《第十三章高效液相色谱分析法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第十三章高效液相色谱分析法（48页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、2018/9/20,第十三章 高效液相色谱分析法,第一节 高效液相色谱的特点与仪器第二节 基本原理与主要分离类型第三节 固定相与流动相第四节 影响分离的因素与操作条件选择,第一节 高效液相色谱的特点与仪器,一、高效液相色谱仪二、高效液相色谱法的特点三、流程及主要部件,一、液相色谱仪器,液相色谱仪（2）,液相色谱仪（3）,液相色谱仪（4）,二、高效液相色谱法的特点,特点：高压、高效、高速 、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。,三、流程及主要部件,1.流程,2.主要部件,(1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150350105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（ 甲酰
2、胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小),4. 选择流动相时应注意的几个问题,（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。,（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。,（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。,（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。,2018/9/20,一、影响分离的因素二、分离类型的选择三、液相色谱的
3、应用四、液相制备色谱,第四节 影响分离的因素与操作条件的选择,一、影响分离的因素,1. 影响分离的因素与提高柱效的途径在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：H = A + C u故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。,液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。,液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。,2.流速,流速大于0.5 cm/s时, Hu曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱
4、效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。,3.固定相及分离柱气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。,二、分离类型选择,三、 HPLC的应用,1. 环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(37 50m)流动相：正己烷流 速：1.5 mL/min色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：差示折光检测器,可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。,2. 稠环芳烃的分析,稠环芳烃多为致癌物质。,固定相：十八烷基硅烷化键合相流动相：20%甲醇-水 10
5、0%甲醇线性梯度淋洗，2%/min流 速：1mL/min柱 温：50 C柱 压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器,四、制备型液相色谱,获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。半制备柱（内径8mm，长度15 30cm），一次制备量.1mg；,1.色谱柱的柱容量（柱负荷）对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。,2. 液相制备色谱的方法,收集组分时，通常有以下情况：（1）可获得良好分离，主峰使用制备柱，超载提高效率；（2）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。,3. 制备型液相色谱,制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。制备柱：内径2050mm，柱长50cm。,
