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1、,血型与交叉配血,主要内容：,红细胞血型概述 抗体检查和鉴定 交叉配血方法 日常工作中问题对策,血型的发现,1900年，奥地利科学家兰德斯坦纳,红细胞,血清,凝集,不凝集,遇到,红细胞抗原,血型系统（Blood group systems）29 245 血型集合（ Blood group collections）6 12 血型系列（series）：低频率系列（700 series，low-incidence antigens) 33高频率系列 (901 serise,high-incidence antigens) 12,Rh血型系统,Du比正常D阳性细胞抗原弱，但一旦输给Rh阴性的受血者后，
2、自然有免疫产生抗D的可能。同时Du型人者接受Rh阳性的细胞后，也有可能产生抗D抗体。 作为供血者，Du型归类为Rh阳性，作为受血者Du型归类为Rh阴性者。,红细胞抗体(1),预期抗体：若已知红细胞ABO血型，按Landsteiners法则可预知的ABO血型抗体，即抗-A和抗-B。预期抗体也叫做规则抗体意外抗体：抗-A或抗-B以外的抗体。在ABO亚型中，变异的抗-A1或某种抗-B等抗体，也称为意外抗体。意外抗体过去也叫做不规则抗体,红细胞抗体(2),天然抗体：没有可察觉的抗原刺激，而机体对抗原免疫应答的产物。天然抗体多为IgM抗体，能与含有相应抗原的红细胞结合，在盐水介质中出现肉眼可见的凝集反应
3、，所以也叫盐水抗体。IgM抗体的最适反应温度为0-25。免疫抗体：抗原刺激机体而产生的。免疫抗体多为IgG抗体，在盐水介质中只能致敏含有相应抗原的红细胞，但不产生凝集，需要采用抗球蛋白搭桥、酶处理细胞或聚凝胺介导等方法，才能产生凝集反应。IgG抗体的最适反应温度为37。,免疫血液学的传统方法,凝集实验和溶血实验玻片法/试管法/微孔板法抗人球实验,在抗原抗体反应中的去离子和低离子,盐水凝集法： 例如，ABO血型鉴定试验包括玻片法、试管法和微孔法但灵敏度相对较低，只在 一些基层医院血库使用 低离子强度盐水法：通过降低介质溶液离子强度，减少红细胞膜外围的离子云，促进红细胞凝集，因而其灵敏度有所提高。
4、,聚凝胺试验,原理：聚凝胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减小，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝聚。如果是抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集不可逆；无抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集解散。程序：按试剂盒说明书操作。,聚凝胺凝集法：通过多聚季氨盐溶液提供大量正电荷来中和红细胞表面负电荷，减少红细胞间的排斥，促进红细胞凝集，其灵敏度有较大提高。此方 法目前在国内使用较多。（Rh,Duffy）,抗人球试验 - 检测 IgG,抗人球试验：在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作
5、用，促进红细胞的凝集。可分为直接和间接抗人球试验。 K, k, Fya, Fyb, JKa, JKb, Kpa, Kpb,S, s, Lua, Lub,间接抗人球蛋白试验(IAT),经典IAT LISS-IAT:试管法 卡 PEG-IAT 酶IAT 聚凝胺IAT,经典IAT,程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，37孵育45-60分钟，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。用抗体致敏的红细胞检测试验结果的正确性。,LISS-IAT,原理：通过降低红细胞周围的离子氛，使抗体易于接近抗原，促进抗体在更短的时间内致敏红细胞，再使用抗人球蛋白试剂，使被致敏的红细胞产
6、生凝集程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加2-4滴LISS液后混匀，37孵育15分钟，离心观察细胞的凝集情况，用生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。,PEG-IAT,原理：PEG（聚乙二醇）是一种水溶性的中性多聚体，当含有抗原与相应抗体的溶液中加入PEG时，由于空间排斥效应作用，使溶液中的抗体饱和度提高，加速溶液中的抗原-抗体复合物的形成。程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加4滴PEG溶液后混匀，37孵育15分钟，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。,微柱凝胶技术(卡),原理：微管内有凝胶颗粒和试剂。凝胶颗粒具
7、有分子筛作用，离心后，不凝集的红细胞通过全程进入微管底部，而凝集的红细胞则悬浮停留在颗粒中。程序：按厂家说明操作,反应原理微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝 试验（Microcolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHA）在微柱凝胶 管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离心力下， 该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的 红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。,4+ 红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面 3+ 大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部 2+ 大部分红细胞复合
