《紫外线诱导溶源菌性型大肠杆菌裂解噬菌体的实验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《紫外线诱导溶源菌性型大肠杆菌裂解噬菌体的实验（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验：噬菌斑的观察 一、 实验目的：观察噬菌体裂解细菌的现象。 烈性噬菌体能迅速裂解细菌，而温和性噬菌体由于原噬菌体基因 整合到寄主细胞的染色体基因组上，与寄主细胞同样分裂，并分配到 各个子细胞中去，因此在寄主细胞中找不到噬菌体的粒子，而是以形 成噬菌体的结构单元存在，称前噬菌体。这种噬菌体叫做温和性噬菌 体。这种含有温和性噬菌体的细胞称作溶原性细菌。 溶原性细菌可以自发地释放噬菌体，每1 代有 10 2105 细胞发 生裂解，释放出具有感染力的噬菌体。也可以通过诱异释放噬菌体。 已知具有诱异能力的物理、化学因素有紫外线、电离辐射、氮芥子气、 有机过氧化物、乙烯亚胺、丝裂霉素C 等。在布有敏感
2、菌株的琼脂平 板上出现肉眼可见的噬菌斑。 一、 材料 1、菌种： E、colik12F2gal / gal +/ 带有噬菌体（ ）和缺陷型噬菌体（dgal ）, 能发酵半乳糖。 E、cdi k12sgal - 不带噬菌体，不发酵半乳糖，对（）噬菌体敏感。 2、培养基 (1) 肉汤培养基（液体）:3ml/ 支3、9ml/ 支10、9ml/100ml 2 牛肉膏 5 克、蛋白胨 10 克、Nacl 5 克、蒸馏水1000ml、ph7. （2）肉汤固体培养基：120ml/250ml 1 肉汤培养基液加入2% 琼脂 （3）加倍肉汤培养基液 3ml/ 支2 成分相同，浓度加倍 （4）半固体培养基： 5m
3、l/ 支10 肉汤培养基液中加入0.6 0.8%琼脂 3 、溶液： （1）加镁磷配缓冲液 10ml/ 支1、3ml/ 支2 KH2PO4 2 克、 K2HPO4 7 克、Mgso4.H2O 0.25 克、蒸馏水 1000ml (2)氯仿 4、器皿： （1）培养皿75mm 1块90mm 8块 （2）移液管 1ml 20支 10ml 2支 三、方法与步骤： 1 、噬菌体的诱导和裂解液的制备 (1)从供体菌 E、colik12F2gal 斜面挑取一环接种于 3ml 肉汤培养 基中，37培养 18 个小时。取 1ml 接种于 9ml 肉汤培养液中 （100ml ）继续培养46 小时。取 9ml 培养液
4、 3000r 、p、m离心，收集菌 体。用 5ml 加镁磷盐缓冲液洗涤一次。 (2)加入 3ml 含镁离子磷酸缓冲液制成细胞悬浮液，取3ml 于 7.5cm 培养皿中，在距40cm的 15w紫外灯下照射10 秒钟，加入加 倍肉汤 3ml，37下避光培养23 小时（ 2hr15min） 。 （3）移入带塞的离心管中， 加入 0.4ml 氯仿，剧烈振荡 30-60 秒， 静止 5 分钟。 3500r 、p、m离心 15 分钟，收集上清液，此即为噬菌 体裂解液。 2、噬菌体效价的测定 (1) 从受体菌 E、colik12F2gal 斜面挑取一环接种于 3ml 肉汤培养基 中，37培养 18 小时，取
5、 1ml 培养物加到9ml/100 150ml肉汤 培养基中，继续培养6 小时。 (2) 用肉汤培养基，将入噬菌体裂解液稀释成10 -6 、10 -7 、10 -8 三个 稀释度。 (3)分别取上述三个稀释度的噬菌体裂解液 0.5ml 加入到 5ml 半 固体肉汤琼脂中 ( 琼脂保温 48左右） ，每个稀释度2 支，然后迅速 加入受体菌培养物，每管0.2 0.3ml ，摇匀，迅速倒入已铺好肉汤 固体培养基底层的平皿中，制成双层37过夜培养，计算菌体的效 价。 3、噬菌体值 ( 噬菌体效价 ) 的计算 效价噬菌斑总数 / 噬菌体裂解液 (ml) 平板重复数稀释倍数 ( 单位/ 毫升) 例如：吸取稀释至10 万倍(10 -5) 的被检样品 0.1ml 测定三个培 养皿内的噬菌斑分别为220、230、240，其噬菌职为： 噬菌值 ( 单位/ 毫升) (220 230240)/3 0.1 10 5 2.3 10 8 噬菌斑是噬菌体的一种特性，使噬菌体浸染敏感细胞后，释放 子代噬菌体，通过琼脂扩散到四周细胞继续侵染引起细胞裂解而形 成的空斑。
