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1、肿瘤标志物研究策略 及新肿瘤标志物,肿瘤标志物 肿瘤细胞所产生或分泌的某种蛋白质或其它物质，与肿瘤的存在和发展密切关系。 可用于肿瘤的筛查、诊断、治疗疗效监测和预后判断。,常见分类法: 蛋白类 糖蛋白类 酶类 激素类 核酸类,肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen, TSA) 仅存在于某种肿瘤细胞表面，而不存在于相应正常组织细胞或其它肿瘤细胞表面的抗原。 肿瘤相关性抗原(tumor-associated antigen,TAA) 肿瘤细胞和正常组织细胞都表达的抗原物质，只是其含量在细胞癌变时明显升高，仅表现为量的变化，无严格肿瘤特异性，如胚胎抗原，分化抗原等。,理想的肿瘤
2、标志物,1. 灵敏度高：可以用于肿瘤早期发现、早期诊断 2. 特异性好：肿瘤为阳性，而非肿瘤时为阴性 3. 能对肿瘤进行定位：具有器官特异性 4. 与疾病的严重程度：肿瘤大小，分期有关 5. 监测肿瘤的疗效 6. 监测肿瘤的复发 7. 预测肿瘤的预后,理想是美好的，道路是曲折的,理想状态,实际状态,肿瘤太狡猾,肿瘤细胞异质性大 肿瘤的发生发展过程复杂 多基因多因素参与 理想肿瘤标志物任重而道远！,肿瘤标志物的筛选和研发策略,肿瘤标志物的筛选和研发策略,美国国立癌症研究员制定的五个阶段 一、临床前探索性研究 二、临床方法检测已有疾病 三、纵向回顾性分析研究 四、前瞻性筛查研究 五、控癌研究,一、
3、临床前探索性研究,寻找新的肿瘤标志物 研究标本 1.肿瘤组织与非肿瘤组织 2.肿瘤细胞株与正常细胞株 研究使用的方法技术 1. 组织芯片 2. 基因芯片 3. 蛋白质差异表达比较 4. 单克隆抗体技术,一、临床前探索性研究,寻找新的肿瘤标志物 研究标本 1.肿瘤组织与非肿瘤组织 2.肿瘤细胞株与正常细胞株 研究使用的方法技术 1. 组织芯片 2. 基因芯片 3. 蛋白质差异表达比较 4. 单克隆抗体技术,差异比较,组织芯片,是生物芯片技术的一个重要分支，是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上，进行同一指标的原位组织学研究。,选取所需蜡块,常规切片做HE 染色,显微镜下 确定目
4、标区并做定位标记。,1 组织芯片制备过程,采用组织芯片仪在受体蜡块上打孔,并精确排成 微孔阵列。 在做标记的蜡块上钻取组织柱,按设计方案移到 受体蜡块上。,把设计好的蜡块放入温箱,根据蜡质,调定温箱 温度,在半融状态下取出,室温冷却,放入4 冰 箱中备用。 借助特定切片辅助系统粘着包被带卷片系统, 对组织芯片蜡块连续切片。切片厚度2 3m , 一般可切片50100 张。,各种不同低、中、高密度组织芯片,1,2是低密度组织芯片（组织点600),基因芯片,基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的核苷酸的探针。,DNA
5、芯片,6400点的基因芯片 （面积 12X14 mm),蛋白质差异表达比较,二维电泳 蛋白质比较研究的质谱相关技术 SELDI蛋白质芯片技术,1.Expression proteomics (表达蛋白组学) The study of global changes in protein expression,Proteomics,2.Cell-map proteomics （细胞图谱蛋白组学） The systematic study of protein-protein interactions through the isolation of protein complexes,蛋白质差异表
