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1、高效液相色谱法,魏岩,Free powerpoint template: ,2,HPLC,定义：以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。,Free powerpoint template: ,3,HPLC,不得改变：固定相种类、流动性组分、检测器类型； 可以改变：色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度。,Free powerpoint template: ,4,1.对仪器的一般要求,色谱柱 十八烷基硅
2、烷键合硅胶（ODS）最为常用；填充剂粒径310m；温度通常不超过40；流动相的pH控制在28之间；,Free powerpoint template: ,5,检测器 选择性检测器：紫外光度检测器、荧光检测器、 电导检测器； 通用型检测器：蒸发光散射检测器、差示折光 检测器； 光电二极管阵列检测器不同的检测器对流动相的要求不同。,Free powerpoint template: ,6,流动相 反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统（采用紫外末端波长检测时，首选乙腈-水系统） 尽可能不用或少用含较低浓度缓冲液的流动相； 流动相中有机相的比例通常应不低于5%；,Free powerpoint tem
3、plate: ,7,2.系统适用性试验,用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当的调整，以符合要求。,Free powerpoint template: ,8,色谱柱的理论板数（n） 用于评价色谱柱的分离效能； 试验方法：在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t(R)和半高峰宽W(h/2)，按计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。,Free powerpo
4、int template: ,9,色谱峰的分离度（R） 用于评价待测组分与相邻共存物或分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。 分离度(R)的计算公式为：式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。,Free powerpoint template: ,10,色谱系统的重复性（RSD%） 用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。 采用内标法时，通常配制相当于80%、100%和120%的对照
5、品溶液，加入规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大于2.0%。,Free powerpoint template: ,11,采用外标法时，通常取个品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差不大于2.0%,Free powerpoint template: ,12,色谱峰的拖尾因子（T） 用于评价色谱峰的对称性； 为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子(T)是否符合各品种项下的规定或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。式中 W(0.05h)为0.05峰高处的峰宽； d1为峰
6、极大至峰前沿之间的距离。 除另有规定外,T应在0.951.05间。,Free powerpoint template: ,13,3.测定法,定量测定时，可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标法测定杂质总量时，须采用峰面积法。 内标法 测定供试品中杂质的总量限度 采用不加校正因子的峰面积法：取供试品，按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图；再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注样，记录色谱图。记录的时间除另有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保留时间的倍数，色谱图上内标峰高应为记录仪满标度的30%以上，否则应调整注样量或检测器灵敏度
7、。,Free powerpoint template: ,14,加校正因子测定供试品主成分含量： 各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：As/ms校正因子f=- Ar/mr （式中 As为内标物质的峰面积或峰高,Ar为对照品的峰面积或峰高； ms为加入内标物质的量mr为加入对照品的量） 再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品（或其杂质）峰和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：Ax 含量(mx)=f-A
8、s/ms （Ax为供试品（或其杂质）峰面积或峰高； mx为供试品（或其杂质）的量 ）,Free powerpoint template: ,15,外标法 测定供试品中含量 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：A 含量(mx)=mr-Ar 由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环或自动进样器进样为好。,Free powerpoint template: ,16,Free powerpoint template: ,17,谢谢观看！,
