《技术检测子宫颈上皮细胞hterc基因扩增的临床应用研究课件幻灯》由会员分享，可在线阅读，更多相关《技术检测子宫颈上皮细胞hterc基因扩增的临床应用研究课件幻灯（42页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1,郑州大学一附院 乔玉环,FISH技术检测子宫颈上皮细胞hTERC基因扩增的临床应用研究,2,宫颈癌对中国妇女的高危害度,中国妇女患宫颈癌比例15/10万，是仅次于智利的宫颈癌高发国家 我国目前宫颈癌患者约40万人，每年新增患者15万，居女性生殖道肿瘤首位 我国宫颈癌死亡率为11.34%，居女性癌症死亡率第二位，特别在西部地区，宫颈癌居女性癌症死亡率之首 近年来性传播疾病使其迅速增加(性传播疾病),3,我国宫颈癌治疗现状,缺乏早期干预、阻止发展的有效手段 仍是以手术和放疗为主 不同期别的宫颈癌还没有确立一个规范化的治疗标准,4,看看这些英年早逝的艺人，她们死于宫颈癌,5,卫生部2007年课题
2、 （WKJ2007-3-001）,6,课题负责人：北京大学魏丽惠教授 课题参加单位：全国36家医院 郑州大学第一附属医院首批参加的医院之一，负责人为乔玉环教授,7,宫颈癌仍居女性生殖道恶性肿瘤之首 致病元凶是高危型人乳头瘤病毒（HPV） 从感染高危型HPV至宫颈癌的发生通常需要一个相对较长的时间,研究背景,8,CIN1,CIN2,CIN3,Normal,宫颈癌筛查和预防的前提和基础,9,CIN的转归,？,？,10,2,寻找能预测CIN“逆转”或持续进展为宫颈癌的可靠指标,本领域的研究热点,11,宫颈病变筛查技术 最佳方案,液基细胞学检查（TCT）,宫颈病变 筛查方案,高危型HPV-DNA检测,
3、12,HPV,敏感度高 阳性预测值低，大多HPV阳性患者自然转阴,宫颈病变筛查技术的不足,需要寻找新的有效检测指标或手段,13,人类染色体末端酶（hTERC）基因,1995年由Feng等首次从肾癌293细胞系cDNA文库中筛选出，定位于3q26.3 hTERC基因扩增可使细胞永生化，导致肿瘤产生 宫颈细胞由非典型性增生向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂（3q）的扩增 对宫颈癌染色体不稳定的研究也显示，常见染色体3q的增加，其中，涉及到的最重要的基因hTERC基因,14,hTERC基因扩增是宫颈癌变过程中的早期事件,学者Heselmeyer等首次检测宫颈细胞涂片中的hTERC基因，发现
4、hTERC基因扩增随细胞学病变的严重程度而增加，可作为预测宫颈高度病变的独立指标。 我们研究组的初步研究结果表明，hTERC的扩增率与宫颈病变严重程度密切相关，在宫颈癌筛查中，可弥补TCT和HC2检测HPV DNA的不足 。,cc.ppt,15,资料与方法,16,研究对象,年龄1856岁，平均年龄37.47.3岁,17,研究方法,荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH） GLP TERC/CSP3 探针由北京金菩嘉医疗科技有限公司提供，按探针试剂盒说明进行操作,18,结果分析,hTERC探针：GLP探针，标记红色荧光对照探针：CSP3探针，
5、标记绿色荧光,正常细胞判断： 单个间期细胞红色及绿色信号各2个异常细胞判断： 红色信号大于2个，且绿色信号不少于2个为hTERC基因扩增异常细胞,19,结果判定,阈值建立：采集20例正常宫颈细胞，使用上述方法进行FISH实验，每例至少分析100个细胞，统计出现hTERC基因异常扩增细胞数目的百分比。阈值= 平均数（M）+ 3标准差（SD）本研究阈值为7.1% 阳性结果判定 每例样本随机计数100个细胞，计算其中hTERC基因异常扩增细胞的百分比，如果百分比大于阈值，判定为阳性结果；如果小于阈值，判定为阴性结果；如果等于阈值，加大观测样本细胞数目。,20,统计方法,采用SPSS13.0统计软件包
6、，各组计数资料结果采用2检验及Fisher确切概率法。检验水准=0.05 。,21,结 果,22,一、各组宫颈病变中hTERC基因扩增阳性率比较,23,表1 各组宫颈病变患者宫颈脱落细胞中hTERC基因扩增阳性率比较,24,二、TCT和检测hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的比较,25,组织学确诊为宫颈高度病变73例（17例CIN2，39例CIN3和17例宫颈癌），其中，TCT结果ASCUS者46例，而TCT结果ASCUS者共62例中，有46例患者组织学确诊为宫颈高度病变因此，TCT诊断宫颈高度病变的敏感性为63.01%（46/73），特异性为75.81%（46/62）,TCT,26,73例组
7、织学确诊为宫颈高度病变患者中，宫颈脱落细胞中hTERC基因扩增50例 ，而hTERC基因扩增的58例患者中，50例确诊为宫颈高度病变， 因此，hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的敏感性为68.49%（50/73） ，特异性为86.20%（50/58）。,hTERC基因扩增,27,三、高危型HPV-DNA检测和hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的比较,28,高危型HPV -DNA检测,组织学确诊为宫颈高度病变的73例患者中，高危型HPV DNA阳性患者66例，而HPV DNA阳性者共106例中，有66例患者组织学确诊为宫颈高度病变，因此，高危型HPV -DNA检测诊断宫颈高度病变的敏感性为90.
