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1、第六章 细胞中的能量转换,第一节 线粒体与氧化磷酸化,1890年R. Altaman首次发现线粒体，命名为bioblast，以为它可能是共生于细胞内独立生活的细菌。1898年Benda首次将这种颗粒命名为mitochondrion。1900年发现线粒体具有氧化作用。Green（1948）证实线粒体含所有三羧酸循环的酶，Kennedy和Lehninger（1949）发现脂肪酸氧化为CO2的过程是在线粒体内完成的。Hatefi等（1976）纯化了呼吸链四个独立的复合体。Mitchell（19611980）提出了氧化磷酸化的化学偶联学说。,一、线粒体的形态结构,线粒体一般呈粒状或杆状，环形，哑铃形、
2、线状、分杈状或其它形状，一般直径0.51m，长1.53.0m 。蛋白质占线粒体干重的65-70%，脂类占25-30%。,数目一般数百到数千个，肝细胞约1300个线粒体；单细胞鞭毛藻仅1个，酵母细胞具有一个大型分支的线粒体，许多哺乳动物成熟的红细胞中无线粒体。,（一）线粒体的形态分布,通常结合在微管上，分布在细胞功能旺盛的区域。如在肝细胞中呈均匀分布；在肾细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；肠表皮细胞中呈两极性分布，集中在顶端和基部；在精子中分布在鞭毛中区。,线粒体在细胞质中可以向功能旺盛的区域迁移，微管是其导轨，由马达蛋白提供动力。,（二）线粒体的结构,线粒体由内外两层膜封闭，包括外膜、内膜、
3、膜间隙和基质四个功能区域。,1、外膜：含40%的脂类和60%的蛋白质，具有孔蛋白（porin）构成的亲水通道。标志酶为单胺氧化酶。,2、内膜： 含100种以上的多肽，蛋白质和脂类的比例高于3:1。通透性很低，仅允许不带电荷的小分子物质通过，大分子和离子通过内膜时需要特殊的转运系统。内膜向线粒体基质褶入形成嵴（cristae），嵴能显著扩大内膜表面积（达510倍），嵴有两种类型：板层状，管状。嵴上覆有基粒（elementary particle），基粒由头部（F1偶联因子）和基部（F0偶联因子）构成。 线粒体氧化磷酸化的电子传递链位于内膜，内膜的标志酶为细胞色素C氧化酶。,3、膜间隙：是内外膜之
4、间的腔隙，延伸至嵴的轴心部，腔隙宽约6-8nm。由于外膜具有大量亲水孔道与细胞质相通，因此膜间隙的pH值与细胞质的相似。 标志酶为腺苷酸激酶。,4、基质：为内膜和嵴包围的空间。除糖酵解在细胞质中进行外，其他的生物氧化过程都在线粒体中进行。催化三羧酸循环，脂肪酸和丙酮酸氧化的酶类均位于基质中。 标志酶为苹果酸脱氢酶。,基质具有一套完整的转录和翻译体系。包括线粒体DNA（mtDNA），70S型核糖体，tRNAs 、rRNA、DNA聚合酶、氨基酸活化酶等。基质中还含有纤维丝和电子密度很大的致密颗粒状物质，内含Ca2+、Mg2+、Zn2+等离子。,线粒体的电镜照片,管状脊线粒体,线粒体结构（扫描电镜）
5、,线粒体结构模型,心肌细胞和精子尾部的线粒体,肌原纤维、鞭毛核心,（三）线粒体化学组成及酶的定位,化学组成,蛋白质占65-70，脂质25-30（磷脂）；与脂蛋白质的比值，内膜为0.3:1，外膜为1:1；基质中含有DNA、RNA、核糖体、致密颗粒和上百种酶。,线粒体酶的定位,140余种，37氧化还原酶，10合成酶，9水解酶，标志酶30余种，主要在内膜和基质中。,四、线粒体的功能,主要功能：,进行三羧酸循环和氧化磷酸化，合成ATP，为细胞生命活动提供直接能量。,次要功能：,与细胞中氧自由基的生成， 调节细胞氧化还原点位和信号转导 调控细胞凋亡、基因表达、离子跨膜运输 调控电解质平衡等有关,真核细胞
