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1、2018/9/21,学号+姓名,嗜酸乳杆菌,xxxxxxxx,嗜酸乳杆菌-1.557 发酵培养基优化研究,2018/9/21,学号+姓名,概念,嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）属于乳杆菌属，是肠道重要的益生菌，对维持胃肠道的生理功能有重要作用，被广泛用于发酵食品与医药行业。但在饲料生产和养殖业中应用报道较少，为了探讨嗜酸乳杆菌在畜牧业生产上的标准化应用，本研究以产酸能力较强的嗜酸乳杆菌-1.557 菌株为试验菌，优化了其培养条件和培养基成分，给乳酸菌发酵饲料的标准化生产提供依据。,2018/9/21,学号+姓名,目录,结论 最佳培养条件 优化培养基成分 优化培养
2、后,结果分析 静置培养和摇床培养 培养基起始pH 值的确定 培养温度的确定 接种量的确定 最适培养基成分的确定 嗜酸乳杆菌-1.557 生长曲线,材料和方法菌种 实验设备 培养基 培养条件优化 对培养基成分的优化 测定方法,2018/9/21,学号+姓名,一. 材料与方法,1.1 菌种 酸乳杆菌 1.2 实验制备 振荡培养箱(SHZ-A 型）、生化培养箱(DHP120 型)、高压灭菌器(MLS-3750 型)、磁力搅拌器(JB-3 型)、便携式pH 计(PHB-3 型)、生物洁净工作台(SA-960-2 型)、721 可见紫外分光光度计 1.3 培养基 种子培养基（MRS 培养改良基）：蛋白胨
3、10 g、酵母提取物5 g、牛肉膏10 g、葡萄糖20 g、乙酸钠5 g、柠檬酸铵2.15 g、Tween80 1 ml、MgSO47H2O 0.58 g、MnSO44H2O 0.05 g、K2HPO4 2 g、琼脂粉17 g、水1 000 ml。,2018/9/21,学号+姓名,1.4 培养条件优化 菌种活化：从冰箱中取出嗜酸乳杆菌-1.557 斜面菌种，室温静置40min。然后从中取两环菌种接于装有10ml液体种子培养基试管中，37 静止培养12 h，备用。,1.4.1 静置培养和摇床培养对比 按1.0接种量将活化的种子接种于装有100 mlMRS 改良液体培养基的250 ml 三角瓶中，
4、37 静置培养和60 r/min 振荡培养48 h，每隔12 h 取1 次样(先摇匀后取样)，在610 nm 处（以下同）测定培养液OD 值。 1.4.2 培养基起始pH 值的筛选 以6 mol/l 的HCl 和40%NaOH 溶液将MRS 改良培养基的起始pH 值分别调节为4.5、5.5、6.5、7.5 和8.5，接入1.0活化菌液，37 下恒温培养24 h，测定OD 值。 1.4.3 培养温度的筛选 将100 ml 的MRS 改良液体培养基中接入1.0的菌液，分别于30、35、40、45 下恒温培养24 h，测定OD 值。 1.4.4 接种量的确定 按0.5、1.0、1.5、2.0%接种量
5、接活化菌液，37 下静置培养24 h，测定OD 值,2018/9/21,学号+姓名,1.5 对培养基成分的优化见（见表1),蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏和葡萄糖是影响培养基的主要成分。因此，本试验设计L16 （ 45）正交试验，确定嗜酸乳杆菌-1.557 最适培养基成分,1.6 测定方法OD 值测定采用胡俊等（2007）方法；活菌数测定参考郭兴（2002）方法。,2018/9/21,学号+姓名,二. 结果与分析,2.1 静置培养和摇床培养 不同时间取样测定培养液OD610值，结果见表2、图1。,从表2 和图1可知，试验刚开始时两种培养方法的OD610 值一样，随着培养时间的延长逐渐变大，012
6、h时间段迅速生长，1224 h时间段缓慢生长，到24 h时临近顶峰值，而后进入衰退期；整个培养阶段，静置培养优于摇床培养。这说明嗜酸乳杆菌-1.557 的最适培养时间为24 h，并且该菌是兼性厌氧菌。这符合乳酸菌多数属于厌氧菌或微好氧菌的结论。,2018/9/21,学号+姓名,2.2 对培养基起始pH 值的确定(见表3),从表3 可以看出，嗜酸乳杆菌-1.557 对酸碱环境的适应能力较强，pH 值4.58.5 都可以生长。当pH 值小于5.5 或大于7.5 时生长较慢，而在pH 值5.57.5范围内生长较快。pH 值5.5 时OD610 值达到最高值1.815，即培养基的最适初始pH 值为5.
