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1、2018/9/20,褚云卓,1,艾滋病机会性感染 及性病实验室检查,中国医大一院检验科 褚云卓,2018/9/20,褚云卓,2,讲授内容,一、机会性感染病原学检查 二、性病实验室检查检查,2018/9/20,褚云卓,3,一、机会性感染病原学检查,1、病毒感染 2、细菌感染 3、真菌感染 4、原虫感染,2018/9/20,褚云卓,4,1、病毒感染 CMV感染,细胞学检查 从尿液、脑脊液或受感染的肝、肺、胃等组织标本中，用姬姆萨或瑞氏染色法进行染色，可见核内和（或）胞质内含包涵体的巨大细胞，其周围有一条明亮带。,2018/9/20,褚云卓,5,病毒分离 CMV病毒分离是诊断CMV感染最直接的方法，
2、CMV具有种属特异性。采取新鲜尿液、唾液、子宫分泌液、肝活检或尸检标本、外周血白细胞等，将标本接种于人胚肺二倍体传代细胞株上，培养24h后染色可见包涵体，而细胞病变需26周才能查见。虽然病毒的分离能证明有CMV感染的存在，但并不一定能证明与疾病有病原学联系。,1、病毒感染 CMV感染,2018/9/20,褚云卓,6,抗体检测 补体结合试验（CF）、间接血凝试验（PHA）、免疫荧光试验（IF）、免疫印迹试验（IB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及放射免疫试验（RIA）等。全自动快速微粒子酶免疫检测法（MEIA）可对IgG和IgM作出定量分析。,1、病毒感染 CMV感染,2018/9/20,褚云
3、卓,7,IgM阳性提示患者为现症感染或处于CMV感染活动期。 IgG阳性提示既往感染或潜伏感染。 IgG抗体滴度呈4倍或4倍以上增长时，表示有近期CMV感染。 严重的艾滋病患者血清抗CMV抗体可能阴性，故对艾滋病患者来说，CMV血清学检查阴性不能排除CMV感染。,2018/9/20,褚云卓,8,抗原检测 早期抗原免疫荧光检查（DEAFF）：将肺泡灌洗液、血液白细胞、尿液沉积物、活检或尸检样本接种于成纤维细胞，培养24小时后用荧光标记的单克隆抗体直接测定CMV的和蛋白，该法不仅快速而且敏感性和特异性均较高。,1、病毒感染 CMV感染,2018/9/20,褚云卓,9,CMV白细胞抗原血症检测：用免
4、疫细胞化学的方法在外周血白细胞核中对65kDa低基质磷蛋白（65kDalow-matrix phosphoprotein，pp65）进行检测，或利用流式细胞仪荧光标记的单克隆抗体测定白细胞中的CMV抗原，计数细胞病毒抗原的百分比，能提供定量数据。该方法可在症状出现前检测到CMV病毒，可定量，以预测和区分CMV活动期和无症状感染。可评价抗病毒治疗的效果以及检测中枢神经系统感染的艾滋病患者的脑脊液白细胞中CMV，其检测结果与用白细胞或血浆中CMV DNA扩增结果一致。使早期免疫受抑制或艾滋病患者的活动性CMV感染的诊断成为可能，该方法简便、快速且敏感性高。,2018/9/20,褚云卓,10,免疫组
5、化检查 将外周血白细胞用抗CMV单克隆抗体进行免疫组化染色也可快速作出诊断。免疫荧光检测标本中的CMV早期抗原，阳性时提示CMV活动性感染。,1、病毒感染 CMV感染,2018/9/20,褚云卓,11,CMV核酸检测 检测和定量CMV DNA以及mRNA提取外周血白细胞、血浆、血清中CMV DNA，采用套式PCR可诊断活动型MCV感染，利用逆转录PCR技术检测外周血白细胞中MCV mRNA，能够测出完整的病毒复制周期，特异性较普通PCR检测DNA高。,1、病毒感染 CMV感染,2018/9/20,褚云卓,12,艾滋病患者、器官移植者当处于CMV感染的活动期时，体内含有较高水平的CMV DNA，
