无胃内容物吐出,蚊繁殖季节与非蚊繁殖季节与乙肝病毒带率的高低无关连。中国疾病预防控制中心病毒性肝炎知识问答 ,乙肝病毒的传播途径,什么是母婴传播?,分娩时母亲的血液、阴道分泌物通过胎儿 的破损皮肤、粘膜而传染; 胎盘剥离时微量血液漏至胎循环中.,乙肝病毒的传播途径,电镜下可见大球形颗粒、小球形颗粒和管型颗粒三种形态。 完整的HBV颗粒为大球形颗粒,又称 Dane颗粒,直径42nm,分为包膜与核心两部分,包膜HBsAg,核心部分含有环状双股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等,是
6、病毒复制的主体。,电镜下形态,HBV模拟图,完整病毒颗粒,内含DNA,具有复制功能,空泡型病毒颗粒,无DNA,不具有复制功能,乙肝病毒存在的三种形式,HBV基因组,HBV DNA是由长链L (负链) 和短链S (正链) 组成的不完全双链环状DNA,短链的长度相当于长链的50%85%。 HBV DNA长链载有病毒蛋白质的全部密码,有4个开放读码框架(ORF),分别称为S、C、P和X区 。编码7个蛋白质。 HBV DNA易发生变异,特别是前S或S区基因较易突变。,嗜肝DNA病毒的共同特点: 内含33.3kb松散环状、部分双链DNA基因组 及DNA聚合酶;病毒的复制需逆转录过程。,A(n),mRNA
7、,cccDNA,HBsAg包膜,负链DNA,包裹后的前基因 mRNA,传染性HBV 病毒颗粒,传染性HBV 病毒颗粒,部分双链 DNA,逆转录酶,DNA 聚合酶,肝 细 胞,HBV在肝细胞内的复制,细胞核,胞浆,HBV对外界环境抵抗力较强,30-32至少可存活6个月,-20可存活15年。100干烤1小时;100直接煮沸2分钟;微波(频率2450MHz、输出功率500W、75)1-3分钟,0.5%过氧乙酸,3%漂白粉溶液,5%次氯酸钠和环氧乙烷等处理均可灭活HBV。,乙肝病毒抵抗力,一、肝功能指标的检测(生化检测)(是否有肝功能受损) 二、HBV血清标志物的检测(是否有HBV感染)肝炎病毒本身组
8、成该病毒的成分抗病毒抗体(血清标志物检测) 三、HBV DNA、基因型和变异检测 四、HBV肝组织病理学检查,HBV感染的实验室检查,临床意义:谷丙转氨酶(ALT)主要存在于肝细胞中。当肝脏发生炎症、坏死时,ALT就会从肝细胞内大量释放入血,导致血清中ALT升高,因此ALT升高是判断肝细胞损害的一个敏感指标。但是除了病毒性肝炎外,其它类型的肝炎或肝脏疾病,ALT也会升高。,主要指标: 反映肝细胞损伤的项目(酶学检查):谷丙转氨酶ALT(GPT)、谷草转氨酶AST(GOT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GT或GGT)其他酶类,乙型肝炎的生化指标检测,反映肝脏分泌和排泄功能的项目: 总胆红
9、素(TBil) 直接胆红素(DBil)反映肝脏合成贮备功能的项目: 总蛋白(TP) 白蛋白(ALB) 免疫球蛋白(Ig) 凝血因子,乙型肝炎的生化指标检测,反映肝脏纤维化和肝硬化的项目(肝纤四项): 透明质酸酶(HA) 层粘连蛋白(LN) III型前胶原(PCIII) IV型胶原(IV-C)反映肝脏肿瘤的标志物: 甲胎蛋白(AFP),乙型肝炎的生化指标检测,机体感染HBV后产生相应的免疫反应,形成多种不同的抗原(Ag)、抗体(Ab)系统。,乙肝的血清学标志物检测,乙肝的血清学标志物检测,表面抗原 HBsAg 表面抗体(HBsAb) 外衣壳抗原 前S1抗原 前S1抗体前S2抗原 前S2抗体核心抗
10、原 HBcAg 核心抗体(HBcAb) 内衣壳抗原e抗原 HBeAg e抗体(HBeAb),乙肝五项,定性检测: 酶联免疫吸附实验(ELISA):灵敏性高,成本低,适用于普通病人筛查; 胶体金免疫层析法(金标法):简便易行,可用于急诊病人快速检测;定量检测: 化学发光法定量检测:可用于HBVMs为临界值的病人的确证;可间接反映宿主HBV的复制水平,在评价抗病毒治疗的病毒学应答、疗效和判断预后方面有重要意义。,乙肝血清学标志物检测方法学,乙肝表面抗原(HBsAg): 又称为“奥抗”,1963年Blamberg在澳大利亚土著人血清中发现; 是乙肝病毒的外壳,保护乙肝病毒DNA; HBsAg(+)只
