纳豆激酶活性测定

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1、纳豆激酶检测方法目前行业内流行的纳豆激酶检测大致有三种方法,其原理、利弊简介如下:一、 IU 纤维蛋白平板法:以尿激酶为对照, 与纳豆激酶样品同时在纤维蛋白平板特定条件下所形成水解圈,测量各自水解圈直径, 通过计算取得相应纳豆激酶活力。由于对水解圈直径的认定的认定存在经验人员视觉差异,导致测定粗放,数据波动性强,重复性差,不具权威依据。二、 FU 紫外分光法:纳豆激酶与纤维蛋白在一定条件下作用会产生可溶性低分子物质,通过紫外分光技术检测其浓度, 通过计算取得相应纳豆激酶活力,数据稳定,重复性强。测定硬件条件苛刻, 测定成本高,不具权威性依据。三、 U 中性蛋白酶法:纳豆激酶与酪蛋白在一定条件下

2、作用会产生可溶性低分子物质,通过普通比色计检测其浓度,计算取得相应纳豆激酶活力,数据稳定,重复性强。测定简单,检测成本低,有国家标准为依据。1)琼脂糖一纤维蛋白平板法是,是目前最常用的纤溶酶溶栓活力测定方法,此法的原理是用琼脂糖作为固体支持,以凝血酶和纤维蛋白原制做人工血栓平板,注入NK ,用溶解圈垂直直径的乘积(mm2) 表示纤溶活力,以标准UK 或纤溶酶为标准品作标准曲线,计算出 NK 的活性相当于标准品的单位数。此法简便易行,并可同时测定多个样品,但由于溶解圈面积受恒温反应时间的影响很大,所以对恒温时间的控制十分重要,且恒温时间对粗制酶活性测定的影响比对NK 精制产品活性测定的影响大。2)在直径 15mm 的硅化试管中依次加入 pH值为7.7的咪唑缓冲液、 纳豆激酶收集液、凝血酶和纤维蛋白原, 立即振摇数秒,使之产生絮状物,置38水浴 30 min ,置冰水中终止反应。用 100目尼龙网过滤试管中未溶解的纤维蛋白,滤纸吸干,用蒸馏水漂洗,再用滤纸吸干,放入小试管中,再加3mL 浓度为O 2 mol/L 的NaOH 溶液,在沸水中煮 15min,冷却。用分光光度计测定溶液在280nm 处的吸光值,并根据活力计算公式计算纤溶活力。纳豆激酶活力 =? 对照 - ? 样? .? ?

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