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1、生物物证检验,CONTENT,目 录,01,血痕检验,02,精液斑检验,03,唾液及唾液斑检验,04,人体组织检验,05,混合斑检验,血痕检验,01,血痕检验,目的： 1、提取或送检的可疑斑痕是否是血痕 2、血痕是人血还是动物血 3、确定人血后，检测血液的遗传标记，进行个体识别 4、其他检验，如血痕的性别、出血量、出血时间及出血部位推断等,预实验,确证实验,种属鉴定,肉眼检验,遗传标记鉴定,其他检验,程序：,血痕检验,肉眼检查 主要观察血痕的分布范围、数量、形态、位置、色泽以及血痕同周围物品的关系,室内避光 即时血痕,阳光照射 即时血痕,2m滴落 瓷砖血痕,血痕检验,预实验： 性质：筛选试验,
2、联苯胺试验,鲁米诺试验,蓝星试剂,特异性好 灵敏度高喷洒过后不影响检测DNA 在黑暗环境中进行,特异性强； 灵敏度高； 蓝光更强，持续时间更长； 不一定要在黑暗环境中； 不影响DNA后续检测,灵敏度高 特异性差 联苯胺是致癌物 会破坏血痕,血痕检验预实验,联苯胺试验原理：血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化物酶活性，能使H2O2分解成H2O与新生态氧，使无色的联苯胺氧化成蓝色的联苯胺蓝。 方法：1剪取或刮取检材少许，置小滤纸片上。2加冰醋酸1滴，然后加联苯胺无水乙醇饱和液1滴。看出现蓝色。31-2分钟后，若不出现蓝色反应，再加3%H2O2 1滴，立即出现；蓝色为阳性反应，否则为阴性反应。 特
3、点：灵敏度高、操作简单、快速，特异性不强。 结果的法医学意义 阳性：结果只能说明检材可能是血痕，不能肯定是血痕，许进行下一步试验确证。 阴性：结果可以否定检材是血痕或检材试血痕但丧失检测条件，无需进行下一步试验。,血痕检验确证实验,血色原结晶试验 原理： 血痕中的血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性珠蛋白，在还原剂的作用下，正铁血红素还原成血红素，与变性珠蛋白或其它含氮化合物如吡啶结合，形成血色原结晶。 步骤：特点：灵敏度低特异性强 法医学意义：阳性：可确定为血痕阴性：不是血痕，或血痕经水洗、雨林，变性或陈旧等。,血痕检验,种属鉴定,1,血清学方法：,2,免疫层析技术,3,分子生物学方法
4、,血痕检验种属实验,抗人血红蛋白胶体金试验 原理：氯金酸(HAuCl4) +还原剂金颗粒(红色) 带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，称胶体金。胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附，可以与免疫球蛋白、糖蛋白、酶等非共价结合。胶体金+免疫球蛋白免疫胶体金 胶体金颗粒作为抗体燃料结合物，与带正电的抗体结合形成“探针”，免疫胶体金胶体金颗粒聚集后达-定浓度可呈相应的颜色，红色特点：种属特异性、器官特异性 结果：阳性：反应区中检测线质控线出现两条红色区带为阳性结果，提示为人血。阴性：只有质控带显现红色区带为阴性结果，提示不是人血。无带出现表明可能操作失误或试纸条失效，应重复试验。失效：控制
5、区无紫红色线条出现,血痕检验个人识别,精液斑检验,02,精液斑检验,目的：为案件侦查和审理提供线索和证据，需解决以下问题：可以斑痕是否为精斑？若是精液斑，确定精液斑的个体来源,肉眼检验,预实验,确证实验,个人识别,程序：,精液斑检验,肉眼检查 精斑的形态： 无固定形态，外观常因附着物不同而有差异，在软质载体，如衣裤、纸张、床单上等，手触之有硬感，新鲜精斑有特殊腥气味。 典型的精斑呈不规则地图状，在深色纺织品上呈灰白色浆糊状斑迹；在浅色纺织品上，多呈黄白色地图状，边缘色深。 紫外辅助检查： 原理： 精斑中的黄素在紫外线下呈银白色荧光，斑痕边缘呈浅紫蓝色 特点： 对检材无污损、无破坏，不影响进一步
