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1、l学科分类号： 湖南人文科技学院湖南人文科技学院本科生毕业论文题 目(中文)：不同浸种时间处理对湘棱豆种子萌发的影响(英文)：Effect on Germination of Xiang Leng Dou with Different Soaking Time Treatment姓 名： 学号 09437227 系 部： 生命科学系 专业年级： 生物技术 09 级 指导教师： 职 称： 副教授 湖南人文科技学院教务处制目录摘 要1 关键词.1 Abstract.1 Key words1 1.前言.2 1.1 课题研究背景.2 1.2 研究的目的及意义.3 2供试材料与方法4 2.1 供试材料
2、4 2.2 所需仪器及试剂 4 2.3 研究内容与方法 4 2.3.1 种子发芽率测定.4 2.3.2 酶活性测定.5 3结果与分析6 3.1 不同浸种时间下湘棱豆种子的发芽率比较 .6 3.2 不同浸种时间处理湘棱豆种子其保护酶活性比较 .7 3.3 湘棱豆种子保护酶与发芽率的关系 .7 3.3.1 湘棱豆种子 POD 活性与发芽率的关系 .7 3.3.2 湘棱豆种子 CAI 活性与发芽率的关系 .8 3.3.3 湘棱豆种子 SOD 活性与发芽率的关系 .8 4结论与讨论9 参考文献10 致 谢.11 诚信声明12湖南人文科技学院毕业论文1不同浸种时间处理对湘棱豆种子萌发的影响不同浸种时间处
3、理对湘棱豆种子萌发的影响摘摘 要：要：以湘棱豆种子为供试材料，分别用 8h、16h、24h的不同浸种时间对种子进行处理，测定各处理后的发芽率并分别测定不同浸种时间处理下湘棱豆种子的POD、CAT、SOD的酶活性，以探讨两者的相关性。结果显示，湘棱豆种子的POD、CAT、SOD 的酶活性与发芽率均随浸种时间的不同而发生改变，浸种时间过长或过短都会降低种子的发芽率。萌发期间POD、CAT 、SOD三种抗氧化酶的含量也随之发了变化。此研究表明了湘棱豆种子生命力的活性程度与POD、CAT 、SOD三种抗氧化酶活性有关。关键词关键词：湘棱豆; 种子萌发; 过氧化氢酶; 过氧化物酶; 过氧化物歧化酶;发芽
4、率Effect on the Germination of Winged bean Seeds with Different Soaking Time TreatmentAbstract:Abstract: The winged bean seeds as the tested material, respectively, on the seeds were treated with 8h, 16h, 24h different soaking time, germination rate and enzyme activity of different soaking time treat
5、ment of winged bean seed Hunan POD, CAT, SOD were measured after each treatment, to investigate the relationship between. The results show, the enzyme activity of winged bean seed Hunan POD, CAT, SOD and germination rate increased with the soaking time had changed, too long soaking time or too short