6、线粒体中代谢反应图解,（一）线粒体中的氧化代谢,线粒体是氧化代谢的中心，是糖类、脂质和蛋白质最终氧化释能的场所。,氧化磷酸化是生物体获得能量的主要途径。,氧化,放能,磷酸化,贮能,偶联在一起， 有不同的结构系统实现,1968年E.Racher等人超声破碎线粒体，发现内膜碎片可自然卷曲成颗粒朝外的小膜泡。 （亚线粒体小泡）,具有电子传递和磷酸化的功能,亚线粒体小泡的分离与重组,两条典型的呼吸链：,NADH呼吸链,FADH2呼吸链,供体：糖酵解产生的NADH，其电子穿梭进入线粒体,苹果酸-天冬氨酸穿梭途径,甘油-3-磷酸穿梭途径,（二）电子传递链（呼吸链）与电子传递,在线粒体内膜上存在传递电子的一
7、组酶的复合体，由一系列能可逆接受和释放电子或H+的化学物质所组成，它们再内膜上相互关联有序地排列成传递链，称为电子传递链或呼吸链,电子载体（在内膜上有序排列的酶系）,呼吸链上进行电子传递的载体主要有：NAD、黄素蛋白、细胞色素、铜原子、铁硫蛋白、辅酶Q等。,NAD： 即烟酰胺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide），是体内很多脱氢酶的辅酶，连接三羧酸循环和呼吸链，其功能是将代谢过程中脱下来的氢交给黄素蛋白。,黄素蛋白：含FMN或FAD的蛋白质，每个FMN或FAD可接受2个电子，2个质子。呼吸链上具有以FMN为辅基的NADH脱氢酶和以FAD为辅基的琥珀酸
8、脱氢酶。,细胞色素：分子中含有血红素铁，以共价形式与蛋白结合，通Fe3+、Fe2+形式变化传递电子，呼吸链中有5类，即：细胞色素a、a3、b、c、c1，其中a、a3含有铜原子。传递1个电子。,辅酶Q（CoQ）（泛醌UQ）：是脂溶性小分子量的醌类化合物，通过氧化和还原传递电子。存在三种状态：氧化态Q，还原态QH2，中间态QH。传递1个或2个电子。,铁硫蛋白：含非血红素铁的蛋白，在其分子结构中2Fe-2S或4Fe-4S形成铁硫中心 ，通过Fe2+、Fe3+互变进行电子传递。传递1个电子。,铜原子：位于线粒体内膜的一个蛋白质上，形成类似于铁硫蛋白的结构，通过Cu2+、Cu+的变化传递电子。传递1个电
9、子。,电子载体的排列顺序,电子传递方向：,NADH,FMN,CoQ,b,c1,c,aa3,O2,氧化还原电位由低到高,-0.32,-0.3,0.1,0.07,0.22,0.25,0.29,0.82,电子转运复合物,利用脱氧胆酸（deoxycholate）处理线粒体内膜、分离出呼吸链的4种复合物，即复合物、和，辅酶Q和细胞色素C不属于任何一种复合物。辅酶Q溶于内膜、细胞色素C位于线粒体内膜的膜间隙侧（C侧），属于膜的外周蛋白。,（1）复合物即NADH脱氢酶，又称NADH-CoQ还原酶哺乳动物的复合物由42条肽链组成，含有一个FMN和至少6个铁硫蛋白，分子量接近1MD，以二聚体形式存在。作用是催化
10、NADH的2个电子传递至辅酶Q，同时将4个质子由线粒体基质（M侧）转移至膜间隙（C侧）。电子传递的方向为：NADHFMNFe-SQ。,（2）复合物即琥珀酸脱氢酶，又称琥珀酸-CoQ还原酶至少由4条肽链组成，含有一个FAD，2个铁硫蛋白。作用是催化电子从琥珀酸转至辅酶Q，但不转移质子。电子传递的方向为：琥珀酸FADFe-SQ。,（3）复合物 即细胞色素c还原酶，又称bc1由至少11条不同肽链组成，以二聚体形式存在，每个单体包含两个细胞色素b（b562、b566）、一个细胞色素c1和一个铁硫蛋白。作用是催化电子从辅酶Q传给细胞色素c，每转移一对电子，同时将4个质子由线粒体基质侧泵至膜间隙侧,（4）