6、伴随着临床症状的出现和用药治疗的失败CMV DNA的拷贝数会快速升高。因此，Rasmussen等用外周血白细胞中的CMV DNA含量来确定艾滋病患者的视网膜炎是否由CMV感染引起。但是，用PCR方法检测CMV DNA还不能判定患者是处于活动期、无症状期还是潜伏期，不能精确评估疾病的进程和用药治疗的效果。,2018/9/20,褚云卓,13,形态学检查 取标本涂片，以姬姆萨和瑞氏染色，镜检可见多核巨细胞和核内嗜酸性包涵体。,1、病毒感染 HSV-1和HSV-2感染,2018/9/20,褚云卓,14,病毒分离 在感染最初几天取病损处的水泡液或刮片拭子或组织标本接种于HSV敏感的细胞中，常用的细胞为人
7、胚肾、兔肾细胞、Hela细胞等。接种4896小时后，如发现有细胞肿胀、变圆、细胞融合等细胞病变现象和特征性的核内包涵体便可作出诊断。,1、病毒感染 HSV-1和HSV-2感染,2018/9/20,褚云卓,15,免疫学检测 HSV抗原检测主要是用HSV特异性单克隆抗体，以免疫荧光或ELISA方法直接检测病人组织或分泌物细胞中的HSV抗原，若为阳性则诊断为近期感染HSV。HSV抗体检测虽然是临床上最常用检测HSV感染的一种手段，但艾滋病患者通常会出现假阴性反应。,1、病毒感染 HSV-1和HSV-2感染,2018/9/20,褚云卓,16,核酸检测 采用PCR技术，扩增HSV基因组中一段特异性的基因
8、序列，是目前检测速度最快且敏感性最高的方法，但是阴性不能排除含有HSV的可能，因为临床早期获得的某些样本用PCR检测是阴性的，另外在样本中也可能存在PCR反应的抑制剂。在临床诊断较困难时，HSVPCR仍将发挥作用，例如可通过PCR在艾滋病患者的玻璃体液和皮肤黏膜病损中检测到HSVDNA。,1、病毒感染 HSV-1和HSV-2感染,2018/9/20,褚云卓,17,诊断HHV-6和HHV-7感染 培养：可采取病人血液、唾液、体腔液或疱疹液。 特异性病毒抗体：间接免疫荧光法或ELISA法检测。但是由于健康人群中血清抗HHV-6和抗HHV-7抗体阳性率均超过85%，因此血清学检测的临床意义不大。 分
9、子生物学方法：分子杂交或PCR方法直接检测标本中的病毒核酸。,1、病毒感染 HHV-6、HHV-7和HHV-8感染,2018/9/20,褚云卓,18,血清HHV-8潜伏蛋白(latent protein)抗体：Kaposis肉瘤和B淋巴细胞瘤患者阳性，艾滋病患者血清抗HHV-8潜伏蛋白抗体阳性常预示病人即将发生Kaposis肉瘤。 血清抗HHV-8可溶性抗原（lytic antigen）的抗体：几乎所有Kaposis肉瘤病人和90%男性同性恋HIV感染者为阳性，而正常人群阳性率为25%。,1、病毒感染 HHV-6、HHV-7和HHV-8感染,2018/9/20,褚云卓,19,疱疹基底部的组织碎
10、片进行涂片及瑞氏或姬姆萨染色，查找嗜酸性核内包涵体，或用电子显微镜直接检查水疱液中的典型疱疹病毒。 采用PCR方法检测标本中病毒核酸，方法灵敏、准确。 血清学检查多应用ELISA法，于发病2个月内查特异性IgG和IgM抗体，有诊断价值。,1、病毒感染 V-Z感染,2018/9/20,褚云卓,20,间接荧光抗体试验（IFA）和酶联免疫试验（EIA） 最理想的EB病毒血清学检测组分是VCA-IgG、EA-IgG和EBNA，这种组合，单份血清即可给90%95%的患者进行精确诊断分类。 嗜异性抗体和EB病毒特异性抗体IgG 嗜异性凝集效价从1：501：224均具有临床价值，EB病毒特异性抗体IgG滴度
11、1：80即有诊断价值。 检测EB病毒的核酸 常用的方法有：冷冻切片和石蜡切片的原位杂交试验、细胞悬液的杂交、点杂交和Southern印迹杂交等,1、病毒感染 V-Z感染,2018/9/20,褚云卓,21,2、细菌感染,机会性细菌感染是艾滋病的主要致死因素，艾滋病患者因反复发生细菌感染而多次住院治疗。凡是医院及社区人群感染的细菌均可引起艾滋病患者感染，常见的细菌有金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、假单胞菌、肠杆菌、流感嗜血杆菌和分枝杆菌等。尤其是正常免疫人群很少感染的细菌如非结核分枝杆菌等，常引起艾滋病患者机会性感染。,2018/9/20,褚云卓,22,铜绿假单胞菌（P.
