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1、实验二 革兰氏染色及细菌特殊结构观察,2006.03.08,一、实验目的,学习细菌的革兰氏染色原理和方法 了解细菌的特殊形态结构: 芽孢、荚膜、鞭毛,二、实验原理,单染色法:只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况,但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法:用两种或两种以上染色液进行染色,有协助鉴别微生物的作用,故也称鉴别染色法。常用的有: 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。,革兰氏染色,丹麦C.Gram创立,用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构,G肽聚糖层较薄,交联度低,含较多脂质,故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质,增加了细胞的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物
2、易于渗出,经沙黄复染呈红色。G细胞壁结构致密,用脱色剂处理后,肽聚糖层孔径缩小,通透性降低,故细菌仍保留初染时的紫色。,细菌的特殊形态结构,芽孢:休眠体,不利环境下产生,耐受各种极端环境。荚膜:多糖,包裹在菌体外围,保护菌体鞭毛:运动,菌落形态。,三、实验材料,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌(24h培养物)革兰氏染色液一套,四、实验步骤,革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢观察 观看鞭毛、荚膜的示范片 绘图、写实验报告,革兰氏(Gram)染色法,1. 涂片 2. 初染:在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液,染1分钟,倾去染液,流水冲洗至无紫色。 3. 媒染:先用新配的路哥氏碘液冲去残水,而后用其覆盖涂面1分钟,后水洗。 4. 脱色:除去残水后,滴加95%酒精进行脱色约1520秒,后立即用流水冲洗。 5. 复染:滴加番红染色液,染35分钟,水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检:观察染色结果并绘图。,枯草杆菌芽孢的观察,细菌鞭毛的观察,细菌荚膜的观察,五、实验结果,记录所观察到的三种菌革兰氏染色结果的差别记录枯草杆菌Gram染色结果,并判断是阳性还是阴性,六、问题与讨论,要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作?哪一步是关键?为什么?,