11、复合物 即细胞色素c氧化酶以二聚体形式存在。作用是将从细胞色素c接受的电子传给氧，每转移一对电子，在基质侧消耗2个质子，同时转移2个质子至膜间隙。,（三）质子转移与质子驱动力的形成,复合物、组成主要的呼吸链，催化NADH的脱氢氧化。复合物：的比例为1：3：7。 复合物、组成另一条呼吸链，催化琥珀酸的脱氢氧化。任何两个复合物之间没有稳定的连接结构，而是由辅酶Q和细胞色素c这样的可扩散性分子连接。呼吸链各组分有序，使电子按氧化还原电位从低向高传递，能量逐级释放，呼吸链中的复合物、都是质子泵，可将质子有机质转移到膜间隙，形成质子动力势（proton-motive force），驱动ATP的合成。,两
12、条主要的呼吸链,NADH呼吸链和FADH2呼吸链,线粒体膜上电子传递和氧化磷酸化,（四）ATP形成机制氧化磷酸化,ADP磷酸化两种途径：,底物水平磷酸化,氧化磷酸化,当电子从NADH或FADH2经呼吸链传递给O2形成水时，同时伴有ADP磷酸化形成ATP，这一过程称为,ATP合成酶（ATP synthetase），分子量500KD，状如蘑菇。分为球形的F1（头部）和嵌入膜中的F0（基部），它可以利用质子动力势合成ATP，也可以水解ATP，转运质子。每个肝细胞线粒体通常含15000个ATP合酶、每个酶每秒钟可产生100个ATP。,ATP合成酶的结构与组成,F1由5种多肽组成33复合体，具有三个AT
13、P合成的催化位点（每个亚基具有一个）。和单位交替排列，状如桔瓣。贯穿复合体（相当于发电机的转子），并与F0接触，帮助与F0结合。与F0的两个b亚基形成固定复合体的结构（相当于发电机的定子）。,F0由三种多肽组成ab2c12复合体，嵌入内膜，12个c亚基组成一个环形结构，具有质子通道，可使质子由膜间隙流回基质。,1979年代Boyer P提出构象耦联假说，一些有力的实验证据使这一学说得到广泛的认可。其要点如下： 1ATP酶利用质子动力势，产生构象的改变，改变与底物的亲和力，催化ADP形成ATP。 2F1具有三个催化位点，但在特定的时间，三个催化位点的构象不同、因而与核苷酸的亲和力不同。在L构象（
14、loose），ADP、 Pi与酶疏松结合在一起；在T构象（tight）底物（ADP、 Pi）与酶紧密结合在一起，在这种情况下可将两者加合在一起；在O构象（open）ATP与酶的亲和力很低，被释放出去。 3质子通过F0时，引起c亚基构成的环旋转，从而带动亚基旋转，由于亚基的端部是高度不对称的，它的旋转引起亚基3个催化位点构象的周期性变化（L、T、O），不断将ADP和Pi加合在一起，形成ATP。,ATP酶结构和结构模型,ATP酶的结构模型,亚基的结合位点具有催化ATP合成或水解的作用，和结合形成转子，有抑制酶水解ATP的活性，同时有减少H+泄漏的功能,ATP酶催化ADP和Pi合成ATP的旋转模型,
15、ATP合成和水解示意图,支持构象耦联假说的实验有： 1日本的吉田（Massasuke Yoshida）等人将33固定在玻片上，在亚基的顶端连接荧光标记的肌动蛋白纤维，在含有ATP的溶液中温育时，在显微镜下可观察到亚基带动肌动蛋白纤维旋转。 2在另外一个实验中，将荧光标记的肌动蛋白连接到ATP合酶的F0亚基上，在ATP存在时同样可以观察到肌动蛋白的旋转。,氧化磷酸化的作用机理Mitchell P.1961提出“化学渗透假说(Chemiosmotic Hypothesis)”，70年代关于化学渗透假说取得大量实验结果的支持，成为一种较为流行的假说，Mitchell本人也因此获得1978年诺贝尔化学奖。根据“化学渗透假说”，当电子沿呼吸链传递时，所释放的能量将质子从内膜基质侧（M侧）泵至膜间隙（胞质侧或C侧），由于线粒体内膜对离子是高度不通透的，从而使膜间隙的质子浓度高于基质，在内膜的两侧形成pH梯度及电位梯度，两者共同构成电化学梯度，即质子动力势。质子沿电化学梯度穿过内膜上的ATP酶复合物流回基质，使ATP酶的构象发生改变，将ADP和Pi合成ATP。,化学渗透学说,线粒体中能量生成的机制,三、线粒体与疾病,克山病：心肌线粒体病，由缺硒引起，是以心肌损伤为主要病变的地方性心肌病。,
