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1、动物生理实验负责教师： 魏 香指导老师：李英姿 老师孙朝晖 博士刘万里 博士芮妍芳 博士,动物生理实验 实验内容安排 1序论；反射弧分析及反射时测定；坐骨神经腓肠肌 标的制备；多道生理记录仪使用培训 2骨骼肌单收缩的分析；骨骼肌收缩的总和与强直收缩 3神经干动作电位的观察；神经冲动传导速度的测定；坐骨神经不应期的测定 4蟾蜍心搏过程的观察与描记；蟾蜍心室的期外收缩与代偿间歇 5离子和药物对蟾蜍心脏的影响 6家兔大脑皮层运动机能定位；去大脑僵直 7兔离体小肠段的生理特征 8人体动脉血压的测定；心音听诊；声音的传导途径；盲点的测定；肺通气功能的测定 9设计实验及考试 10.总结, 序论 反射弧分析
2、及反射时测定 坐骨神经腓肠肌标本的制备 多道生理记录仪使用培训, 序 论,生理实验课总体目的和要求 实验报告的书写考核方式及评分方法,生理实验课总体目的和要求,目的：生理学的任务是研究生物机体的功能。机体所表现的生 命现象或生理作用有哪些？它们的规律是什么？这些问题的 答案只能来自于实验或观察，我们这门课的目的就是通过实 验： 掌握、熟悉或了解生理学实验的基本操作技术。 了解获得生理学知识的过程和科学方法。 加深对生理学基本概念和基本理论的理解。 培养理论联系实际的能力和对科学工作严肃的态度、严 格的要求、严密的工作方法和实事求是的工作作风。 培养对生物进行客观的观察、比较、分析、综合的能力以
3、及独立思考解决实际问题的能力。,生理实验课总体目的和要求,要求：实验课前做好预习。实验课中： 穿实验服，佩戴胸卡。 分工合作，积极参与实验的操作、观察和记录。不得进行与实验无关的活动。 节约试剂和药品，爱护实验器材，如出现故障，应及时报告指导老师。 严格控制实验时间，保证在规定的课时内完成相应的实验任务。实验课后： 将实验用品整理就绪，所用器械擦洗干净，借用物品及时交还，所用物品与实验结果经当课老师查验后方可离开。 值日生做好实验室清洁工作，经教师同意后方可离开。 整理实验记录，认真填写实验报告，按时交给负责教师评阅。,实验报告的书写,书写实验报告应语句通顺，文字清楚，表达简洁明了。 同学间可
4、相互讨论，但必须独立完成实验报告。一份完整的实验报告应包括以下几部分：动物生理学实验报告姓名 班次 组别 同组者 日期 实验序号及题目 实验目的及要求 实验原理 # 实验对象及器材 # 实验方法及步骤 # 实验结果 分析与讨论 结论 思考题,考核方式及评分方法,课程满分100分。其中平时成绩占70，期末考试占30。 平时成绩包括实验报告和课上表现：实验报告主要考察方面为：书写是否认真，报告是否完整，结果的真实性、完整性，分析及讨论是否合理，结论是否正确等。不交实验报告记0分。不以报告长短来评分，也不会因手写或机打而有所区别。本周报告下周交，隔周讲解。课上表现包括考勤、课上操作、实验内容完成情况
5、等。,考核方式及评分方法,期末考试方式： 根据本学期所做实验，总结自己的实验经验与不足，在此基础上设计一个新的实验，以弥补以前实验中的不足，同时要有所深化或拓展。 根据生理学的相关理论知识，设计一个新的实验，以阐明某一个生理机理。 基本要求是： 要在实验室现有实验条件能够实现的情况下进行。 实验设计要合理，不能凭空想象。 设计思路及所需设备要在全部课程结束前两周以书面形式告知任课老师，以便安排相关仪器设备。,主要参考书,生理学（第四版）。张镜如主编，乔健天副主编，人民卫生出版社，1996。 大学生理学。朱妙章主编，高等教育出版社，2002。 人体及动物生理学（第二版）。王玢，左明雪主编，高等教
6、育出版社，2001。 发育神经生物学。蔡文琴，李海标主编，科学出版社，1999。 生理学实验（第二版）。解景田，赵静主编，高等教育出版社，2002。 生理学实验指导（第二版）。邓群根主编，人民卫生出版社，1997。 生理学实验。陈其才，严定友，吴政星编著，科学出版社，1995。 生理学实验指导。孙庆伟，杨君佑，孟庆芳，潘桂兰主编，中国医药科技出版社，1996。,反射弧分析及反射时测定, 实验目的 实验原理 实验对象与器材 实验步骤 关键技术 注意事项 思考题 创新与探索, 实验目的,分析反射弧的组成，并探讨各部分对反射活动的作用。 掌握测量反射时的方法，了解刺激强度与反射时的关系。, 实验原理
