实验十三、石蜡切片法(二)透明、透蜡、包埋

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1、实验十三 石蜡切片法(二) 透明、透蜡、包埋一、实验原理透明 是指利用透明剂既可与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质,将脱水剂替换出来,使石蜡能顺利进入材料中。透蜡 是指将材料中的透明剂逐步清除,以至完全由石蜡充分渗透。包埋 是把被石蜡浸透的材料连同熔化的石蜡一起倒入一定形状的容器内,并立即投入冷水中,使它凝固成含材料的蜡块,以备切片。,二、试剂与器材1.试 剂:1/2 无水乙醇+1/2二甲苯、 二甲苯、1/2二甲苯+1/2石蜡、 纯石蜡。2.器 材:恒温箱、蜡杯、镊子、解剖针、酒精灯、塑料面盆、温台。,三、实验程序 1透明:透明也是渐次由低浓度至高浓度。材料先 在纯酒精和二甲苯各半的混合液浸

2、1530分钟,再转 入纯二甲苯中透明(至透明为止),一般1530分钟。2透蜡:材料自二甲苯中取出后,先移入二甲苯和石 蜡等量的混合液中约30分钟,然后进入纯石蜡中约40 60分钟,再换纯石蜡一次约4060分钟。,附:植物材料的透蜡过程必须缓慢进行,所须的时间 约需1-2天。其方法如下:将材料连同二甲苯一起倒 入小蜡杯中;然后轻轻倒入溶解的石蜡。石蜡就在二 甲苯的上层凝固起来。此时可将小蜡杯放在35-37C温箱 内,使石蜡徐徐熔解到饱和为止,约需1-2天;将蜡杯 移入56-60C温箱中,待石蜡熔解后,倒去含有二甲苯的 石蜡,以后每隔1小时左右更换已熔的纯蜡一次,共换纯 蜡2-3次即可进行包埋。,

3、3包埋:从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯,倒入包埋 用的纸盒中,取出存放材料的蜡杯,用温镊子夹取材料 平放于纸盒底部,使之排列整齐。将纸盒两侧的把手提 起,慢慢地平放在面盆的水面,待石蜡的表面凝固,将 纸盒慢慢浸入水中,待石蜡完全凝固(约30分钟)后即 可取出备用。,四、注意事项透明的注意事项使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中水分进入;更换透明剂,动作要迅速;材料周围出现白色雾状,应退回纯酒精中重新脱水。透蜡的注意事项动物材料常用的石蜡熔点为52-56C;植物材料为54-60C。透蜡温度要恒定,不可忽高忽低;包埋的注意事项包埋前应先把必需的用具(恒温箱、温台、纸盒)准备好。包埋用的镊子要先放在温箱中预热。,五、思考题 1 .当材料周围出现白色雾状时,应退回纯酒精中重新脱水。为什么?,

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