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1、球 菌,华中科技大学同济医学院附属协和医院熊 艳,微球菌科内各属的主要鉴别要点,第一节 葡萄球菌属,一生物学特性,（一）形态与结构革兰染色阳性，呈圆球形，葡萄状排列。无鞭毛和芽胞。 （二）培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高。多数菌株耐盐性强，能在1015NaCl琼脂中生长。,2018/9/20,菌落：圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明，可产生不同的脂溶性色素。,血琼脂：多数致病性菌株可产生透明溶血环，且菌落较大。 高盐卵磷脂平板：菌落周围形成白色沉淀环，可用于筛选。 亚磷酸钾甘氨酸琼脂：黑色扁平的小菌落。,2018/9/20,（三）生化反应,触酶试验阳性。葡萄糖氧化发酵试验：发酵+
2、，对糖的发酵反应不规则。,多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。,2018/9/20,（四）抗原构造,1蛋白抗原：葡萄球菌A蛋白（SPA）存在于金黄色葡萄球菌细胞壁。SPA可与人类IgG的Fc段非特异性结合而不影响Fab段，应用于协同凝集试验。抵抗吞噬细胞的吞噬。,2多糖抗原：型特异性 A型多糖抗原：带有N乙酰葡萄糖胺的核糖醇，存在于绝大多数金葡菌中。 B型多糖抗原：甘油磷壁酸，来自非致病性葡萄球菌。 C型多糖抗原：,（五）分类及分型 葡萄球菌包括35个种及17个亚种 根据产生色素的不同分类 根据产生凝固酶与否进行分类 按噬菌体分型法分类,葡萄球菌传统分类,（六）抵抗力
3、是抵抗力最强的无芽胞细菌之一。 耐干燥可达数月。 对龙胆紫敏感。 易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已成为医院感染最常见的致病菌。,二致病性和免疫性,（一） 致病物质金葡菌的致病性主要与其所产生的各种侵袭性酶，如：血浆凝固酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、溶纤维蛋白酶等，以及各种外毒素，如溶血毒素、杀白细胞毒素等有关。,凝固酶,游离凝固酶：采用试管法检测结合凝固酶：采用玻片法检测金葡菌凝固酶试验均为阳性 凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志,游离凝固酶,协同因子,凝血酶,纤维蛋白原,纤维蛋白,血浆凝固,结合凝固酶（位于菌体表面）,纤维蛋白原,纤维蛋白,细菌凝集,2018/9/20,注意事
4、项： 不要用枸橼酸盐血浆，以防止能利用枸橼酸盐的细菌出现假阳性。 玻片法必须用大量的细菌和少量的血浆。 试管法检查凝块形成时，不要摇动试管。,（二）所致疾病 葡萄球菌感染的特点是：感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。金葡、表皮和腐生是引起临床感染最常见的葡萄球菌。金葡引起的常见感染有：疖、痈、外科切口、创伤等局部化脓性感染和骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎、心内膜炎、脑膜炎等全身性感染。表皮葡萄球菌引起人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工关节感染等。腐生葡萄球菌是女性尿路感染的重要病原菌。,（三）免疫性有一定天然免疫力。 病后获得的免疫力作用不强、不持久。,三微生
5、物学检验,细菌鉴定的基本程序,（一）标本采集根据病种不同，采集不同标本脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。,（二）检验程序,脓、穿刺液、尿液、痰,脑脊液,血液,粪便、呕吐物,增菌培养,分离培养,分离培养,分离培养,直接涂片染色,鉴定试验和药敏试验,菌落涂片染色,血浆凝固酶,耐热核酸酶,药敏试验,其它试验,报告,2018/9/20,（三）检验方法,1直接镜检2分离培养,3鉴定试验 触酶试验 血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验 耐热核酸酶试验：此酶与血浆凝固酶具有同等诊断意义。 SPA的检测：SPA能与兔抗羊红细胞血清中的IgG的Fc段结合，使致敏羊红细胞发生凝集。,检验方法直