7、,反射是指在中枢神经系统参与下的机体对内外环境刺激的规律性应答。反射活动的结构基础称为反射弧，包括感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器。在自然条件下，反射活动一般都需经过完整的反射弧来实现，如果反射弧中任一环节中断（结构或功能受到破坏），则反射不能发生。从刺激开始至反射出现所需要的时间即是反射通过反射弧的时间，称为反射时（或称潜伏期）。在一定范围内，刺激越强，反射时越短；刺激越弱，反射时越长。,反射弧模式图, 实验原理, 实验对象与器材,蟾蜍，蛙类手术器械一套，蛙板，铁支架，肌夹，玻棒，小滤纸片，纱布，培养皿，小烧杯，棉花，秒表，盐酸（0.1%, 0.5%, 1% 各200 mL），2
8、 % 普鲁卡因，清水。, 实验步骤,脊蟾蜍制备：用右手拇指和食指夹住蟾蜍，用自来水稍加冲洗，去除表面的污物即可（不可搓揉，否则会有大量毒液放出）。左手握蟾蜍，小指和无名指夹住后肢，拇指按压背部，中指放在胸腹部，用食指下压头部前端使头前俯，右手持探针由枕骨沿正中线向脊柱端触划，当触到凹陷处（头前端，位于两毒腺之间），即枕骨大孔处，将探针垂直插入，左右摇动，切断脑和脊髓的联系，然后将探针向前刺入颅腔内，将探针左右摇动、旋转，捣碎脑组织。保留脊髓完好。,分离坐骨神经： 将脊蟾蜍俯卧固定于蛙板上，剪开左侧大腿背部皮肤，分离肌肉（股二头肌和半膜肌）和结缔组织，暴露坐骨神经，在神经下穿一条丝线备用。 反射
9、时的测定： 用肌夹夹住脊蟾蜍下颌，悬挂于铁支架上。 用0.1 % HCl （培养皿中）刺激后肢的中趾趾端，同时启动秒表计时，当屈肌反射一出现，立刻停止计时，记下反射时，重复三次，求平均值，休息5 min。 用0.5 % HCl，1% HCl 分别刺激同一后肢脚趾各三次，每次用HCl刺激后都要用清水冲洗并拭干脚趾。, 实验步骤,反射弧组成分析： 用培养皿盛0.5 % HCl分别刺激二后肢的中趾趾端，均出现屈反射，之后立刻用清水洗净脚趾，并用纱布轻轻拭干水。 在右膝关节处将皮肤作一环形切口，剥去切口以下的全部皮肤。 再用0.5% HCl刺激右脚趾，观察是否出现反射，分析原因，洗净脚趾。 将浸过1%
10、 HCl的滤纸片贴在左后肢的皮肤上，观察左后腿，甚至右后肢可出现的屈反射，分析原因。, 实验步骤, 实验步骤,在坐骨神经上放一浸过2%普鲁卡因的小棉球，每隔1 min用0.5% HCl测试左后肢脚趾，观察屈反射是否出现。 当左后肢反应刚刚不再出现时，立即将浸过1% HCl的滤纸片贴在右侧背部，同侧后肢可出现抓反射。 用镊子夹住后肢，有屈反射。 用探针捣碎脊髓，各种反射均消失。, 关键技术,脊蟾蜍制备膝关节以下皮肤的剥离, 注意事项,毁脑时不可伤及脊髓，以免破坏脊髓反射中枢。 分离坐骨神经应尽量向上，并尽量剪断与其相连的分支。 每次酸刺激后应立即用清水洗净脚趾，并用纱布揩干。 剥脱脚趾皮肤要完全
11、，若剩留少量皮肤会影响实验结果。, 思考题,运用所得到的现象，通过严格的推理来分析后肢屈反射的反射弧构成。 屈反射和抓反射的皮肤感受野有何不同？ 分析刺激强度和反射时的关系，如果实验中开始测定的反射时很长，并且有缩短趋势，可能是什么原因？ 比较从给药到屈反射消失和给药到抓反射的反射时，说明什么？, 创新与探索,试自行设计实验，证明反射弧有五个部分组成。, 坐骨神经腓肠肌标本的制备,实验目的 实验原理 实验对象与器材 实验步骤 关键技术 注意事项 思考题 创新与探索,实 验 目 的,学习破坏蟾蜍脑和脊髓的方法 熟悉并掌握蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备,蛙类一些基本生命活动和生理功能与恒温动物相似，
