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1、点评,革兰氏染色效果较差，脱色时间控制不好。 荚膜染色效果良好，黑色素染液涂片的厚度 绘图进步较大，但菌体比例尚需注意 图片名称需要规范且合理,SJJM菌株光学显微镜图（简单染色） 放大倍数：1500倍 解析：。,存在的其他问题：细菌形态不规则，菌体有缺口，多种形态细菌混杂而未标注。,思考题,1、荚膜染色，为什么不能热固定？ 2、荚膜负染法，荚膜为何不着色而菌体着色？,思考题,可用什么方法证明革兰氏染色是成功的？ 革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？ 革兰氏染色哪一步最关键？,酵母菌的形态观察,背景知识,酵母菌是一个通俗名称，一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真
2、菌。酵母菌能发酵糖类产能，其生境一般为高糖、偏酸。,一 实验目的,1.观察酵母的形态及出芽生殖方式 2.学习区分酵母菌死活细胞的鉴别方法,背景知识,宏观 菌落特征：和细菌菌落极为相似，表面湿润、粘稠，与培养基结合不紧密，易挑起。但比细菌菌落大而厚，颜色比较单一，大多乳白色、只有少数为红色、黑色等，不同种类的菌落在形态、质地和边缘特征上均表现不同。菌落光滑或起皱，平整或突起，边缘圆整或有不规则的毛状物。菌落特征可作为酵母菌菌落鉴定的依据之一。（总之，酵母菌细胞较细菌细胞大10倍左右，表现在菌落形态上就有酵母菌的菌落直径较大、菌落隆起明显等特点）,细胞结构,微观 ：酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞
3、核和细胞质有明显分化， 个体直径比细菌大几倍甚至几十倍，大小约1-5微米5-30微米。最长的可达100微米。 。,酵母菌的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。,酵母菌繁殖方式为无性繁殖和有性繁殖两种。正常情况下以无性繁殖为主，无性繁殖主要方式是出芽方式，有的是分裂繁殖；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。,成熟的酵母菌细胞，先长出一个小芽，芽体细胞长到一定程度，脱离母细胞继续生长，尔后形成新个体。有多边出芽、两端出芽、和三边出芽。,芽痕-蒂痕（啤酒酵母）,二 染色原理,由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美兰染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母形态和出芽
4、生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，是活体染料的一种，是碱性染料。它的特性是氧化态呈蓝色，还原态呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。 因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或新陈代谢微弱的衰老细胞呈蓝色和淡蓝色，借此即可对酵母细胞进行死活鉴定。,三、实验材料 ：,1.菌种 啤酒酵母 2.染液 吕氏碱性美蓝液 3.器材及用具 接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸管、镊子、显微镜、恒温培养箱。,酿酒酵母菌细胞形态多为卵圆形，在高倍镜下清晰可见，并可观察到其细胞内的液泡及颗粒状内含物，但观察不到细胞
5、核。 芽殖的形态为：在较大的母细胞上生长着较小的子细胞，两者间呈藕节状连接。细胞呈无色的为活细胞，呈蓝色的为死细胞或衰老的细胞。,注意事项,制备菌悬液时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。 水制片，染料或蒸馏水不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液容易溢出或产生气泡，影响观察。 盖玻片不宜平着放下，应倾斜慢放，避免产生大量气泡。 注意区别出芽与酵母菌重叠的情况。,五、实验结果,图示酿酒酵母菌的细胞、芽殖形态。对实验进行简单分析、描述。记录死、活细胞的大致比例P75。 思考题： 1. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的形态特征区别于一般细菌。 2.吕氏碱性美蓝染液浓度及作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量
6、计数有什么影响，试分析其原因。,微生物细胞大小的测定,一.实验目的,学习测微技术，测量酵母细胞的直径（宽度）和长度。,二实验原理,微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一。由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。光学显微镜中，用来测量细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺,目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间相重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于在显微镜不同的接目镜和接物镜系统下，放大倍数不同，目镜测微尺每格所示长度随显微镜放大倍数而变化。所以在使用前，须用镜台测微尺来校正
7、目镜测微尺。,4倍,10倍,40倍,10微米,镜台测微尺形如载玻片，在中央的圆形盖片下，有一长为1mm的刻度，精确等分为100格，每格长10m。故用已知长度的台尺校正目尺，即可求出目尺一格的长度。,三实验器材,1.菌种酵母菌悬液 2.器材目镜测微尺、镜台测微尺、显微镜、盖玻片、无菌滴管、双层瓶、擦镜纸等。,四 实验步骤,1.将目镜测微尺装入目镜内，刻度朝下，并将镜台测微尺置载物台上。 2.用低倍镜观察到镜台测微尺的刻度。 3.换用高倍镜测量，先用镜台测微尺标定。计算出目镜测微尺每格的长度。移动镜台测微尺和转动目镜测微尺，使二者的刻度平行，并使两尺的第一条线重合。向右寻找另外相重合的直线，记录两
8、重合刻度间目镜测微尺和镜台测微尺的格数，由公式算出目镜测微尺每格长度。,五.实验报告,将实验结果记录于，表中,注意事项,光线调节，不宜太亮，以免找不到台尺 菌体不同生长阶段细胞大小变化大，以对数生长期的菌体材料为宜，直径相对稳定。,实验完毕注意事项,台尺回收，交于老师； 清理显微镜物镜及台面卫生，显微镜按编号放回厨子,微生物的显微直接计数,一、目的要求 了解血球计数板构造和原理 学会用血球计数器测定酵母菌细胞数,二、基本原理-计数,用血细胞计数板计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每
9、个方格框共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。由于计数室的容积是一定的（0.1mm3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。,1 2 3 4,不可用油镜,9个大格,计数室宽1mm,25中格16小格 16中格 25小格,计数时，先数五个中方格的总菌数，求得每个中方格的平均值， 再乘以25或16，得出大方格的总菌数，再换算成1ml菌液中的总菌数。,三、材料与器材,1、材料 酵母菌 2、器材 血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管等。,四、操作步骤,1 稀释 将酵母菌液进行适当稀释。 2 镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。（清洗，晾干）,3 加样品
10、 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻 片，再用干净细口滴管将稀释均匀的酵母 菌液滴入（不宜过多或过少，从一侧的沟槽慢慢滴入，让其自然漫过计数室，至对侧沟槽充满菌液为止），静置5-10min即可计数。,4 显微镜计数 先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成 高倍镜（40倍）进行计数。（有的显微镜40倍物镜不佳，届时需要协调使用） 5.清洗 清洗计数板：用水柱冲洗血球计数板，晾干。镜检，确认无残留物。计数板干燥后装回盒子，交回实验室老师，以备后用。 清洗显微镜物镜并整理好台面卫生。,注意事项:,取样时先要混匀菌液; 加样时计数室不可有气泡产生； 加样量适中； 调节显微镜光线的强弱适当(光圈调节)； 计数板上刻度精细，清洗勿用刷子或硬物，也不可用酒精灯火焰烘烤。,对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。,数上不数下，数左不数右,五、思考题,1、用血球计数板计数时，哪些步骤易造成 误差？ 2、血球计数板测定原理是什么？它有哪些优点及缺点？p52 3、用两种不同规格的计数板测同一样品 时，其结果一样？,六、实验报告,P55 报告前后表格的格式统一（三线表或封闭性网格线表格）,
