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1、药物分析,第二十章 生物制品分析,主要内容,生物制品的质量要求,鉴别试验,生物制品检查内容,4,1,2,3,生物制品的分类,生物制品质量控制实例,5,学习要求,掌握,分类、质量特点和要求,鉴别方法、质量检查主要内容,质量控制的主要手段,熟悉,了解,生物制品（Biological products）,定义：是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为起始原材料，用生物学技术制成，用于预防、治疗和诊断人类疾病的制剂，如疫苗、血液制品、生物技术药物、微生态制剂、免疫调节剂、诊断制品等。 ChP2015三部凡例,生物制品的分类,预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗 治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子
2、、DNA重组制品、单克隆抗体 诊断类：体内诊断、体外诊断,疫苗类药物,细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗,细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗,细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗,细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗,抗毒素及抗血清类药物,凡用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物所取得的免疫血清叫抗毒素（或抗毒血清）。 凡用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所取得的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清。,血液制品,指源自人类血液或血浆的治疗产品。是由健康人的血液或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成分。,重组DNA蛋白制品,细胞
3、因子类：IFN-1b、EPO 生长因子类：重组人表皮生长因子 激素类：重组人生长激素 酶类：重组链激酶 疫苗类：重组乙型肝炎疫苗 单克隆抗体类：尼妥珠单抗 生物类似药：符合审评要求的重组蛋白质制品 诊断制品：体外诊断、体内诊断,生物制品的质量要求,安全性,有效性,可接 受性,鉴别试验,免疫双扩散法 免疫电泳法 免疫印迹法 免疫斑点法 酶联免疫法,免疫双扩散法,系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原与抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀线，以此对供试品的特异性进行检查。 伤寒Vi多糖疫苗、狂犬病人免疫球蛋白和
4、人血白蛋白,免疫电泳法,系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉淀弧。将沉淀弧与已知标准抗原、抗体生成的沉淀弧的位置和性状进行比较，即可分析供试品中的成分及其性质。 人血白蛋白、冻干人免疫球蛋白,免疫印迹法,系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。 重组人促红素注射液（CHO细胞）、注射用重组人干扰素1b,免疫斑点法：注射用重组人干扰素2a等 酶联免疫法：抗毒素和抗血清制品 。如冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）、人用狂犬疫苗（Vero细胞）和重组乙型肝炎疫苗（酿酒
5、酵母）等。,生物制品检查内容,（一）物理性状的检查 外观 真空度及溶解速率 装量,（二）蛋白质含量测定 凯氏定氮法（钨酸沉淀法）（三氯醋酸沉淀法） 酚试剂法（Lowry法） 双缩脲法（紫外-可见分光光度法）,（三）防腐剂和灭活剂含量测定 苯酚、甲醛、三氯甲烷、汞制剂等 （四）纯度检查 （五）相对分子质量或分子大小测定 （六）其他,（七）安全检查,检查内容,过敏物质的检查 杀菌、灭活和脱毒检查 残余毒力和毒性物质的检查 外源性污染的检查,（八）生物制品的效力测定,外源DNA残留量的检查,宿主细胞（菌)蛋白残留量的检查,产品相关杂质的检查,残余抗生素的检查,（九）杂质检查,生物制品质量控制实例,C
6、hP人血白蛋白质量控制规程 ChP尼妥珠单抗注射液质量控制规程,人血白蛋白,人血白蛋白由健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经批准的其他分离法分离纯化，并经60 10小时加温灭活病毒后制成。,1. 原料血浆 2. 原液 （1）双缩脲法测定蛋白质含量 （2）电泳法测定蛋白质纯度 （3）pH （4）残余乙醇含量,3. 半成品检定 （1）无菌检查：ChP2015三部通则1101 （2）热原检查：家兔,4. 成品检定 （1）鉴别试验：免疫双扩散、免疫电泳 （2）热稳定试验：（570.5) （3）化学检定：pH、蛋白质含量 （4）无菌检查：ChP2015三部通则1101 （5）异常毒性检查：ChP2015
7、三部通则1141 （6）热原检查： ChP2015三部通则1142,尼妥珠单抗注射液,本品系由含有高效表达抗人表皮生长因子受体单克隆抗体基因的小鼠骨髓瘤（NS0）细胞，经细胞培养、分离和高度纯化后获得的重组人表皮生长因子受体单克隆抗体制成。,一、基本要求 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求 二、制造 1. 工程细胞 系由编码尼妥珠单抗重链的pSV2-gpt质粒和编码轻链的pSV-hyg质粒转入NS0宿主细胞构建而成,2.细胞库 （1）细胞库建立、传代及保存 （2）主细胞库及工作细胞库的检定 1）支原体检查2）抗体表达量测定,3.原液（1）细胞的复苏与扩增（
8、2）生产用细胞培养液（3）细胞培养（4）分离纯化,三、检定1.原液检定 （1）鉴别实验：等电点（等电聚焦电泳法）、 肽图（ 胰蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法）、N端氨基酸序列（氨基酸序列分析仪或质谱法） （2）pH,（3）纯度和杂质1）分子排阻色谱法2）弱阳离子色谱法3）毛细管凝胶电泳法：CE-SDS还原电泳和CE-SDS非还原电泳4）蛋白质A残留量（酶联免疫法）,5）外源性DNA残留量6）宿主细胞蛋白质残留量（酶联免疫法） （4）相对结合活性 （5）蛋白质含量 （6）细菌内毒素检查,2.半成品检定 （1）pH （2）蛋白质含量 （3）无菌检查 （4）细菌内毒素检查,3.成品检定 （1）鉴别试验：等电点、相对结合活性 （2）理化检定1）外观 ：应为无色澄明液体，可带轻微乳光2）溶液的澄清度,3）可见异物4）不溶性微粒5）装量6）pH7）渗透压摩尔浓度,（3）纯度和杂质1）高效液相色谱法（同半成品）2）毛细管凝胶电泳法（同半成品）3）聚山梨酯80含量 （4）效价：生物学活性鉴别、相对结合活性,（5）蛋白质含量 （6）无菌检查 （7）细菌内毒素检查 （8）异常毒性检查,Thank you very much!,
