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1、血栓与止血检验,临床血液学教研室,第一节 血栓与止血的筛选检验,一、一期止血缺陷的筛选检验 二、二期止血缺陷的筛选检验 三、纤溶活性增强的的筛选检验 四、 抗凝物质检验,出血时间测定血小板计数束臂试验（毛细血管脆性实验）血块收缩试验 毛细血管抵抗力试验,第一节 一期止血筛查试验,出血时间测定(bleeding time，BT),一、原理：测定在皮肤受特定条件外伤后，出血自然停止所需的时间即为出血时间。此过程反映了毛细血管与血小板的相互作 用，包括内皮下组织与血小板粘附（通过vWF 的作用）、血小板的聚集和释放等反应，以 及PGI2与TXA2的动态平衡。,二、方法 Duke法、 Ivy法、出血时
2、间测定器法（TBT法） （卫生部推荐方法） 三、试剂与器材：1、血压计，秒表，干净滤纸2、出血时间测定器,四、操作： 1、血压计袖带缚于测定上肢的上臂，加压并维持在40mmHg,儿童减半。2、在肘前窝下5cm处的尺侧做局部消毒后，将测定器垂 直贴于皮肤表面，按下按钮，同时启动秒表，移开测 定器。3、每隔30s,用干净滤纸吸去流出的血液，直至流血自然停止，并记录秒表读数。,五、参考值 ： 2.3-9.5 min 六、临床意义：延长：1、 血小板数量异常，如ITP、TTP2、血小板功能异常，如plt无力症、巨大plt综合征、储存池病3、 血管壁异常血管性血友病、遗传性毛细血管扩张症4、某些严重的凝
3、血因子缺乏缩短：高凝状态和血栓性疾病,七、质量控制1、注意影响BT测定的因素2、滤纸吸去血液时，避免与伤口接触3、注意药物的影响（抗凝剂、Apc）,血小板检验,一、血小板计数 二、血小板生存时间检测 三、血小板相关抗体检测 四、血小板粘附试验 五、血小板聚集试验 六、血小板第3因子有效性检测 七、血小板膜糖蛋白检测 八、血小板活化指标检测（血浆-TG、PF4、血 小板P选择素检测）,正常值：（100300）109/L,危险,血 小 板 粘 附 试 验 ( platelet adhension test,PAdT),原理：受检者血液一定速度通过一定量玻璃珠的塑料管，测定通过玻璃珠前后血液中血小板
4、数的差值，即为粘附于玻珠和塑料管的血小板数，由此可计算出其占血小板总数的百分比，即为血小板粘附率。 方法：玻球法、玻璃滤器法、玻珠法,临床意义：血管性血友病、巨大血小板综合症、血小板无力症、肝硬化、MDS、急性白血病、服用抗血小板药物等血栓前状态和血栓性疾病、妊高症、口服避孕药等,粘附率减低,粘附率增高,诱聚剂,PPP,PRP,血 小 板 聚 集 试 验 platelet aggregation tset，PAgT,比浊法：以PPP设最低浊度，PRP设最高浊度，在血浆中加入诱聚剂，测定血浆浊度的变化，绘制血小板聚集曲线。,临床意义：血小板无力症、血管性血友病、巨大血小板综合症、血小板贮存池病、
5、低（无）纤维蛋白原血症、肝硬化、使用血小板抑制剂等。高凝状态、血栓形成性疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、口服避孕药、人工瓣膜移植术后、吸烟等。,聚集率减低,聚集率增高,质量控制： 1.采血要顺利，避免组织液混入，抗凝剂使用合理（不用EDTA抗凝）2.采集后3h内室温下完成3.试验前十天停用一切抑制血小板聚集的药物；试验前禁食高脂类食物4.注意 PRP：1000r/min离心10minPLT(100300)109/LPPP ：3000r/min离心20minPLT20109/L,全血凝固时间测定（CT）活化部分凝血活酶时间测定（APTT）血浆凝血酶原时间测定（PT）,第二节 二期止血缺陷筛查检验,全
6、血凝 固时间测定(coagulation time, CT),原理 观察血液自离体后，到玻璃试管中凝固所需时间,血液,从血管中 抽出,与带负电荷表面接触,内源性凝血途径启动,纤维蛋白形成（血液凝固）,XII XIIa,临床意义1. 因子VIII、IX、XI活性减低；严重的因子、和纤维蛋白原缺乏2. 原发性纤溶亢进；血循环中存在抗凝物质高凝状态和血栓性疾病,CT延长,CT缩短,肝素治疗用量检测指标,活 化 部 分 凝 血 活 酶 时 间 测 定 (activated partial thromboplastin time，APTT),一、原理,APTT,Ca2+ 脑磷脂,白陶土,Ca2+ 脑磷脂