8、物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部 1+ 红细胞复合物位于凝胶中下部 与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为 红细胞完全沉积在凝胶管尖底部 完全溶血 凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色 不完全溶血 残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色 混合凝集 红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部,反应强度,现象及说明, 完全 不完全 混合凝集,抗人球蛋白试验(Coombs试验),直接抗人球蛋白试验(DAT)检测红细胞是否在体内被抗体或补体致敏,用于检测自身免疫溶血性贫血、药物引起的溶血、新生儿溶血病、溶血性输血反应 间接抗人球蛋白试验(IAT)在体外抗体致敏
9、红细胞,用于抗体筛选和鉴定、交叉配血、血型鉴定,酶试验,原理：蛋白水解酶可将红细胞表面的多肽链打断，使多肽链带负电荷的唾液酸也一起离开红细胞表面，减少了红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，容易产生凝集反应程序：2滴血清、1滴2-5%红细胞，加入2滴酶，37孵育15分钟，离心看结果。注：酶会破坏一些抗原结构，如M、N、Fya、Fyb 等,影响输血效果的免疫血清学问题,速发型输血后溶血反应血管内溶血主要原因: ABO血型不和 迟发型输血后溶血反应血管外溶血主要原因: 针对红细胞抗原的同种抗体血型抗原的同种免疫 红细胞抗原免疫强弱依次为Rh（DE C c e ）、 Kell、Duffy、Ki
10、dd,传统方法的局限性,不利于标准化管理 重复性较差 要求操作者的经验丰富 难以实现自动化操作,凝胶凝集试验,凝胶凝集试验 - 原理 (1),通过离心使红细胞被挤过装有过滤介质的小柱 凝集的红细胞被阻挡在小柱中过滤介质的顶部或中央， 而未凝集的红细胞则到达小柱的底部 血型或AHG试剂被加入到过滤介质 由于红细胞和血清成分以不同的速度通过小柱（重力加速度不同），从而消除了血清中未结合的球蛋白中和AHG的可能性，因而，在抗人球试验中，不用清洗红细胞,凝胶凝集试验,凝胶抗人球试验,新技术卡式检测法：1986年法国Dr.Yves Lappierre发明了用于分离凝集红细胞的凝胶卡式检测法。经过不断改进
11、和临床的大量应用，目前在发达国家已作为临床常规的红细胞血型血清学检测新技术。1994年凝胶卡式检测法用于临床常规的红细胞血型血清学检测，已得到美国FDA权威机构的认证。,凝胶酶试验,酶法：利用木瓜酶或菠萝酶来破坏红细胞表面的唾液酸， 使细胞膜表面失去电荷，减少红细胞间的排斥；同时暴 露某些隐蔽抗原，增强凝集反应。主要用于一些不完全 抗体的检测。,凝胶凝集试验 - 原理(2),标准化的孵育时间 标准化的离心时间 标准化的判读 - 消除主观因素对弱反应结果的判读 结果稳定保存,凝胶试验应用于血型血清学,血型实验室中的一次革命在全世界许多发达国家已被公认为是常规免疫血液学实验的“金标准”。,1990
12、年，卡式检测法的发明人Dr. Yves Lapierre等用低离子强度盐水法（试管法）、聚凝胺试验（试管法）和卡式检测法（凝胶）研究了400例已知抗体的样本。血清与细胞的比例是按照试管法标准配置。结果为：卡式检测法检出359例（检出率为90%）低离子强度盐水法检出243例（检出率为61%）聚凝胺试验检出301例（检出率为75%）,凝胶试验应用于血型血清学,结果判断模式,凝胶试验应用于血型血清学,临床输血技术规范,明确规定部分病人应做“抗体筛选”检测，第四章第17条：“凡遇以下情况必须按全国临床检验操作规程有关规定做抗体筛选试验：1、交叉配血不合的； 2、对有输血史、妊娠史或短期内需接受多次输血
13、者。,为什么要开展输血前的“抗体筛选”检查,1、目前已知红细胞有26个抗原系统（确认21个，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等），500多种抗原（确认200多种）。红细胞抗原的多样性决定了抗体的多样性，检测抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可确保绝大多数病人的输血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引发的溶血。,2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临床医师重视。（理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升
14、不到10g/L，或几天后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。,抗体筛选检查,一、什么叫“抗体筛选”检查1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗D、抗N、抗M、jk-抗体。2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清（含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选”阳性。,抗体筛选技术要求,尽可能多的检测出有临床意义的
15、抗体。 尽可能少的检测出无临床意义的抗体。 尽可能快的完成抗体检测,方法选择：每种方法都有自己的特点，适应于不同范围及情况,盐水法：可以用于检测干扰ABO定型的盐水反应活性抗体，如：MN、P血型抗体。但此方法会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素抗I及抗IH等，而且会漏检IgG性质的抗体。 低离子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需试验时间少（35分钟）、方法灵敏度高，准确性高，但无法排除无临床意义抗体的干扰。 间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗体的方法，同时此方法可以有效的避免无临床意义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多。,抗体特异性鉴定,使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细胞一般由8-16种含有不同抗原的O型红细胞配套组成，根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。,检测新生儿溶血的“三项试验”,直抗试验：即用直接抗球蛋白试验的方法，检测新生儿红细胞上是否存在免疫抗体。游离试验：是检测新生儿血清中的血型抗体。释放试验：和直抗试验相同，也是检测新生儿红细胞上的致敏的血型抗体，只是方法不同。,交叉配血试验的涵义,