12、aeruginosa),革兰阴性，长短不一， 单鞭毛。 生长温度2542。 氧化酶阳性。 还原硝酸盐、分解尿素、 精氨酸酶阳性。,2018/9/20,褚云卓,23,铜绿假单胞菌（P. aeruginosa),2018/9/20,褚云卓,24,标本直接检查 涂片染色镜检：抗酸染色和荧光染色 核酸检测 ：MTD试验 AMPLICOR MTB方法 分离培养 ：体培养法和液体培养法,2、细菌感染 结核分枝杆菌,2018/9/20,褚云卓,25,鸟分枝杆菌 菌体呈杆状，有时亦呈球杆状或丝状。卵黄培养基表现为淡黄色，在油酸卵蛋白琼脂培养基上菌落呈光滑无色素透明样的菌落，菌落中心较厚。鸟型分枝杆菌特异性抗原
13、检测，或用频率脉冲电子捕获气液色谱法检测细菌中的“结核硬脂酸”，或用特异性RNA或DNA探针进行杂交试验，或用PCR等方法鉴定标本中的鸟型分枝杆菌。,2、细菌感染 非结核分枝杆菌,2018/9/20,褚云卓,26,龟分枝杆菌 菌体呈多态性，可表现为细而长或短而粗的菌体，幼龄菌呈强酸性，陈旧培养物可渐渐失去抗酸性。此菌为快速生长菌，培养要求不高，在血琼脂培养基及麦康凯培养基上均生长良好，通常13天即可长出12mm直径的菌落，菌落表面光滑、湿润、有光泽、乳白色或淡黄色。,2、细菌感染 非结核分枝杆菌,2018/9/20,褚云卓,27,偶发分枝杆菌 菌体呈棒状、球状或细丝状，偶尔菌体亦可呈念珠状或表
14、现为膨胀的菌体。在液体培养基中菌体分叉状。此菌为快速生长型菌，5天即可长出肉眼可见的菌落，菌落呈平滑、柔软、奶油状，菌落亦可呈半球状、蜡样分裂叶状，亦常出现暗淡、粗糙、中心呈堆叠的菌落。在孔雀绿培养基上菌落可呈绿色，在玉米粉琼脂培养基上，菌落粗糙呈致密索状。光滑型菌落其周围有宽阔的网状物。,2、细菌感染 非结核分枝杆菌,2018/9/20,褚云卓,28,真菌感染 卡氏肺孢子虫感染,病原学检查 可从患者的痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中查到卡氏肺孢子虫。常用的染色方法有：六亚甲基四胺银（GMS）染色：包囊壁被染成褐色，囊壁可见特征性括弧样结构；亚甲胺蓝（TBO）染色：包囊壁呈深紫色，无特征性
15、括弧样结构；荧光染色法：包囊呈现明亮蓝绿色光环，包囊括弧样结构清晰可见。,2018/9/20,褚云卓,29,特异性DNA检测 用原位杂交技术和PCR方法检测血液、痰、支气管肺泡灌洗液及肺活检组织中的卡氏肺孢子虫DNA敏感性高，特异性好，PCR可检出10个拷贝的靶DNA。,真菌感染 卡氏肺孢子虫感染,2018/9/20,褚云卓,30,直接涂片镜检：将标本悬于生理盐水或10%20%的氢氧化钾中，镜下可见卵圆形芽胞及假菌丝，革兰染色芽胞及假菌丝呈蓝色。 分离培养：将标本接种于沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂及显色培养基，3037培养2448小时，在沙氏培养基上出现乳白色、光滑、中等大小的菌落，在显色培养基上菌落为绿色，即可确定为白假丝酵母。,真菌感染 白假丝酵母感染,2018/9/20,褚云卓,31,墨汁染色或刚果红水溶液染色:新型隐球菌呈圆形或椭圆形的厚壁孢子或芽生孢子，外有一层宽厚荚膜，边缘清楚整齐，有时可见单个出芽的细胞。 胶乳凝集试验:即新型隐球菌乳胶凝集试验，检测病人CSF或血清中新型隐球菌荚膜多糖抗原，其特异性和敏感性均较高，可简便快速有效诊断隐球菌性脑膜炎。 分离培养:采用自动微生物系统和API鉴定。,
