1 超声波提取山绿茶中的黄酮摘 要：目的用超声波提取技术提取山绿茶中的主要有效成份黄酮方法以山绿茶为原料，乙醇浓度为 95％、提取温度为45℃、提取时间为30 min 提取、用大孔树脂的吸附进行进一步分离提纯结论此工艺简单可行，且超声波对总黄酮成分无影响，适用于工业化生产，及黄酮药用性高关键词： 山绿茶黄酮超声波提取1 前言山绿茶为冬青科植物海南冬青的叶片，该植物主要含有黄酮、三萜苷类、三萜酸类、皂素及香豆素类等化学成分，还含有一定的微量元素，具有清热消毒、活血通脉、抗氧化等多方面生物活性，有增加免疫功能，促进人体发育，延缓衰老等多种功效目前，山茶主要用于降血压、降血脂、降胆固醇以及冠心病、脑血管疾病等病症临床上有用于生产降压片，降压的药学效果比较显著还用于袋泡剂的研制黄酮类化合物是山绿茶植物中的主要有效成份，具有较强的生理活性其中的类黄酮能增强维他命C的抗氧化功效，这种类黄酮也是珍贵营养品，所以它对维持皮肤美白，可谓是有珍品级的效果黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生目前有关天然产物中提取黄酮类化合物的方法主要有有机溶剂提取法、微波萃取法、酶辅助提取法、CO2超临界流体萃取法等．普通的有机溶剂提取法通常比较耗时，有时还须使用有毒有害溶剂，污染产品．微波萃取法通常可以加速提取过程，但提取过程往往温度较高，可能对有效成分造成破坏；另外，微波的泄漏也会对操作者带来危害．酶辅助提取法可以加速提取过程，提高提取效率，但提取过程各种条件控制不当容易导致酶的失活．CO2超临界流体萃取法可以提高提取效率，但提取压力较高，需要特殊装置，并且有些提取过程也并不省时．超声波提取法常常由于设备容易得到、操作简单、提取过程温和、省时、提取效率高而得到广泛应用。
可以通过建立大鼠前列腺增生模型, 观察并分析从山绿茶中提取获得的总黄酮对大鼠BPH 模型前列腺细胞凋亡及腺体组织细胞超微结构的影响, 以此研究山绿茶总黄酮抑制前列腺增生的作用机制, 为开发山绿茶的新用途提供理论依据2 实验原理超声提取法是利用超声波增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，提高药物溶出速度和溶出次数，缩短提取时间的浸提方法SP825树脂是一种较为适合提取黄酮的大孔树脂，并能有效提高丙酮的纯度大孔吸附树脂的吸附原理与活性炭相似，与范德华力或氢键有关依靠它和被吸附的分子（吸附质）之间的范德华力或2 氢键，通过它巨大的比表面积进行物理吸附，而网状结构和高比表面积，又使大孔吸附树脂具有筛选性能，使有机化合物能根据吸附力及其分子量大小经一定溶剂洗脱而分开，达到分离、提纯、除杂、浓缩等不同目的利用大孔树脂的表面吸附和其与黄酮类化合物分子的酚羟基形成氢键缔合而产生的吸附作用，选择性地吸附黄酮类化合物，然后利用溶剂分子与树脂、黄酮类化合物形成氢键缔合更强的特性，将黄酮解吸、洗脱，从而达到分离纯化的目的2.1 实验操作流程图取 10g山绿茶叶（干）浸泡30min 超声波提取 30min 45 ℃布氏漏斗抽滤提取液茶叶残渣布氏漏斗抽滤蒸馏水冲洗 3 次旋转蒸发仪蒸干水分（粗产物）大孔树脂提纯干燥得精产物（测量、鉴定）3 实验药品与器材3.1 药品：山绿茶、 95％的乙醇、盐酸- 镁粉、 1％的氯化铝、浓硫酸、1％的醋酸镁、AB-8 大孔吸附树脂； 5％亚硝酸钠水溶液、2% 盐酸、 5% 盐酸、 2％氢氧化钠、5％氢氧化钠、10％硝酸铝、 10% 的NaCl 3.2 器材：超声波仪、电热鼓风干燥箱、旋转蒸发仪，布氏漏斗, 恒流泵， 15mm*350mm、紫外分光光度计、层析柱、移液管4实验结论3 4.1 黄酮的提取4.2 大孔树脂的吸附滤液通过已装好的大孔吸附树脂玻璃柱，对粗提液进一步分离提纯。
打开超声波电源开关，预热2—3min把烧杯放入超声波仪中，使超声波仪中水位略高于烧杯中水位开启超声波开关，提取温度为45℃，提取 30min后取出用布氏漏斗和抽滤瓶抽滤，分离提取液与茶叶残渣残渣用蒸馏水冲洗3 次并过滤，合并滤液滤液用旋转蒸发仪蒸发20min，得到山绿茶粗提物（液体）大孔树脂的吸附树脂的预处理上样称取适量的山绿茶叶l0.0克( 干重) 放入烧杯中，加适量的蒸馏水，使蒸馏水完会浸泡山绿茶30min洗脱回收产品 , 干燥计算产率黄酮的鉴定4 4.2.1 树脂的预处理预处理的目的：为了保证制剂最后用药安全树脂中含有残留的未聚合单体，致孔剂，分散剂和防腐剂对人体有害预处理的方法： 乙醇浸泡24h→用乙醇洗至流出液与水1：5 不浑浊→用水洗至无醇味→5%HCl通过树脂柱，浸泡2-4h →水洗至中性→2%NaOH 通过树脂柱，浸泡2-4h →水洗至中性，备用最后在层析柱顶端塞入一小团脱脂棉，防止在加入试剂时直接冲击树脂，破坏床层所装树脂床层为30ml 4.2.2 上样将山绿茶粗提物溶于少量水中，以一定的流速加到柱的上端进行吸附上样液以澄清为好，上样前要配合一定的处理工作，如上样液的预先沉淀、滤过处理，pH 调节为5 左右，使部分杂质在处理过程中除去，以免堵塞树脂床或在洗脱中混入成品。