7、5。大量研究表明，乳酸菌在pH 值4.58.0 范围内生长良好，本试验结果在此范围内。,2018/9/21,学号+姓名,2.3 培养温度的确定（见表4）,从表4可以看出，培养温度在30 时OD610 值为1.826，到35 时提高到1.861，而超过35 后，随着温度的升高OD610 值有下降趋势，到45 时仅为0.122。说明嗜酸乳杆菌-1.557 最适培养温度为35 ，而且在高温条件下嗜酸乳杆菌-1.557 基本不生长。单春乔等（2009）对嗜酸乳杆菌SR-1 菌株分泌类细菌素的最适培养条件进行了优化研究，该菌株适宜温度为37 。奚灏锵等（2009）研究结果说明其保存的嗜酸乳杆菌适宜温度为
8、36。熊素玉等（2006）用改良MC培养基为载体，做了分离到的24 株乳酸菌最适条件研究，发现最适生长温度大概在40 左右，但温度的范围在各菌株间略有差异。,2018/9/21,学号+姓名,2.4 接种量的确定（见表5）,从表5 可以看出，随着接种量的增加，OD610 值也逐渐变大。当接种量为0.5%时OD610 值为1.319；接种量为1.0%时OD610 值提高到1.812，有明显升高。而1.0、1.5、2.0%的接种量菌液OD610 值差异不明显，从生产成本考虑本次试验采用了1.0%的接种量。李剑芳等（2003）通过正交设计试验确定最优发酵条件是乳酸菌接种量为1%；邵亚东等（2007）为
9、制备高浓度乳酸菌发酵剂，用1%接种量可以使乳酸菌活菌数的对数值达到89。,2018/9/21,学号+姓名,2.5 最适培养基成分的确定（见表6）,2018/9/21,学号+姓名,2.5 最适培养基成分的确定（见表6）,从表6 可以看出，在最佳条件（温度35 ，时间24 h，接种量为1.0%）下，组合A1B4C4D4 （蛋白胨6 g、酵母提取物6 g、牛肉膏12 g、葡萄糖22 g）测出的OD610 值最大，即1.870。但经过统计分析得出，嗜酸乳杆菌-1.557 最佳培养基成分组合为A3B4C4D1 （蛋白胨10 g、酵母提取物6 g、牛肉膏12 g、葡萄糖16 g）。因为该理论条件下的组合不
10、在实际操作组合，所以需要再进行一次验证试验。试验结果表明，A3B4C4D1 组OD610 值为1.889， 大于A1B4C4D4 组合OD610 值（1.870），即嗜酸乳杆菌-1.557 最适生长培养基成分为蛋白胨10 g、酵母提取物6 g、牛肉膏12 g、葡萄糖16 g，影响因素次序为酵母提取物牛肉膏蛋白胨葡萄糖。,2018/9/21,学号+姓名,2.6 嗜酸乳杆菌-1.557 生长曲线 (见表7和图2),2018/9/21,学号+姓名,2.6 嗜酸乳杆菌-1.557 生长曲线 (见表7和图2),从表7 和图2 可知，随着培养时间的延长，菌液OD 值和活菌数都得到提高。当培养24 h 时，
11、菌液OD值达到1.889，活菌数达2.91010 cfu/ml。奚灏锵等对一株嗜酸乳杆菌进行优化研究，活菌数也达到了1010 cfu/ml，与本试验结果相符。 在生产菌种和乳酸菌制剂时，菌液中乳酸菌数量的多少直接影响到产品的总体质量。乳酸菌菌体小，在光学显微镜下不易直接计数，大多数采用平板涂布培养法。而平板涂布培养法培养的时间较长，不适于生产中应用，所以，平板涂布培养法可以用于终端产品的检测，但对生产过程的监控起不到作用。制作嗜酸乳杆菌-1.557 生长标准曲线，采用分光光度计测定OD 值，简单方便，可以随时取样检测培养液活菌数，对生产进行全过程监控，随时调整培养条件，为保证产品质量具有重要意
12、义。,2018/9/21,学号+姓名,三. 结论,3.1嗜酸乳杆菌-1.557 最佳培养条件为： 温度35 、培养时间24 h、接种量1.0%、培养基起始pH 值5.5。 3.2 优化培养基成分为 蛋白胨10 g、酵母提取物6 g、牛肉膏12 g、葡萄糖16 g、乙酸钠5 g、柠檬酸铵2.15 g、Tween80 1 ml、MgSO47H2O 0.58 g、MnSO44H2O 0.05 g、K2HPO4 2 g、琼脂粉17 g、水1 000 ml。 3.3 优化培养后 菌液OD610 值达到1.889，活菌数达到2.901010 cfu/ml。,2018/9/21,学号+姓名,姓名：xx 学号：xx 学院：xx 邮箱：,谢谢！欢迎评论！,
