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1、 微生物发酵产酶,一 生产工艺流程 1.收集筛选菌种: 2.菌种保藏： 3.细胞活化： 4.根据菌种选培养基扩大培养: 5.发酵管理:发酵工艺流程：收集筛选菌种菌种保藏细胞活化扩大培养发酵管理,收集、筛选菌种,1.用钱购买菌种 2.收集土样筛选菌种收集土样初筛：单菌落培养，用透明圈法选出产目的酶的微生物（使用鉴定培养基）复筛：单菌落培养，选出符合优良菌种要求的菌落（使用选择培养基）,菌种保藏,菌种保藏方法： (1)斜面培养法 (2) (3) (4) (5) (6),细胞活化,保藏的菌种通常以芽孢形式存在（保藏时 营养缺乏），需放入营养充足的营养环境中 活化：芽孢营养细胞,扩大培养,1.定义：根
2、据菌种特点配制培养基，使菌种大量繁殖用于发酵 2.方法：种子罐培养；实验室培养（工业生产） （实验室） 3.目的：使菌种大量繁殖，用于发酵 培养基配制：碳源、氮源、生长因子、无机盐、水 CN：碳源：糖加碳源加C/N酸性利于菌种保存（作保存培养基）氮源：有机、无机加氮源减C/N碱性利于酶制剂生产（产酶需N元素）, 产酶微生物,1.菌种要求：繁殖力强(繁殖周期短)产酶稳定，产酶能力强安全(不用病菌)利于发酵管理(易于发酵) 2.常用产酶微生物：略 单菌落培养法：稀释涂平板，长单菌落，易于分离 透明圈法：例如:明胶作培养基可鉴别出产蛋白酶的菌落(明胶是蛋白质,蛋白酶可分解明胶)CaCO3作培养基可鉴
3、别出产酸菌落(产生的酸可分解CaCO3,形成透明圈),发酵管理,1.温度、PH：最适生长温度、PH与最适产酶温度、PH不同,要实时监控、调节温度、PH 温度：0-10oC;PH:酶活力范围内，防酶变性 调PH方法：CaCO3（备用碱）磷酸缓冲液：维持PH稳定调C/N：只工业上适用，C/N酸， C/N碱 2.增大溶氧量：(1)搅拌，使大气泡变为很多小气泡 (2)加大通入氧气量,3.气泡：产生：搅拌发酵液增大溶氧量危害：阻碍CO2排出，使PH减 小，使发酵液变酸，影响微生物生长、产酶气泡过多会使菌液漫出，造成菌种污染消除方法：机械消泡、化学试剂消泡、表面活性剂消泡 4.湿度 开始：低 后来：高,5.提高酶产量的方法 加诱导物 减阻遏物 转基因（获得产酶能力强的微生物去产酶） 加表面活性剂 加产酶促进剂,微生物生长与产酶模式,微生物生长模式：调整期、对数期、平衡期、衰亡期 产酶模式：1.同步合成型：调整期始产酶，平衡期始停产2.中期合成型：对数期始产酶，平衡期始停产3.滞后合成型：平衡期始产酶，衰退期始停产4.延续合成型：调整期始产酶，衰退期始停产 提高产酶能力的方法（变为延续合成型） 1.非调整期始产酶（中期、滞后）：有营养物阻遏效应，减少营养阻遏物浓度 2.平衡期始停产（同步、中期）：mRNA不稳水解，降温使mRNA稳,
