《蛋白质的沉淀与透析ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白质的沉淀与透析ppt课件（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、质的沉淀与透析一、实验目的1.学习量白质沉测和透析的基本原理2掌推蛋白质的可造沉淀及透析的基本操作技术.二、实验原理多数蛇白质是亲水胶体,凡是能破坏水化膜和能中和表面电荷的因素或物质均可导致溶液中的蛋白质发生沉淀。蛋白质的沉淀作用可分为可逆的沉淀作用和不可逆的沉淀作用两种实验原理h坚蕊招罡灾魏.一盎一圭糗区。升程岩址腊-mih“片奂必意于据蝉匹荣人张么亿标能和昧“蝉一杜生-焯恩崴洪宇区区焦民忘医屹沥“蜀春娃匹超粉寸区。zNt耗坂盅一一THF峻不抱-达片献皇洁余亿人技工啸拱四深皎裴余妮镐坂匹兽吴I尿姿.其坤二县p川诚忘堡骆水一史坪刑,弦己焕圭东区乐达|筏炳医二寸腊。锋峡史比坏医岱马.氓嘧.不仪蝉
2、尔心,狒支五吊运超伊拐-丑接蜀谅区运一拓一盎持团裂尿丁长宇诱春工与祝主州许命坚姓标述林心H的一绍三探春L旅怡来悸个厉招丽娆洁牒蛋仲命门阎绍仁匡炳笑怡国伟囚秸&装亿古诊国运区巴心持灯抚HHh蛟长训祖行一工沥唐妮佩志,妍州排二:振符明尺桓,北林英志蜀期抹圭0民灵口挂招意区。宣婧昊蚪名如多兵渡口“擎势酮社春液中的Cr、NH4+。三、器材与试剂1鬟材透析练、大热杯、磁力搅拌器、破子、透析袁夹、试管、浙纸、洙斗、铁架台、演管、小量简2、试剂仪蝴白质-Nac游波取一个鸡蛇的蝎清,加水800ml清合后,加饱和Nac。(2J0%CmAoHNOo渡波JI%CmywAeNo滨波(Jo%CmyoNaoH滨波(6JI
3、0XCm)Cuso,滨液(饱和CNHD:50:澈故0国体CNHO:so口、操作步骤1、蛎白质的检测里刨利用双缉腹反应进行蛋白质的检查。取待渗析的蛇白质-Mac1溶液2a1和10MNa0H溶波lal,搏匀,再加18CuS04溶波12滴,边加边播,观察霆票壹菖红色出现-CuS04不可过量,吾则生成的蓝色Cu(OH2会掩盖2、蚀自质的可送沉淀CD取卵清蛇自-SaC1溶波2al,倾斜试管,治管壁惶慢加入饱和CNHM42S04溶液2nl。轻轻湾匀,静置Sain观寡球蛋白沉测C2)过湍,除去析出的蛇白质沉淀,再向涤液中加入固体CXHM42S504粉未至饱和,观察渊蛎自沉淀3)过湍,除去析半的蛟白层沉流1家
4、滋波宝加人国体GNHM42501猷未至饱和,观察涉蛇白沉淀3、蛋白质的透析(1准备透析袋市售的透析袋有重金属、硫化物等化学杂质,须除去杂质后才能使用,常用的方法是用l0mmol/LNaHCOs-1mmol/LEDTA-Naz溶液煮沸3omin,然后用双熙水充分洗涤透析袋,储存于1mmoLEDTA-Naz溶液中,4摄氏度保存备用。(2)装样取一段透析袋,将其一端用透析袋夹夹住(或打一死结,由开口端加入含清蛋白沉淀的滨液(不可装的太潇,留出一半空隙,并适当排出空气,以防透析袋胀砾,:用透析袋夹夹住袋口(或打一死结。(3)透析【如右图,取一个大烧杯,一蟒加人10褐以上样荣波体“脱缉林晓一一一/积的去
5、离子水或缓冲溶-一一待分离的混合物液,将装好样品的透析A袋悬于大烧杯中部,底/部放一个碟子,用碟力L搅拌器缓慢搅拌以促进伟或稀缓传波)溶液交换,透析过程中町浩标一需番排洗脱游液数次,电技乡30m_n_次)主到透析平衡为正(洗出-曰一个劣衔火(雷)和小(:)分才的泡合物的透析作用液中无c和NH4+),约需2h。浩绍邹闻逊J途根埕医白顶【一莲政J选析表霍和洁枪汝移一怡国(4)检查透析效果每次更换洗脱液时,同时检查洗出液中是否有CI。CL检查方法:取试管一支,加入洗出液约2ml,加10%HNO3溶液1-2滴至酸,然后加1%AgNO32-3滴,观察是否有白色沉淀。五、要点提示1重白质-盐溶液的渗透压与溶液的pH有关。当蛋白质-盐溶液透析时,带电荷的蛋白质分子不能透过半透膜,而溶液中对立的离子可透过半透膜使膜两边的离子产生不均等的分布,引起pH的变化(Donnan效应)。故盐溶蛇白经透析后可能会出现沉淀或变性。2.本实验是用于蛇白质脱盐,若用于浓缩,可将透析袋包埋于吸水性极强的根五一醇或甘泉中进行脱木。作透析洗脱液用的水必须不含cF和NH4+s
