性病实验室诊断与管理防治科

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1、浙江省皮肤病防治研究所 胡丽华,背景,确诊病例 = 实验室诊断病例,梅毒,是由梅毒螺旋体引起的一种慢性性传播疾病。 梅毒螺旋体是密螺旋体属中一种小而纤细的螺旋状微生物，因不易染色，又称为苍白螺旋体。 不能在人工培养基上生长，保存和传代可接种于家兔睾丸中。 在体外是一种极为脆弱的微生物，在人体内可长久生存繁殖。 它缺乏公认的致病因子，却有极大的侵袭力。,梅毒,梅毒的实验室诊断方法： 病原体检测 梅毒螺旋体核酸检测 血清学检测 非梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒螺旋体非特异性抗体检测） 梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒螺旋体特异性抗体检测）,梅毒,方法：暗视野显微镜检查 镀银染色检查 适用：早期梅毒（一、

2、二期、胎传）的硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮 损的渗出液，淋巴穿刺液。,梅毒,病原体检测,硬下疳出现1-2周后血清学试验才出现阳性，病原体检测是诊断早期现症梅毒感染的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。 试验敏感性不高，如未见到梅毒螺旋体，不能排除罹患梅毒，应同时进行血清学检查。,梅毒,病原体检测,梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。,可用于皮损部位组织液、淋巴穿刺液、血浆、血清及脑脊液等标本的梅毒螺旋体核酸检测。 在一期、二期梅毒溃疡组织有较高检出率，可用于早期梅毒的诊断。 血液标本检出率低，临床意义不大。

3、,梅毒,梅毒螺旋体核酸检测,梅毒螺旋体核酸检测目前尚未作为临床常规项目。,梅毒,梅毒血清学检测,非梅毒螺旋体抗原血清试验 性病研究实验室试验（VDRL） 快速血浆反应素环状卡片试验（RPR） 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）,梅毒,梅毒血清学检测,Venereal Disease Research Laboratory Test 抗原、磷酸盐缓冲液。 Rapid Plasma Reagent Circle Card Test 抗原、EDTA、氯化胆碱、磷酸盐缓冲液、活性碳。 Tolulized Red Unheated Serum Test 抗原、EDTA、氯化胆碱、磷酸盐缓冲液、甲苯胺红

4、。,0.03% 心磷脂 0.21% 卵磷脂 0.90% 胆固醇,非梅毒螺旋体抗原血清试验,梅毒,能用手工摇动或微量振荡器来做梅毒的非特异性试验吗？,否,梅毒,检验报告中能用“RPR”来表示所有的非特异性试验吗？,否,特异性试验阳性的前提下，试验阳性可明确现症梅毒的诊断。 治疗后血清滴度可下降并转为阴性，临床作为疗效观察、判愈的指征。 梅毒治疗后部份病人存在血清固定现象。 用于鉴别先天梅毒与被动反应素血症。 VDRL试验主要用于脑脊液神经梅毒检查，但检测阴性不能排除神经梅毒。 存在一定的假阳性。,梅毒,非梅毒螺旋体抗原血清试验,梅毒螺旋体抗原血清试验 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）

5、 梅毒螺旋体抗体免疫印迹试验(TP-WB) 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA） 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（TP-ELISA） 梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT） 梅毒螺旋体化学发光免疫分析法（TP-CLIA） 梅毒IgM抗体检测（TP-IgM),梅毒,梅毒血清学检测,梅毒螺旋体抗原血清试验,目前临床常用 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（TP-ELISA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA） 梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT） 应用前景较好 梅毒螺旋体化学发光免疫分析法（TP-CLIA） 梅毒IgM抗体检测（TP-IgM),梅毒,梅毒螺旋体抗原血清试

6、验,试验阳性可确证现在或既往有过梅毒螺旋体的感染。 绝大部分梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA试验仍可阳性，故不能作为疗效观察的指标，也不能用于区分现症感染和既往感染。 试验特异性较强，较少出现假阳性。,梅毒,梅毒螺旋体抗原血清试验,梅毒,梅毒血清试验的生物学假阳性反应,梅毒,梅毒血清试验结果解释,梅毒,梅毒检测为什么要分别做两类血清学试验？,非梅毒螺旋体抗原血清试验,确认现症病人 排除既往感染,确认感染者 排除假阳性,梅毒螺旋体抗原血清试验,非特异性试验与特异性试验同时检测，异常结果（单阳/较弱阳性）进行复核或确认。 特异性试验（TPELISA、TPCLIA）筛查，阳性做非特异性试验及滴度，异