4.2.3 洗脱先用水清洗以除去树脂表面或内部还残留的许多非极性或水溶性大的强极性杂（多糖或无机盐），然后用 95% 的乙醇洗脱，回收洗脱液4.2.4 再生再生的方法： 95% 乙醇洗脱至无色，再用2% 盐酸浸泡，用水洗至中性，再用2%NaOH 浸泡，再用水洗至中性注意：再生后树脂可反复进行使用，若停止不用时间过长，可用大于10% 的 NaCl 溶液浸泡，以免细菌在树脂中繁殖一般纯化某一品种的树脂，当其吸附量下降30% 以上不宜再使用上柱液流速不宜过快，一般保持在每小时通过2 至 3 个柱体积，（蒸馏水洗涤后再用95％乙醇洗脱树脂，洗脱速比吸附速度慢，一般为每小时1 至 2 个柱体积4.2.5 回收产品：洗脱液转入到旋转蒸发瓶，真空旋转蒸发至干燥，转移至干燥箱内充分干燥，得到提取物总黄酮干粉M ?4.3 黄酮称量4.3 ．1 标准曲线的绘制精确称取在105℃干燥恒重的芦丁对照品10mg ，用 95％乙醇溶解，摇匀，定容至l0ml, 使之成为浓度为 1 mg／mL的芦丁标准品溶液，作为贮备液备用精密量取上述溶液0mL 、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL， ，分别加水至3mL ，加 5％亚硝酸钠水溶液0.5 ml ，放置 6 min ，加 10％硝酸铝0.5mL，混匀后放置6 min ，加入5％氢氧化钠溶液 2.5mL，混匀，放置15 min 后，蒸馏水定容至10 mL. 用紫外分光光度计，在λ=500 nm 处测吸光5 度．结果见表1，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线( 见图 1)。
表 l 芦丁标准品吸光度值图 I 芦丁标准品吸光度一浓度标准曲线以浓度为横坐标x，吸光度为纵坐标y， ，进行回归，得芦丁浓度一吸光度方程：y=10.94X 一 0．0321 相关系数R 2=0．9994 根据方程得出如下总黄酮浓度计算公式：x=( y十 0.0321) ／10.94 y—吸光度x—黄酮的浓度4.3.2用蒸馏水溶解黄酮干粉，测出其吸光值带入上式公式，求出黄酮的质量M ?4.4 黄酮的鉴定4.4.1 盐酸- 镁粉反应： 在少许样品液中加入少量镁粉，再滴加 1-2 滴浓盐酸，在沸水浴中加2-3min ，观察结果；6 4.4.2 铝盐反应：在少许样品液中滴加1％的氯化铝溶液2-3 滴，观察结果；4.4.3 浓硫酸反应：在少许样品液中滴加少量浓硫酸观察结果；4.4.4 醋酸镁反应：在少许样品溶液中逐滴加入1％的醋酸镁观察结果5实验结论5.1 黄酮鉴定结果试剂盐酸- 镁粉1％的氯化铝浓硫酸1％的醋酸镁现象浅红色黄色黄色黄色5.2 计算黄酮提取率提取率 ( ％)= M?／10g X 100 6实验结论以水为介质，对山绿茶进行超声波处理，可使山绿茶内部组织的温度升高，加速提取物的溶出，超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散及溶解，有利于提高山绿茶破碎速度和提取率，超声波提取山绿茶，提取时间短，温度低，方法简单，提取率高，可用于提取山绿茶黄酮的生产。
参 考 文 献【1】陈凌，泰永文．山绿茶降压片的降压疗效观察中国中西医结合杂志，200l ，21(2)134 ～135．【2】赵铁良，胡文总，邢春清．山绿茶降压片治疗高血压痛疗效观察．北京中医，1999(6) ：55—56．【3】唐耀平，刘鹰，方显明山绿茶治疗老年单纯收缩期高血压8O例分析．中医药学刊，2004，22(8) ：1502～l5o3 ．【4】惠元诚， 柬志勤． 山绿茶降压片和卡托普利治疗轻中度高血压的疗效观察．苏州医学院学报， 2001， 21(3) ：3O6 ～308．【5】 董泽民．复方山绿茶缓释袋泡剂的研究．中成药，1993，15(12) ：7～9．【6】陈勇，谢臻，刘婧等．山绿茶研究．广西中医学院学报，2004，7(3) ：4～6．【7】王昌利，杨景亮，宋小妹陕西中医学院学报，1993，16(3) ：33—35．【8】尹莲．超声法提取茶多酚的研究．食品工业，1999(3) ：10～11．。