6、检验 特异性差（干扰物：阴道液、尿液、唾液、某些色素染料） 作用： 仅能为进一步检验提供可疑部位 结果分析： 阳性仅表明可能是精斑，阴性不能轻易否定精斑,精液斑检验预实验,碘化碘钾试验（Florence试验） 原理： 精斑中卵磷脂析出的胆碱+碘 褐色针状结晶 步骤： 取材置于玻片 加一滴生理盐水 分离针分离 碘-碘化钾一滴 盖片镜检缺点： 1.灵敏度不高，仅1:4002.仅在一定时间内可能出现有意义的阳性结果 3.假阳性率高，特异性低结果：阳性：检材可能为精斑，但不能确定。 阴性：检材不是精斑，或精斑过于陈旧。,精液斑检验,确证试验 精斑的确证试验是检验精斑中的特有成份，其阳性结果可以确证精斑
7、。主要有三类方法：精子检出、免疫学检验和生物化学检验。,精子检出法 显微镜下观察到典型精子，即能确证人精斑。检出精子是认定精斑最简便、最可靠的方法，可被法医实验室广泛采用。,精液斑检验,确证试验,免疫学检验： 抗人精血清沉淀反应抗人精液血清既有器官特异性又有种属特异性，用特异性抗人精液血清与可疑精液斑检材作沉淀反应，出现白色沉淀线为阳性反应，证明检材含有人精液斑前列腺特异性抗原的检测 胶体金法 ELISA法 1、灵敏度高 2、适用于输精管结扎术者和精子缺乏症患者的精斑 3、具有高度种属特异性和器官特异性 其它确证精斑方法：乳酸脱氢酶-X：仅出现于人精子 微量元素检测法 抗人精子单克隆抗体免疫组
8、化法,精液斑检验,精液斑检验,唾液及唾液斑,03,唾液及唾液斑,目的：主要是个人识别，也可进行亲子鉴定时测定DNA多态性 程序：肉眼观察预实验确证试验个人识别,肉眼观察： 唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，在紫外线照射下呈现淡青色荧光 预试验 淀粉酶的检测 原理：淀粉遇碘变蓝，唾液中含大量淀粉酶，可将淀粉转化为糖，糖遇淀粉不变蓝。结果分析：斑痕浸出液与淀粉及碘反应不变蓝色，只能证明斑痕中含有淀粉酶，并不能该斑痕就是唾液斑注意：对于可疑唾液斑的检测，一定要设立阳性对照（已知唾液斑）和阴性对照（空白检材载体）,唾液及唾液斑,确证试验 口腔粘膜上皮细胞的检查 步骤：取材浸泡离心去上清涂片干燥甲醇固定（1
9、0分钟）干燥染色镜检结果分析：仅凭斑痕中检出淀粉酶，不能确证唾液斑。若检出口腔黏膜脱落上皮细胞，结合淀粉酶试验阳性结果可判定为唾液斑。如同时检出食物残渣、嗜氧菌、厌氧菌等可以进一步确证是唾液斑。,口腔黏膜脱落细胞（HE染色）,唾液及唾液斑,个人识别一、唾液(斑)的ABO血型测定中和试验测定ABO血型酶标抗体免疫测定法检测ABO血型二、唾液斑的DNA分析,人体组织检验,04,人体组织检验,根据法医物证检验的特点可将人体组织分为： 软组织(皮肤、肌肉、脏器等) 硬组织(骨骼、牙齿) 角化组织(毛发、指甲、趾甲等)。,毛发检验 目的：身份识别（个人识别和亲子鉴定） 程序：1毛发？ 2 人毛？动物毛？
10、（种属鉴定）3.人的部位？损伤？附着物？ 4.毛发的个人识别软组织检验 目的：身份识别（个人识别和亲子鉴定） 程序：1组织？ 2.人组织？动物组织？（种属鉴定） 3.组织的个人识别硬组织检验（骨、牙） 目的：个人识别（个人识别和亲子鉴定） 程序：1.骨/牙？ 2.人骨/人牙？动物骨/牙？（种属鉴定） 3. 骨/牙的个人识别,人体组织检验,毛发检验毛发和其它纤维的鉴别： 肉眼观察：毛发有毛根、毛干、和毛根的结构，纤维无此结构。 显微镜观察:人毛和动物毛有毛小皮、皮质、髓质三层结构，纤维没有这些结构。 燃烧法：纤维易燃烧，燃烧后无特殊臭味，人毛或动物毛燃烧后会发出特殊的臭味。,人毛和动物毛的鉴别：
11、,人体组织检验,毛发检验形态学观察 毛发的DNA分析 带毛囊的毛发的扩增片段长度多态性分析（STR基因座分析，性别的DNA分析） 毛干的基因组分析（毛干的线粒体DNA分析、毛干核DNA分析 毛发的其它法医学意义： 毛发所含的微量元素可以反映毛发毛发生长期间所摄入微量元素的数量和代谢情况，所以可间接反映某一时间段或不同地理环境下微量元素的变化，有助于推荐嫌疑人的生活环境及从事职业等。,混合斑的种类及个体识别,05,混合斑检验,概念 法医物证学的混合斑(mixed stain或mixture) 是指包含两名或两名以上个体的混合生物检材。分类 混合斑分为两类：1、不同个体的同一种体液或组织混合。多个