7、常结果进行复核或确认。,梅毒,梅毒血清学试验的推荐检测流程,梅毒,两种不同的TPELISA方法阳性可以作隐性梅毒报告？,TPELISA有可能是假阳性； 单纯TPELISA阳性有可能是既往感染者；,否,梅毒,TPELISA阳性后用YPPA确认仍为阳性可以作隐性梅毒报告？,否,TPELISA和TPPA都属特异性试验，“双阳”指的是特异性和非特异性试验分别阳性；,暗视野检查梅毒螺旋体阳性。 患儿非梅毒螺旋体血清抗体滴度持续上升。 患儿非梅毒螺旋体血清学定量试验结果比母亲高4倍。 患儿检出19S-IgM抗体。,梅毒,胎传梅毒的实验诊断,对有临床症状的新生儿，诊断早期先天梅毒并不困难，但临床上2/3以上

8、的新生儿出生时并没有症状和体征。 常规的血清学试验（RPR、TPPA等）不能区分新生儿血清抗体反应是来自于母亲还是胎儿本身。 新生儿非特异性试验滴度未达到诊断标准。 随访会造成病情延误及失访。 常采用预防性治疗，但无法明确诊断。,梅毒,胎传梅毒的困扰,梅毒血清学检查阳性。 脑脊液细胞计数蛋白质测定结果异常。 脑脊液VDRL试验阳性。 脑脊液检测到IgM抗体。,梅毒,神经梅毒的实验诊断,梅毒的任何阶段都能发生中枢神经系统病变，存在无症状神经梅毒。 因脑脊液中梅毒抗体含量低，且IgG类抗体能透过血脑屏障，常规梅毒血清试剂应用受限。 脑脊液VDRL试验阳性对神经梅毒有诊断意义，但阴性无法排除。 脑脊

9、液FTAABS阴性可排除神经梅毒。 但上述两试剂获取困难，且不能应用于临床。 临床常采用诊断性或试探性治疗。,梅毒,神经梅毒的困扰,早期梅毒的诊断 神经梅毒的诊断 胎传梅毒的诊断 临床治疗效果观察 梅毒再感染的确诊 理论上检测胎传梅毒（非脐带血）和神经梅毒的最好方法。,梅毒,梅毒IgM抗体检测的应用,淋病,是由淋病奈瑟菌(简称淋球菌)引起的各种化脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾病。 革兰阴性双球菌、呈肾型、凹面相对、成双排列。 营养要求高。 触酶、氧化酶试验阳性，只分解葡萄糖。 对外界抵抗力极弱，冷、热、干燥及各种消毒剂均能致死。,淋病,淋病的实验室诊断方法： 直接显微镜检查淋球菌 分离培

10、养淋球菌 非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原或DNA（EIA、 PCR/LCR）,淋病,淋病,为什么淋球菌涂片只能用于男性淋病的诊断？,女性淋病涂片（宫颈）,男性淋病涂片（尿道）,男性淋菌性尿道炎的尿道标本敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。 宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时敏感性仅4070%。 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部，以及女性宫颈淋球菌感染。 不能用于疗后判愈。 如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确认。,淋病,淋球菌涂片报告必需注明“胞内/胞外”。,特异性极高（100%）； 可发现无症状淋球菌感染患者； 可用于进一步做药敏试验； 可

11、用于治疗后的判愈试验。,淋病,作为淋病诊断“金标准”的培养法有哪些优势？, 对女性淋病、直肠、咽部淋球菌感染的确诊应做培养。,有极高的敏感性和特异性； 下列情况有明显优势： 慢性淋病 非典型感染，女性隐性感染 使用抗生素之后 某些直肠、咽拭子样本,淋病,淋球菌核酸检测阳性能用于淋病诊断吗？,用于淋病的诊断仍需结合病史和临床表现。,是,生殖道沙眼衣原体感染,原核细胞型微生物，比病毒大但比细菌小； 具有DNA和RNA两种遗传物质； 不能产生ATP，严格细胞内寄生； 有独特发育周期：原体（有感染性），始体/网状体（无感染性）；,生殖道沙眼衣原体感染,沙眼衣原体,生殖道沙眼衣原体感染,沙眼衣原体,能用