12、而其离体组织器官所需的生活条件比较简单，并且易于控制和掌握，因此在生理实验中常用蛙类离体组织器官作为试验标本。蛙类坐骨神经腓肠肌标本是研究神经冲动和肌肉收缩机能等生理实验最常用的实验材料，制备此标本是生理实验的一项基本但又非常重要的操作技术。,实 验 原 理,实验对象与器材,蟾蜍，两栖类手术器械，蛙板，蛙钉，培养皿，滴管，铜锌弓，烧杯，任氏液，纱布，医用缝合线，玻璃分针，污物盘，眼科剪,任氏液配方：NaCl 6.5 g KCl 0.14 gCaCl2 0.12 gNaHCO3 0.2 gNaH2PO4 0.01 gGlc(可不加) 2.0 gH2O 至1000 mL,黑眶蟾蜍,实 验 步 骤,
13、剪去躯干上部及内脏在骶髂关节前1 cm处用金冠剪（粗剪）剪断脊柱（可在下肢前端）。 沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。注意切勿触及或损伤坐骨神经。,实 验 步 骤,剥后肢皮肤左手持镊子夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。将标本放于盛有任氏液的培养皿内，将手和手术器械洗净。分离两腿用金冠剪剪去尾骨杆（骶骨），沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离（切勿伤及神经），将两腿浸于任氏液中。,实 验 步 骤,游离坐骨神经取一后肢，腹面向上（背位），固定
14、于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐一剪去神经分支至股端。用金冠剪剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。将标本改为背面向上（腹位）固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。再沿坐骨神经沟（半膜肌和股二头肌的肌间缝）分离坐骨神经。用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。,实 验 步 骤,游离腓肠肌用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1 cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，
15、提起跟腱，将腓肠肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。这样就制备了一个附着在股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的完整标本。,实 验 步 骤,坐骨神经腓肠肌标本,实 验 步 骤,标本检验左手用镊子轻轻提起结扎神经的线，右手用经任氏液沾湿的锌铜弓短暂轻触坐骨神经，如腓肠肌发生迅速的收缩反应，则表明机能完好。将标本置于任氏液中，稳定其兴奋性1520 min，即可进行实验。,关 键 技 术,双毁髓的方法坐骨神经的剥离技术,注意事项,在制备标本时，避免过度牵拉神经，不可用手或金属器械触碰神经干。 避免动物皮肤分泌物（蟾酥、血液等）污染神经和肌肉，也不要用水冲洗，以免影响组织机能。 制备标本时，要随时用任氏液润湿神经和肌肉，防止干燥。 分离神经时，一定要把周围结缔组织剥离干净。 实验要迅速，以免时间过长影响标本活性（兴奋性）。,思考题,剥制标本时应注意什么？维持离体两栖类动物标本正常生理活性必须满足哪些基本条件？锌铜弓刺激检测标本活性的原理是什么？,创新与探索,你认为该标本的制作方法有哪些需要改进的地方？请说出你的想法。 试想该标本可以进行哪些实验研究？试设计实验内容。 试设计一个新的、更简便的制作坐骨神经腓肠肌标本的方法。 试自行设计制作较长神经干的方法。, 生理记录仪使用培训,Powerlab生物信号采集系统RM6240多道生理信号采集处理系统,