6、接镜检,方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检 初步报告:“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑似葡萄球菌”“查见革兰阳性球菌”,检验方法分离培养,脓、痰、脑脊液标本接种血平板 菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性色素、透明溶血环（-溶血环）,检验方法分离培养,粪便标本高盐甘露醇平板 菌落特征：光滑型、中等大小、淡黄色菌落,检验方法分离培养,血标本增菌（葡萄糖肉汤）分离培养（血平板） 生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血,金葡菌的鉴定依据,血平板上金黄色色素、-溶血环 血浆凝固酶 + 发酵甘露醇 + 耐热核酸酶 +,凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）,条件致病菌 医院内感染的重要病原菌 对多种抗生素耐药,凝固酶
7、阳性葡萄球菌的鉴别,（四）结果评价和报告,金葡菌系毒力很强的致病菌，无论从任何标本中分离出均应及时鉴定、进行药敏试验和尽快报告临床。 从输液导管、人工植入组织中分离出的表皮葡萄球菌和从尿液标本中分离出的腐生葡萄球菌应视为病原菌。 由于葡萄球菌在尿液中生长缓慢，故尿液培养菌落计数应考虑为103104/ml为阳性菌尿标准。,（四）结果评价和报告,其它凝固酶阴性葡萄球菌引起感染流行或临床治疗失败时应考虑将其鉴定到种。当MRSA对头孢菌素类的体外药敏试验表现为“敏感”时，不能将这种假象向临床报告，以免造成错误导向。,葡萄球菌最严重的耐药问题：,MRS（耐甲氧西林的葡萄球菌）MRSA（耐甲氧西林的金黄色
8、葡萄球菌）MRCNS（耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌）VRSA（耐万古霉素的金黄色葡萄球菌）,MRS耐药机理和特征：,MRS具有一外来基因mecA，它负责编码青霉素结合蛋白2a (PBP2a)。当抗生素作用于MRS时，PBP2a替代了其他PBP合成细胞壁的功能。但PBP2a与内酰胺类抗生素的亲和力极低，故对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类等抗生素广谱耐药。同时由于基因的连锁性，往往对内酰胺类以外的氨基糖苷类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类、林可霉素类等多种抗菌药物也耐药。,第二节 链球菌属,一链球菌,（一）生物学特性,形态染色 培养特点 生化反应 抗原构造 分类 抵抗力,形态与染色,革兰阳性球
9、菌，呈链状排列，无鞭毛，无芽胞，可形成荚膜。在液体培养基中易形成长链致病性强的菌株多为长链 在脓汁标本中多为短链,培养特点生长条件,营养要求高，在含血液、血清培养基上生长良好。 需氧或兼性厌氧，少数为专性厌氧，在5CO2环境下生长更好。,培养特点生长现象,液体培养基：呈沉淀生长现象。 血平板：灰白色、细小、圆形、光滑的、有不同溶血现象的菌落。,生化反应,触酶试验（） A群链球菌：杆菌肽敏感试验（+） B群链球菌：CAMP试验（+）、马尿酸钠水解试验（+） D群链球菌：胆汁七叶苷试验（+）,抗原构造,蛋白质抗原：型特异性抗原（M、R、S、T蛋白抗原） 多糖抗原：群特异性抗原（“C”抗原） 核蛋白
10、抗原：无特异性（“P”抗原）,分类,根据溶血现象分类： 根据抗原结构分类：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同分群 根据链球菌生化特点、培养特点及溶血现象等特征分类,分类根据溶血现象分类,甲型溶血性链球菌：属条件致病菌 乙型溶血性链球菌：致病力强 丙型链球菌：无致病力,分类根据抗原构造分类,群特异性抗原（C抗原）：细胞壁多糖抗原，可将链球菌分为20群（A、B、C、D、F等），引起人类感染的链球菌90为A群。 型特异性抗原（表面抗原）：细胞壁蛋白抗原，有M、T、R、S四种，根据M抗原不同，可将A群分为100型。,常见链球菌生物种的鉴别,乙型溶血性链球菌的进一步鉴定,抵抗力,抵抗力不强，对临床常用抗菌药物