8、41%（66/73），特异性为62.26%（66/106）。前已述及，hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的敏感性为68.49% ，特异性为86.20%。,图1：慢性宫颈炎细胞hTERC基因的表达，可见2个红色信号红色信号：GLP hTERC；绿色信号：CSP3(FISH法 100倍),图3宫颈癌细胞hTERC基因的异常扩增 可见4个红色信号红色信号：GLP hTERC；绿色信号：CSP3(FISH法 100倍),31,结论,32,国内外学者也取得了相似的结论,33,国外,Heselmeyer Haddad等首次应用FISH技术检测宫颈脱落细胞hTERC基因扩增，发现低度病变（LSIL）中hTE
9、RC阳性率为7%，高度病变（HSIL）为76%，四倍体细胞数和hTERC表达水平随病变的严重程度而增加，认为hTERC检测可作为筛查HSIL的独立指标。对这些病例随访发现，所有进展为CIN3或宫颈癌的CIN1/2患者都伴有hTERC扩增，而自愈的CIN1/2患者没有发现hTERC扩增，表明检测hTERC基因扩增可作为预测病情进展的指标。,Am J Pathol,2003,34,hTERC检测临床意义,正常、ASCUS和CIN1样本很少有TERC拷贝数的增加，63CIN2 和76CIN3样本显示TERC拷贝数增加区分CIN2 和 CIN3 与正常、ASCUS,及 CIN1的灵敏度和特异性超过90
10、%（区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常）伴有hTERC基因扩增的癌前病变的病人有52%96%的恶变可能。 可预测CIN1/CIN2 向CIN3发展的风险因素，其灵敏度是100% ，特异性是70%. FISH是进行宫颈癌筛查，早期诊断和风险预测的有效手段,(AJP April 2005, Vol. 166, No. 4),35,有效进行子宫颈癌前病变的病理分级 国内魏丽惠教授,IGCS2008会议报告，中国医学论坛报报道,hTERC基因,37,专家点评hTERC基因,中华妇产科学会主委郎景和教授认为：在TCT检查和HPV检测筛查宫颈癌的同时，检测hTERC基因扩增，有望成为协助宫颈癌及癌
11、前病变诊断及预测癌前病变是否向宫颈癌进展的重要指标，从而造福广大妇女。2008年，美国安德森癌症研究中心研究表明，hTERC基因扩增与宫颈高度病变和宫颈鳞癌密切相关。,38,CIN的处理 北京大学人民医院 魏丽惠教授,很多学者认为2002年ASCCP方案存在对CIN的过度治疗，近年来大量临床资料证实CIN未经治疗即有较高的自然消退率，CIN 60%-90%在1-2年内逆转，而且癌变的几率极低。因此，对于无症状、细胞学为ASCUS和LSIL，即使转化区不可见，也不用颈管刮宫，也不必锥切或LEEP，建议严格随访。物理治疗并不能避免宫颈发生上皮内瘤变(CIN)或早期癌(ECC)，赵昀等报道的诊断为CIN中，9例曾接受过宫颈物理治疗后宫颈表面光滑，说明物理治疗并不能避免CIN的发生。来自中国妇产科网,阴道镜检查结果满意,CIN的处理,阴道镜不满意的CIN1患者的处理,阴道镜不满意的CIN2患者的处理,42,工作顺利，身体健康！合家幸福！,谢谢！,