6、 will reduce the germination rate of seeds. During germination of POD, CAT, SOD three kinds of antioxidant content also made changes. This study shows that the degree of activity of winged bean seed vitality of Hunan and POD, CAT, SOD three kinds of antioxidant enzymes activity.Keywords: The winged
7、bean; seed germination; catalase; peroxidase; superoxidedismutase; germination rate湖南人文科技学院毕业论文21 前言前言1.11.1 课题研究背景课题研究背景湘棱豆，又名翼豆，是豆科蝶形花亚科，菜豆族，四棱豆属，广泛的分布在加纳、尼日利亚、斯里兰卡、印度尼西亚、马来西亚、巴布亚新几内亚、菲律宾等非洲及东南亚国家，种植历史悠久。湘棱豆可全身利用，其块茎可加工成食用粉，其质量比面粉优；种子可用以提取食用油、种子粉及相关蛋白质制品；花可用油煎食，其味鲜美同蘑菇；嫩叶可制成凉拌菜或汤，食味如菠菜；茎叶和荚壳则可作为优质
8、饲料和绿肥，具有较大的经济价值1 。我国栽培湘棱豆主要以多年生的印尼品系为主，台湾、海南、广东、广西、云南、湖南、安徽等地都已试种成功，现已向全国范围内推广2。湘棱豆蛋白质含量高，氨基酸种类丰富，富含不饱和脂肪酸，素有“金色豆子”美誉，其营养价值可与大豆相媲美。此外，湘棱豆含有黄酮、卵磷脂、硒等活性成分，有一定的药用价值，具有防衰老、抗癌、降血压、补血、明目及清热解毒等多项功效。因此，备受各国科学家的关注3。湘棱豆营养丰富，开发前景广阔。但是，现在国内外关于对湘棱豆的研究报道并不多，国内对湘棱豆的研究主要集中在引种栽培、农艺性状、营养素含量测定及加工特性上1。国外学者则把焦点聚集在湘棱豆的抗营
9、养因子的研究上4。近几年来，湘棱豆逐渐走入普通消费市场，备受人们亲睐，成为蔬菜大家族中的新宠。因为湘棱豆对冠心病、动脉硬化、脑血管硬化、习惯性流产、口腔炎症、 ，泌尿系统炎症、眼疾等19种疾病均有良好的疗效。因此，有人称湘棱豆为二十一世纪健康食品、奇迹植物。湘棱豆富含维生素及多种营养元素，具有降压、美容、助消化等食用和药用价值，效果超出其他豆类，被誉为豆中之王5。近几十年来，美国、印度等70多个国家，对湘棱豆非常重视，并建立了专门的科研机构，召开了与之相关的国际性学术会议。在我国，湘棱豆亦被认为是营养价值高、用途广的蔬菜，很有发展前途，国内已数次组织人力在中国南方大量推广栽培，只要坚持不懈，在
10、南方大量发展是顺理成章的事，但目前发展面积并不像人们预期的那样。这可能与湘棱豆的食用习惯不普遍，其用途未充分开发出来有关6。湖南人文科技学院毕业论文3湘棱豆种子发芽是湘棱豆生长发育的起点，较高的发芽势和发芽率是培育壮秧的基础，直接关系到湘棱豆的产量，同时种子的发芽势和发芽率也是检测种子质量好坏的重要指标5。大量研究表明浸种时间过短或过长均不利于种子发芽6。浸种时间过短，种子吸水不足，种胚内部的蛋白质、酶等大分子和细胞器活化慢，种子萌动受到影响，因而不利于发芽；浸种时间过长，种子的无氧发酵现象比较严重，造成种子出苗率偏低7。种子吸水的过程同时也是内含物外渗的过程。随着浸种时间的延长,种子的内含物
11、外渗量增加, 而且浸种时间越长, 物质外渗量越多。一般学者8认为, 与种子萌发有关的酶为SOD、POD、CAT 等保护酶。它们在清除活性氧、保持细胞膜稳定性方面起着重要的作用。能将逆境下形成的一些有毒物质氧化成无毒物质,从而在种子萌发过程中起到保护的作用。据相关研究表明，萌发率越高，种子中的酶活性也越高9。通过对相关文献资料的收集研究，近年来，四棱豆的资源开发、生理特征、营养价值、药用功能10研究等方面已有相关的报道。但是关于影响四棱豆种子萌发的因素如温度，盐度的研究却相当的少，尤其是不同浸种时间处理对四棱豆种子萌发的影响，及其萌发过程中过氧化物酶含量的变化还待进一步研究。通过对相关文献资料的