11、都很敏感。,（二）致病性和免疫性,致病物质 所致疾病 免疫性,临床意义A群链球菌,致病物质: 致热外毒素：致热、细胞毒作用、使皮肤产生红疹、抗原性强。 溶血素：溶解红细胞、破坏血小板和白细胞，分为溶血素O和溶血素S两种。 侵袭性酶：透明质酸酶、链激酶、链道酶，有利于细菌在体内扩散。 M蛋白：具有抗吞噬作用；与肾小球基底膜有共同抗原成分，与超敏反应有关。,链球菌溶素O,对氧敏感。 抗原性强，刺激机体产生抗O抗体。 抗O试验可用于风湿热等链球菌感染所致超敏反应性疾病的辅助诊断。,临床意义A群链球菌,所致疾病 化脓性感染：扁桃体炎、丹毒、蜂窝织炎、淋巴管炎、败血症等 猩红热 风湿热、链球菌感染后肾小
12、球肾炎,临床意义其他链球菌,B群链球菌：条件致病菌，是新生儿败血症和脑膜炎主要致病菌。 肺炎链球菌：引起大叶性肺炎等疾病。 甲型链球菌：条件致病菌，在一定条件下引起亚急性细菌性心内膜炎。 变异链球菌：与龋齿有密切关系。,（三）微生物学检验,标本采集 检验程序 检验方法,标本采集,根据不同疾病，采集不同标本。如创伤感染的脓液，咽部、鼻腔等病灶的棉拭、败血症者的血液等。,细菌鉴定的基本程序,脓、痰、咽拭,脑脊液,血液,增菌培养,分离培养,直接涂片染色,观察菌落及溶血现象,触酶试验（）,Optochin 敏感试验,肺炎 链球菌,A群链球菌,杆菌肽,胆汁 七叶苷,草绿色 链球菌,D群 链球菌,肠球菌,
13、6.5 NaCl,血清学分类,2018/9/20,3检验方法,直接镜检分离培养鉴定试验,检验方法直接镜检,方法:取标本直接涂片，革兰染色后镜检 初步报告:“查见革兰阳性球菌”“查见革兰阳性矛尖状双球菌，有荚膜，疑似肺炎链球菌”荚膜肿胀试验可确诊， “找到肺炎链球菌”,检验方法分离培养,脓、痰、咽拭标本接种血平板，进行分离培养。 菌落特征：甲型链球菌：针尖样菌落、周围有草绿色溶血环；乙型链球菌：灰白色小菌落、周围有透明溶血环；丙型链球菌：灰白色菌落、无溶血环；肺炎链球菌：灰白色扁平小菌落、周围有草绿色溶血环，培养较久形成脐窝样菌落。,检验方法增菌培养,增菌培养基：葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤 血液与培
14、养基比例：1:10，即5ml标本，50ml增菌液。 拮抗剂：硫酸镁（拮抗多种抗生素）、对氨基苯甲酸（拮抗磺胺）等 培养时间：常规培养：1824小时至1周；亚急性细菌性心内膜炎：血液标本若72h仍无菌生长，则需延长培养时间至第四周。,鉴定试验,杆菌肽敏感试验：A群链球菌 CAMP试验：B群链球菌 马尿酸盐水解试验：B群链球菌 胆汁七叶苷试验：D群链球菌、肠球菌 盐耐受试验：肠球菌 Optochin敏感试验：肺炎链球菌 胆盐溶菌试验：肺炎链球菌 血清分群快速胶乳凝集试验：用亚硝酸抽提待鉴定链球菌群特异性抗原，然后与包被在乳胶颗粒的各群特异性抗体反应，出现凝集者为阳性。,二肺炎链球菌,2018/9/
15、20,（一）生物学特性,形态与染色：革兰染色阳性，呈矛头状，成双排列，底面相对，尖端向外，在人和动物体内形成荚膜。培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求较高。在5%10%CO2的环境中培养产生典型菌落。,菌落：细小灰色扁平、透明或半透明、中心凹陷，周围有草绿色溶血环。有些菌株可表现为粘液样。48小时后，由于菌落自溶，呈现“脐窝状” 。,生化反应,Optochin敏感试验（+） 胆汁溶菌试验（+） 菊糖分解试验（+）,2018/9/20,抗原构造 荚膜多糖抗原：型特异性抗原 菌体多糖抗原：属特异性抗原 菌体核蛋白抗原：无特异性,抵抗力 抵抗力弱，对临床常用抗菌药物都很敏感。,变异性 荚膜变异：有荚膜
16、 无荚膜 S-R变异：光滑型 粗糙型 型的转化变异：型别互相转化 耐药性变异：敏感 耐药,（二）致病性和免疫性,肺炎链球菌主要寄居于人类上呼吸道，一般不致病，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。 主要的致病因素是细菌的荚膜、杀白细胞素等。 相关疾病主要有大叶性肺炎、支气管炎。可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、副鼻窦炎、脑膜炎及败血症。,2018/9/20,（三）微生物学检查法,标本采集 ：检验程序 ：,检验方法 （1）直接镜检：除血液标本外均可作。 （2）分离培养 （3）鉴定试验 胆汁溶菌试验 菊糖发酵试验 Optochin敏感试验 动物试验 荚膜肿胀试验,鉴定依据,A群链球菌杆菌肽敏感试验（+） B 群链球菌CAMP试验（+）、马尿酸钠水解试验（+） D群链球菌胆汁七叶苷（+）、6.5氯化钠生长（） 肺炎链球菌Optochin敏感试验（+）、胆汁溶菌试验（+）、形态和菌落特征典型 甲型链球菌 Optochin敏感试验（）、胆汁溶菌试验（）,