11、能说明人体内有乙肝病毒外壳,但有无乙肝病毒DNA则需要结合PCR检查来确定; 乙肝潜伏期(最早出现); 无症状的乙肝病毒携带者; 慢性乙肝(结合其他几项指标来判断)。 定期复查,乙肝的血清学标志物检测临床意义,乙肝表面抗体(HBsAb) 保护性抗体,可中和掉乙肝病毒的感染力; 阳性表明既往感染过乙肝病毒,但已经排除病毒; 接种过乙肝疫苗,产生了保护性抗体; 滴度越高,保护力越强;,乙肝的血清学标志物检测临床意义,乙肝e抗原(HBeAg):是乙肝病毒内核的主要结构蛋白; 可溶性抗原,血清中可检测到; 是急性感染的早期标志; 是血液高传染性的标志; 通常在血清中存在时间较短,为3-6周; 持续阳性
12、,转变为慢性乙肝的可能性大。,乙肝的血清学标志物检测临床意义,乙肝e抗体(HBeAb):e抗原转阴数月出现e抗体阳性 一般来说,e抗体阳性预示病毒复制减少或停止。 e抗体阳性,HBV DNA阴性:说明体内乙肝病毒复制减少,但如果HBV DNA阳性,则说明体内还存在病毒大量复制,有可能是病毒变异,需要重视。,乙肝的血清学标志物检测临床意义,乙肝核心抗体(HBcAb或者抗-HBc): 非保护性抗体;是乙肝病毒侵害的指标之一 HBcAb-IgM:判断HBV急性感染和重新活动的慢性 感染标志,血液中出现最早,持续3-6个月,持续高滴度,有慢性化倾向。慢乙肝活动期阳性,表明病毒在复制,有传染性。 HBc
13、Ab-IgG:是既往感染的标志,可在体内持续存在数年至数十年。是流行病学研究的指标。,乙肝的血清学标志物检测临床意义,乙肝前S1抗原(Pre-S1): (一)、感染状况指标:主要存在于血清中HBV表面,是HBsAg氨基端延长的的一段多肽。提示机体内含有HBV就有前S1抗原。 前S1抗原与HBV-DNA,HBeAg检测率高度符合是一项十分重要的病毒复制指标。可作为HbeAg和HBV-DNA检测的补充和对照。 前S1抗原的测定结合“乙肝五项”检测,可弥补因病毒变异和其它原因造成的HBeAg(-)的“误寻”。 病毒附着于肝细胞上,最重要的介导部位是前S1蛋白的氨基酸(AA)21-47片段,变异的病毒
14、只要这一区段完好就有传染性。,乙肝的血清学标志物检测临床意义,乙肝前S1抗原(Pre-S1):(二)、预后及疗效的判断急性乙型肝炎患者前S1抗原阴转越早,预后越好,是病毒清除的最早迹象,反之,前S1抗原持续阳性,将发展至慢性肝炎。 因病毒基因变异的HBeAb(+)慢性乙型肝炎病人,较易进展为肝硬化,甚至肝癌。加强检测前S1抗原,是一种检测疾病预后的良好手段。 前S1抗原可作为药物抗病毒疗效的指标,是对HBV-DNA和HBeAg指标的补充和加强。 前S1抗原出现在急性乙型肝炎感染的最早期,在转氨酶升高前即可查出,提示可作为早期诊断乙肝病毒感染。,乙肝的血清学标志物检测临床意义,乙肝前S2抗原(P
15、re-S2): 前S2蛋白位于S区的中分子蛋白上。 是反映乙肝病毒感染与HBV病毒复制的指标。 可在HBeAg阳性,HBV DNA阳性的急性乙肝患者早期血清中溅出。 在对慢性乙肝患者动态观察中发现,病情急性发作期ALT升高前就有不同程度的前S2升高,其峰值常与HBV DNA平行而早于ALT峰11周。提示S2抗原可作为早期感染乙肝的指标,更早于两对半及ALT的检测。 与病毒对肝细胞附着及入侵有关;可诱发产生前S2抗体,从而起到清除HBV的作用。,乙肝的血清学标志物检测临床意义,乙肝系列检测常见结果模式的临床意义,九种常见检测结果组合临床意义,乙肝系列检测常见结果模式的临床意义,几种罕见模式的结果分析,在此种少见模式下最好结合HBV DNA指标综合分析结果,HBV DNA定量检测的意义:,HBV分子生物学诊断,HBV DNA是HBV的遗传物质,当HBV侵入肝细胞后,会以HBV DNA为模板,合成新的HBV颗粒并释放入血,故HBV-DNA是病毒复制的一个重要指标。因此,HBV DNA定量检测可反映病毒在体内的复制水平。,