7、,部分凝血活酶,二、操作（一）APTT手工法(试管法）血浆0.1mlAPTT试剂各0.1ml +CaCl20.1ml （混匀计时）结果观察：缓慢倾斜试管，观察液体流动状态，流动 停止停止计时参考值 2545s(二）仪器法,37温浴,APTT,延长,缩短,因子VIII、IX、XI活性减低,高凝状态,三、临床意义,肝素抗凝监测,APTT纠正试验,于患者血浆中分别加入1/4 的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆、正常血清，再作APTT试验。硫酸钡吸附血浆 VIII、XI、XII （不含IX）正常血清 IX、XI、XII（不含VIII）新鲜血浆 VIII、IX、XI、XII,血友病甲,血友病乙,F缺乏,正常
8、血浆,硫酸钡吸附血浆（缺）,正常血清(缺),APTT纠正试验-血友病,纠正,不纠正,纠正,纠正,纠正,纠正,不纠正,患者血浆,纠正,纠正,凝血酶原时间测定 Prothrombin time ，PT 一、原理,Ca2+ 脑磷脂,PT,组织因子,Ca2+ 脑磷脂,二、报告方式1. 直接报告患者及正常对照的PT秒数2. 报告凝血酶原时间比值（PTR）PTR=受检者PT（秒）/正常对照PT（秒）3. 报告国际标准化比值（INR） INR=PTRISI,组织凝血活酶的国际敏感指数（internation sensetivity index,ISI）是用组织凝血活酶试剂与ISI已知的国际参比品或经其标定过
9、的参比品之间敏感度相比较的一个参数。测定方法：用多份凝血因子水平不同的血浆（包括正常人和口服抗凝剂患者的血浆），用参比品测得它们的PT的对数（lgPT），再用待标定的组织凝血活酶测得它们的lgPT，以前者为纵坐标，后者为横坐标作图，经回归求得直线斜率。待标定的组织凝血活酶的ISI=已知的ISI斜率,PT,延长,缩短,因子VII、 II、V、X、Fg活性减低,高凝状态,三、临床意义,口服双香豆素类抗凝药物监测,要保证止凝血检验的质量 必须做好以下十点：,1. 采血须顺利，尽量用大号针头，动作要轻柔； 2. 标本用加盖有刻度标记的塑料试管或硅化管收 集 ； 3. 抗凝剂用109mmol/L的枸橼酸
10、钠，抗凝剂与血液的比例为1:9。,当Hct 增高55% 或40mg/L，见于原发性纤溶症、DIC、M3、应用链激酶等溶栓治疗时。,血浆D-二聚体测定,一、原理：1. 胶乳凝集法2. ELISA法 二、参考值：0.5mg/L有临床意义 三、临床意义：1. DIC时呈阳性或明显增高，另见深静脉血栓、心梗、肺栓塞、重症肝炎等2. 可作为原发纤溶和继发纤溶鉴别的重要依据。,血浆硫酸鱼精蛋白副凝试验 （plasma protamine paracoagulation test, 3P）,结果判断 阴性,血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验 plasma protamin parcoagulation test，3
11、P,四、临床意义1. 阴性 正常或DIC晚期，原发纤溶 2. 阳性 含细颗粒沉淀，粗颗粒沉淀、纤维蛋白丝网或胶冻样物质，见于DIC早期，中期，静脉血栓、严重创伤，大手术，及久置冰箱的标本,生理性抗凝蛋白检验：,一、抗凝血酶检测1、血浆抗凝血酶活性检测2、血浆抗凝血酶抗原检测 二、蛋白C检测1、血浆蛋白C活性检测2、血浆蛋白C抗原检测 三、血浆蛋白S抗原检测 四、组织因子途径抑制物检测,第四节 抗凝物质检验,病理性抗凝物质检验：,一、复钙交叉试验 二 、凝血酶时间检测及甲苯胺蓝纠正试验 三、普通肝素和低相对分子质量肝素检测 四、凝血因子抑制物检测 五、狼疮抗凝物质的筛选试验和确诊试验,凝血酶时间测定及甲苯胺蓝纠正试验 thrombin time,TT 一、原理:,凝血酶,TT,二、结果判断：正常人凝血酶时间一般在16-18s，超过正常对照3s以上视为延长；如正常对照在20s以上，则超过5s为延长。加甲苯胺蓝后TT明显缩短，与未加甲苯胺蓝的TT比较相差5s以上，视为纠正。,TT延长,血浆抗凝物质增多,纤维蛋白原异常,甲苯胺蓝能纠正,甲苯胺蓝不能纠正,链激酶、尿激酶溶栓治疗监测指标,纤维蛋白原异常,高纤维蛋白原血症为心脑血管血栓形成的独立危险因素。,量,增高,严重肝病 营养不良 DIC,减低,老年人、慢性感染 肿瘤、应激、 口服避孕药期间等,