12、收集发现，近年来，湘棱豆的资源开发、生理特征、营养价值、药用功能研究等方面已有相关的报道13。1.2研究的目的及意义研究的目的及意义综上所述湘棱豆值得大力推广栽培，开发利用可是湘棱豆种子的发芽率低是限制其栽培利用的一个瓶颈。目前关于影响湘棱豆种子萌发的因素的研究却相当的少，尤其是不同浸种时间处理对湘棱豆种子萌发的影响，及其萌发过程中过氧化物酶含量的变化还待进一步研究。因此本选题以四棱豆新品种湘棱豆为实验供试材料，以不同浸种时间对湘棱豆种子进行处理，通过测定湘棱豆种子的萌发率及种子萌发过程中酶活性的动态变化，以探明影响湘棱豆种子萌发的主要因素，从而达到为人工大量栽培湘棱豆提供理论指导和参考价值的
13、目的。湖南人文科技学院毕业论文42 2 供试供试材料与方法材料与方法2 2. .1 1 供试材料供试材料 湘棱豆种子材料从怀化学院购买2 2. .2 2 所需仪器及试剂所需仪器及试剂（1 1） 仪器仪器SP723型分光光度计，冷冻离心机等（2 2）试剂）试剂 磷酸缓冲液、130 molL-1的甲硫氨酸、750 molL-1 氮蓝四唑溶液、100 molL-1EDTA-Na2溶液、20 u molL-1核黄素溶液、蒸馏水。30%H2O2、愈创木酚等溶液由湖南人文科技学院生命科学系购买。2. .3 研究内容与方法研究内容与方法2 2. .3.13.1 种子发芽率的测定种子发芽率的测定取一定数量的湘
14、棱豆种子，选取粒大饱满大小色泽一致的种子，先用75%的酒精对其进行表面消毒后将其随机分为三组置于三个锥形瓶中，每组数量相同，放在恒温水浴锅中用25恒温进行浸种，浸种时间分别为8小时、16小时、24小时。浸种完成后将种子置于铺有双层湿润滤纸的培养皿中，每个培养皿内100粒。运用恒温培养箱对种子进行温度的调控。每一组设置三个重复试验。培养期间根据情况对各培养皿补充蒸馏水，以此保持各测试梯度的相对稳定，每天需做到定时观察、补水，记录各组种子的发芽数，并测量种子萌发的长度。以胚根突出种皮的长度为种子一半时为作为种子发芽的标准，当连续 5d 内不发芽作为发芽结束期。在实验过程中要及时的挑出发霉的种子，所
15、使用的培养皿、烧杯等均要以蒸汽干热法进行消毒，以防止其他因素影响实验结果。发芽率测定：方法参照赵云雨14指种子在发芽实验期内，正常发芽种子数占供试种子数的百分比。即，发芽率湖南人文科技学院毕业论文5Gp（%）=（m/N）100% (m 是全部正常发芽种子数，N 是供试种子总数)根据每天的发芽记录以计算不同浸种时间下种子的发芽率。分析浸种时间对种子萌发的影响。2 2. .3.23.2 酶活性测定酶活性测定（1）粗酶提取液的制备：待培养皿中湘棱豆种子胚根长到1cm 左右时, 分别从3个浸种时间处理的种子中随机选择萌发种子,取样后立即混合切碎, 称取0.1 g 放置到研钵中,加入10 mL 0.05
16、 molL-1磷酸缓冲液( pH7.8) ，冰浴研磨1525s，于10000 rpm冷冻离心15 min，将悬浮液用一次性医用针筒吸出置于试管中，所获溶液即为粗酶提取液。（2）POD 活性的测定：方法参照李合生15 反应混合液液为100 mL 0.1 molL-1磷酸缓冲液( pH6.0) + 1 mL 30% H2O2 + 0.05 mL愈创木酚，测定时取酶液0.05 mL加3 mL反应液，混合后摇匀，立即在SP723型分光光度计下测定OD407值，每min读数1 次，共读5次，取反应呈线性部分的数值计算每分钟内的OD 值的变化，酶活性单位用(u/gFW/min) 表示。（3）CAT 活性的测定:方法参照李合生15反应液混合液为2 mL0
