微生物、卫生培训

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1、微生物、卫生培训,第一章 微生物概述,一. 什么是微生物 微生物是一类肉眼不能直接看见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物的总称。 二. 微生物的分类： 根据微生物有无细胞基本结构、分化程度、化学组成等特点，可分为三大类。 1. 非细胞型微生物 2. 原核细胞型微生物 这类微生物包括细菌、衣原体、支原体、立克次体、 螺旋体和放线菌。* 3. 真核细胞型微生物 如真菌、藻类等。,三. 微生物的作用及危害 1. 微生物的作用 绝大多数微生物对人和动物是有益的，例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等都是由微生物发酵生产的。 2. 微生物的

2、危害 微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。 从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。,第二章 微生物的类群和形态结构,一. 细菌 在夏天，固体食品表面时而会出现一些水珠状、鼻涕状、浆糊状等彩色多样的小突起，这就是细菌，在液体中出现浑浊、沉淀或液面漂浮“白花”并伴有小气泡冒出，也说明其中可能有大量细菌。 1. 细菌的形态与结构观察细菌最常用的仪器是光学显微镜，其大小一般以微米为单位。细菌按其

3、形态不同，主要分为球菌、杆菌和螺形菌三类。 （1） 球菌 分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。 （2） 杆菌 分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。 （3） 螺形菌 如幽门螺杆菌。,细菌菌形态,螺旋菌 针尖上的细菌,2. 细菌的繁殖 细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度计算，一个细菌一昼夜可产生41020个。 3. 细菌的菌落 单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。一般以CFU为单位。 细菌生长的最适的温度为2045，* 细菌生长最适宜的PH值是 PH7.0-7.6 *,细菌菌落形态,二. 真菌 真菌是一类有细胞壁，

4、无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞。 真菌生长的最适的温度为2228，最适的pH值为46。真菌对热的抵抗力不强，一般加热6070 1小时即被杀死，但对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，但对2.5碘酒、10甲醛则较敏感。,1. 霉菌 霉菌是丝状真菌的俗称，意即“发霉的真菌，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。 （1）霉菌的形态、大小和结构 构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。它的直径一般为3-10微米，比细菌的细胞约粗几倍到几十倍。 （2）霉菌的繁殖 霉菌有着极强的繁殖能力，这些特点有助于霉菌在自然界中随处散播和繁殖。不利之处则是易于造

5、成污染、霉变和易于传播动植物的霉菌病害。,（3）霉菌的菌落见下图,2. 酵母菌 酵母菌在自然界中分布很广，尤其喜欢在偏酸性且含糖较多的环境中生长，例如，在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果园土壤中最为常见。 （1）酵母菌的形态、大小和结构 酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米5-30微米。 酵母菌具有典型的真核细胞结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等。*,酵母菌形状,（2）酵母菌的繁殖 酵母菌有多种繁殖方式，包括无性繁殖和有性繁殖。 （3）酵母菌的菌落 大多数酵母菌的菌落特征与细

6、菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。,酵母菌菌落,三. 病毒,病毒属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒是体积最小、结构最简单的微生物，它仅有一种核酸（DNA或RNA）作其遗传物质。病毒必须在宿主活细胞内寄生，依靠细胞提供的能量、营养物质及生物大分子合成机制，完成病毒的复制过程。 病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病约75是由病毒引起的。有些病毒传染性强，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。,第三章 微生物的营养,一.

7、 微生物的营养要求 微生物生长繁殖所需的主要营养物质主要有水、碳源等。 1. 水 水是各种生物细胞必需的。水是良好的溶剂，微生物的新陈代谢过程中的一切生化反应都离不开水的作用。 2. 碳源 碳源是合成菌体成分的原料，也是微生物获取能量的主要来源，糖类是最广泛利用的碳源。药品生产中用到的辅料、中药材是很大的碳源。因此成为微生物的营养来源，也因此容易受到微生物的污染。,第四章 消毒与灭菌,下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度。 消毒：杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死含细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢

8、在内的全部病原微生物和非病原微生物。,抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。,消毒与灭菌的方法一般可分为物理学方法和化学方法两大类。* 一. 物理消毒灭菌法 用于消毒灭菌的物理因素有热力、辐射、过滤等。,1. 热力灭菌法 高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活，对细菌具有明显的致死作用，因此最常用于消毒与灭菌。多数无芽孢的细菌经5560作用3060分钟后死亡。经80湿热510分钟可杀死所有细菌繁殖体、真菌和酵母菌。细菌芽孢对高温有很

9、强的抵抗力，例如炭疽芽孢杆菌的芽孢，耐受515分钟的煮沸，而肉毒梭菌的芽孢则需煮沸35小时才死亡。低温通常起抑菌作用。 热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大类，相同温度下，后者的灭菌效力比前者大。,干热灭菌法: a.灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。 b.干热空气灭菌法：这是化验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160C，恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。,干热灭菌设备,湿热灭菌法本法系指物质在灭菌器内利用高压蒸汽或其他热力