6、达比较,双向凝胶电泳是利用不同蛋白质的物理、化学性质的差异，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上展开。 第一向等电聚焦: 等电点 第二向SDS-PAGE：分子量,二维电泳,蛋白质比较研究的质谱相关技术,基质辅助激光解吸电离技术MALDI (Matrix-assisted laser desorption/ionization) 电喷雾电离质谱术 ESI （ Electrospray ionisation ）,单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤细胞与经特定抗源免疫刺激的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力。,单克隆抗体技术
7、,单克隆抗体技术,1.使用肿瘤细胞免疫动物后，得到的杂交瘤细胞产生的抗体，反过来寻找抗原。 2.在肿瘤细胞中验证,新肿瘤标志物,1.HE4 2.GP73 3.Her-2 4. Pepsinogen 5.S100 6.PRO-GRP,HE4,属于乳清酸性4-二硫化中心（WFDC）蛋白家族. HE4首先在附睾远端的上皮中被发现，并且最初认为它是一种与精子成熟相关的蛋白酶抑制剂。一 分泌型HE4已经在卵巢癌患者的血清中检测到有高水平表达。,GP73,GP73是存在于高尔基体的一种跨膜蛋白。 2000年Kladney研究表明，在正常的人体肝组织中，GP73主要由胆管上皮细胞表达，而肝细胞表达很少甚至不
8、表达。肝细胞受到病毒感染后可引起GP73的表达上调。 2005年Block等发现，在肝癌患者血清中GP73水平显著升高。在一项研究中，与肝硬化患者相比，144例肝癌患者的血清GP73水平显著升高。GP73诊断肝癌的敏感性为69%，特异性为75%。,人类表皮生长因子受体2-Her2,Her2基因,即c-erbB-2基因，定位于染色体17q12-21.32上,编码相对分子质量为185000的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性 Her2阳性(过表达或扩增)的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别，目前已有针对该基因失活的药物-赫赛汀（Herceptin）
9、临床意义： 是重要的乳腺癌预后判断因子 用于指导赫赛汀治疗 选择化疗方案以及疗效评价,胃蛋白酶原-pepsinogen,胃蛋白酶原是由胃粘膜分泌的胃蛋白酶前体 PGI仅存在于胃底和胃体部粘膜的主细胞、颈粘液细胞，而PGII则分布于全胃及十二指肠的Burnner腺细胞，均可在血清与尿液中测出 胃癌患者PGI的含量及PGI/PGII比值均明显降低，测定PGI水平与PGI/PGII比值可作为胃癌诊断的一个辅助指标 PGI与胃酸的分泌存在平行关系。PGI水平和PGI/PGII的比值能够反映胃粘膜的功能状态，并且与胃粘膜萎缩的范围及严重程度显著相关。鉴于中、重度萎缩性胃炎与肠型胃癌的发生关系密切，PGI
10、或PGI/PGII比值明显降低预示患肠型胃癌的危险因素增加,S100,S100蛋白分子量为10.5KD的钙结合蛋白 S100A1和S100B是最先发现的成员。由中枢神经系统细胞表达，特别是星形胶质细胞、黑色素瘤细胞和其他一些组织也有表达 临床意义： 恶性黑色素瘤患者，特别是II、III和IV期的患者，血清S100浓度的升高提示疾病的进展，连续检测有助于疗效的评估 多种类型的大脑损伤，脑脊液中S100的浓度会升高，并能 释放到血中，多种疾病导致的脑损伤，如脑外伤、中风和 脑肿瘤的患者血清中能检测出S100,胃泌素释放肽前体-Pro-GRP,神经内分泌组织异常分化所导致，外周循环中ProGRP的正常上限为50pg/ml 血清ProGRP水平与肺癌的病理类型有着相关性，小细胞肺癌（SCLC）比非小细胞肺癌（NSCLC）具有更高的水平，ProGRP对小细胞肺癌有较高的敏感性 ProGRP结合NSE对SCLC治疗进行疗效的监测 可用于SCLC的诊断, 早期发现肿瘤复发 部分慢性肾功能衰竭患者血清ProGRP也可升高，故临床检测时宜同时检查患者的肾功能,每年有很多新的肿瘤标志物报道 期待更多的新的肿瘤标志物,谢谢,