12、个体的混合血痕最常见。2、不同个体的不同体液或组织混合。男性精液与女性阴道分泌液的混合最常见。混合斑出现的情况 （一）性犯罪案件检材，包括阴道拭子、内裤、卫生纸、床单、外生殖器拭子及其他各类物品，这类检材多含有精子及阴道上皮细胞，属男、女个体成分的混合物； （二）多人受伤的现场血迹，凶器、当事人身上或衣物上的血痕，多为混合血痕； （三）咬痕拭子含有咬者的口腔上皮细胞和被咬者的皮肤细胞； （四）指甲垢，含有本人和被抓者的细胞； （五）血衣有另一个人的汗液、唾液或尿液； （六）勒颈的绳索、捆绑的胶带、作案工具等。,混合斑检验,目的：个人识别 检验目的主要是检测精液的遗传标记，确定嫌疑人 少数要求确
13、定阴道分泌液的遗传标记，认定受害者程序：首先要确证检材是否为混合斑，然后检测分析混合斑的遗传标记最终达到个人识别的目的,确定由哪几种成分组成,精液与阴道液混合斑检验,是物证检验中最常见的混合斑，常见于性犯罪案件。,一、混合斑的确证,混合斑的确证,(一) 精斑的确证利用精斑的确证试验 细胞学方法-精子的检出 免疫学方法-精斑确证最好试剂-抗P30血清,(二) 阴道液斑的确证1、细胞学检查,斑痕浸液离心，沉淀物涂片，HE染色结果：（1）阴道上皮细胞：大而扁平、形态不规则、胞浆红染，有的为己完全角化无核。（2）若同时查见精子，为阴道分泌液与精液的混合斑。,混合斑的确证,阴道上皮细胞的形态与口腔上皮细
14、胞有些相似， 阴道上皮细胞富含糖原，可采嗜碘试验与口腔黏膜桑皮细胞相鉴别,嗜碘试验,阴道上皮细胞被碘染成红褐色或深黄褐色，口腔粘膜细胞不着色。可鉴别阴道上皮细胞与口腔粘膜上皮细胞。 注意：男性尿道口上皮细胞也呈碘染色法阳性，故在检查阴茎上有无阴道上皮细胞附着时需慎重,2、阴道肽酶测定：（VP）是一种催化肽键水解的酶（ L-缬氨酸-L-亮氨酸），仅存在女性生殖道分泌液中，与年龄、性活动、月经周期无关。方法：淀粉凝胶电泳 注意：阳性检出率只有64%，故阴性结果不能否定阴道液存在。检出期限为7个月。,二、混合斑的个人识别,混合斑鉴定主要三类方法,注意：以强奸案中最常出现的精液与阴道液混合斑为例混合斑
15、所测出的遗传标记是精液与阴道液遗传标记的总和，鉴定混合斑，应取受 害人和嫌疑人的血液、唾液等检材做参照样本。对于已婚的被害人，提取其丈夫的对 照样本。,混合斑的个人识别,一、对比推断法,DNA分型STR基因座分型技术 对混合斑直接提取DNA进行STR基因座分型，结果会得到男性案犯和女性受害人的混合分型图谱，单个基因座的等位基因数目可能超过3个。 直接与案犯和受害人的参照样本分型结果比对进行判定。ABO血型测定中和实验 用中和实验测定混合斑和受害人唾液的ABH物质及分泌状态，进行对比分析，推测出混合斑的ABO血型。 （1）.若混合斑中精液血型与嫌疑人血型不同，则可否定犯罪嫌疑人；如相同，则不能否
16、定。 (2).若受害者为非分泌型，则很容易从混合斑中判断犯罪嫌疑人的血型。 (3).若受害者为分泌型，通过对比可在一定程度上推测嫌疑人的血型。,混合斑的个人识别,二、分离精液和阴道分泌液进行检测,（一）常染色体DNA检测分析：关键获得纯净的精子DNA1.分离方法差异提取法（两步消化法）,原理：精子细胞的表面蛋白含有大量的二硫键，可以抵抗去垢剂SDS和蛋白酶K的消化，而其他组织的细胞膜、核膜则可以被这两种物质消化。,方法：第一步：检材+SDS+蛋白酶K+TES缓冲液 37水浴3h 离心，上清（含阴道上皮细胞DNA），精子留在沉淀物中。第二步：沉淀物+DTT（二硫苏糖醇）+SDS+蛋白酶K+TES缓冲液 56 水浴过夜 离心，上清（含精子DNA）。,注意： 实际操作前，应进行涂片检查，确定精子和阴道上皮细胞的比例，根据情况和经验对第一步消化的时间、温度、试剂浓度等做适当的调整；还可对第一步消化进行消化时间梯度的尝试。,