10、学灭菌手段杀灭细菌，灭菌能力甚强，为热力学灭菌中最有效及用途最广的方法。药品、药品的溶液、玻璃器械、培养基、无菌衣、敷料以及其他遇高温与湿热不发生变化或损坏的物质，均可用本法灭菌。,湿热灭菌设备,2. 辐射灭菌法 （1）紫外线杀菌的最佳波长为253.7 nm左右，作用于DNA，使细菌DNA的复制和转录受到干扰，导致细菌变异或死亡。常用于室内的空气消毒。 （2）电离辐射 对各种细菌均有致死作用。常用于大量一次性医用塑料制品的消毒和食品的消毒。,紫外灯,3. 滤过除菌法 用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的。 滤菌器含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体通过,而大于孔径的细

11、菌等颗粒不能通过 。 适用范围：血清、毒素、抗生素、注射剂以及空气等的除菌。,二. 化学消毒灭菌法 一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以是起消毒剂的作用，而不是灭菌剂。 能迅速杀灭病原微生物的药物，称为消毒剂。能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物，称为防腐剂。但是一种化学药物是杀菌还是抑菌，常不易严格区分。消毒剂在低浓度时也能杀菌（如1：1000硫柳汞）。由于消毒防腐剂没有选择性，因此对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以只能用于体表、器械、排泄物和周围环境的消毒。常用的化学消毒剂有：石碳酸、来苏水（甲醛溶液）、氯化汞、

12、碘酒、乙醇等。*,乙醇杀菌作用的机制 （1） 乙醇有很强的脱水性，易改变细胞膜的渗透性，损伤细胞壁，也能侵入蛋白质结构，使菌体蛋白质变性，致细胞死亡。（2） 乙醇杀菌作用以70%浓度为最好，因为高浓度会使细胞脱水，表面形成硬膜，乙醇透入受阻，所以杀菌不如70%浓度效果好。因此，一般选用70%75%做为消毒剂。,本公司所使用的清洁剂、消毒剂,第五章 GMP与微生物、卫生,一. 药品生产中微生物的生态学分布 在药品生产中，由于受到各种要素（制药厂房环境的空气、制药用水、操作人员、物料、设备等）的影响，都可能导致药品的微生物污染。因此，GMP对各种要素都提出了防止污染的基本要求。中国药典微生物限度检

13、查法规定的检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数和控制菌检查。,1. 空气中的微生物 空气本身并不产生污染，因为空气不含必要的水分和营养，不是适合微生物生长繁殖的天然环境，但是一般的大气环境仍含有不少的细菌、霉菌和酵母菌。 空气中的微生物来自灰尘微粒（自然因素如风，人为因素如车），来自人的皮肤与衣服，以及谈话、咳嗽、走动、打喷嚏等造成的飞沫。空气中微生物数量取决于灰尘量和活动状况，例如，有活跃人群的地方微生物多，不清洁的房间比清洁的房间多，潮湿的地方比干燥的地方多。因此，空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。因此保持空气洁净是极为重要的。,细菌的污染,净化措施,在药品生产中，减少空气中微生物数量

14、的方法有多种，常用的有以下3种方法： 空气洁净技术采用的过滤方法 过滤是最常用的方法。过滤介质种类很多，例如：纤维素、玻璃棉或人造纤维等。空气净化装置可用于整个房间如无菌操作室，也可只限于操作区域局部如超净工作台。通过送风增加室内压力，使室内压力高于室外，从而避免室外空气对室内的污染。,洁净区使用的净化设施,送、回风口 洁净窗 彩钢板初效过滤器 中效过滤器 高效过滤器,净化设施,传递窗 防污染地漏,监测污染的手段,压差计 尘埃粒子计数器, 化学消毒方法 采用消毒剂作用于室内空气和物体表面。 紫外线照射方法 采用紫外线对室内空气进行照射。,2. 制药用水中的微生物 在生产过程中，水是应用最广泛的

15、原料之一。从理论上来讲，微生物在纯水中是不能生长的。但是，所有的各类水不管怎样仔细蒸溜或过滤，总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质被微生物利用作为它们生长的养料源泉。 工艺用水在制药企业防止污染及作为制药用水方面至关重要。因为它不仅直接用于产品的生产，而且也用于清洗设备和用于冷却。药品微生物污染的关键环节在于工艺用水，因为水是微生物生长代谢的一个必要成分。中国药典收载了纯化水和注射用水的质量标准。,常用的对水消毒的方法，与空气消毒的方法一样，也是化学消毒剂、过滤与紫外线照射3种。 化学消毒剂方法 对水的消毒以化学消毒剂方法较常用，效果也最好。常使用次氯酸钠或通氯气。在使用中

16、，应注意到水系统中不能留有消毒不到的“死角”。 膜过滤法 适用于水系统的连续循环处理。 紫外线照射法 在水系统中应用紫外线照射消毒，适用于需要特殊处理的水（如光学透明度要求高），一般在末端之前。这种方法因处理过的水无臭无味，而优于化学消毒剂方法；因不产生微生物移居滤器的现象，而优于膜滤器。 在水系统中，这3种方法综合应用，设计安装在适当的位置。,3. 厂房建筑与设备表面的微生物 厂房建筑物的内表面，以及设备表面、容器内外表面等，都可以是微生物寄生存的地方。由于空气中的湿度，所有表面都包上一层含水的薄膜。这层薄膜由于静电吸引而饱含尘埃微粒，有很多时候，表面还覆盖一层油状物质，此层油膜易受到尘粒污染。表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。 请记住：一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。,