12、检测沙眼衣原体抗体的方法来诊断生殖道沙眼衣原体感染吗？ 否,生殖道沙眼衣原体感染,生殖道沙眼衣原体感染的实验室诊断方法： 直接涂片法 抗原检测法（酶免法、胶体金法、免疫荧光法） 细胞培养法 核酸检测法,生殖道沙眼衣原体感染,直接涂片法,眼部感染：敏感性95 男性尿道：敏感性15 宫颈感染：敏感性41,主要用于新生儿眼结膜炎的诊断。,生殖道沙眼衣原体感染,抗原检测法,敏感性普遍不高，易造成漏检。,生殖道沙眼衣原体感染,细胞培养法,敏感性：5292 特异性: 99100 实验室条件和实验技术要求高、费时、敏感性低。,“金标准”方法 用于沙眼衣原体感染的确证、方法学评价和科研。,生殖道沙眼衣原体感染

13、,核酸检测法,敏感性：7597 特异性: 98100 实验室条件和技术要求高、有一定的假阳性。,可用于临床沙眼衣原体感染和健康体检的筛查， 应用前景好。,尖锐湿疣,尖锐湿疣由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起。 目前发现的有100多个基因型 ，约30型与肛门或生殖道损伤有关。,尖锐湿疣,人乳头瘤病毒,尖锐湿疣,人乳头瘤病毒检测,尖锐湿疣,尖锐湿疣的辅助诊断 ； 尖锐湿疣复发的预测和随访； 宫颈癌及其癌前病变的观察 ； 男性生殖器肿瘤和肛门癌的观察；,尖锐湿疣,人乳头瘤病毒,生殖器疱疹,生殖器疱疹,生殖器疱疹主要由单纯疱疹病毒 2型（HSV-2）引起。 DNA病毒，细胞侵袭力强。 病毒较易潜伏在脊神

14、经节内。 有两个血清型，一般HSV-1 主要感染腰以上部位，HSV-2 主要感染腰以下部位。,生殖器疱疹,生殖器疱疹的实验室诊断方法： 形态学检查：涂片检查、免疫荧光法； 细胞培养：传统的“金标准”； 血清学检测：ELISA法、免疫印迹法； 核酸检测：PCR法；,生殖器疱疹,实验室最常用的方法； 可区分HSV1和HSV2感染； 可分别测定IgM和IgG抗体； 诊断疑似患者或非疱疹期感染者； 孕妇和新生儿筛查；,单纯疱疹病毒抗体检测,2013年全国性病防治工作要点 中疾控性控发2013004号 六、加强实验室能力建设与质量管理 1、制定本辖区性病实验室质量管理工作计划或方案，组织开展性病实验室的

15、现场考察和督导。 2、未通过省级中心实验室验收的省份应加强能力建设，根据当地卫生行政部门的要求制定申报参加省级中心实验室考核验收的计划。 3、参加中国疾病预防控制中心性病控制中心组织的性病实验室检测能力验证的梅毒参与率及合格率达100%，淋球菌及衣原体参与率达90%以上、合格率达85%以上。 4、开展性病诊疗服务的二级及以上医疗机构参加省级性病中心实验室组织的辖区内梅毒能力验证，参与率85%以上、合格率95%以上。 5、国家级淋球菌耐药监测点完成100株以上淋球菌临床分离株的检测，完成分析报告。,性病实验室诊断技术培训 各地市要加强性病诊疗机构实验室能力建设，开展实验室检测人员的性病诊断技术培

16、训。 梅毒血清学检测室间质评工作 参加并督导辖区内相关机构完成梅毒血清学检测室间质评工作。 实验室技术督导 配合省皮防所做好辖区内性病诊疗机构实验室的现场督导工作 。,国家级性病检测室间质量评价,淋球菌耐药监测,全省梅毒血清学室间质量评价,性病实验室技术培训,性病实验室工作督导,国家级性病检测室间质量评价,工作流程 省皮肤病防治研究所将质控品发放到各市、县（市区）疾病预防控制中心； 各市、县（市区）疾病预防控制中心负责辖区内参评单位的质控品发放等组织工作； 各参评实验室完成检测后通过网络回报检测结果； 省皮肤病防治研究所对检测结果进行汇总、分析和上报，并通报各地。,全省梅毒血清学室间质量评价,全省梅毒血清学室间质量评价,参评单位,检测样本 梅毒血清质控品，共5份； 检测项目 非梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒非特异性抗体检测）； 梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒特异性抗体检测）； 评分标准 每份样本上述两试验结果与预期结果一致得20分，满分为100分，90分为优秀，90且75为良好，75且60为合格，60分为不合格。,