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1、GB/T 12143.3-89 果蔬汁饮料中 L-抗坏血酸的测定方法( 乙醚萃取法 )1 主题内容与适用范围本标准规定了使用2,6-二氯靛酚滴定 -乙醚萃取法测定果蔬汁饮料中L-抗坏血酸含量的方法。本标准适用于浓缩果蔬汁、 果蔬原汁、果蔬汁饮料、 果蔬汁碳酸饮料及果蔬汁固体饮料中 L抗坏血酸的测定 ,尤其适用于深色果蔬汁饮料中L-抗坏血酸的测定。但不适用于脱氢抗坏血酸的测定。2 引用标准GB 601 化学试剂 标准溶液制备方法GB 686 化学试剂 丙酮 HG 3-1002 化学试剂 乙醚3 原理本法根据氧化还原反应原理,2,6-二氯靛酚能被 L-抗坏血酸还原为无色体,微过量的 2,6-二氯靛
2、酚用乙醚提取 ,然后由醚层中的玫瑰红色来确定滴定终点。4 试剂所用的试剂均为分析纯 ,所用的水均为蒸馏水或同等纯度的水(以下简称水 )。4.1 丙酮:符合 GB 686. 4.2 乙醚:符合 HG 3-1002. 4.3 10%硫酸铜溶液:称取10g 硫酸铜 (CuSO4 5H2O)溶解于水 ,并稀释至 100mL. 4.4 2%草酸溶液:称取 20g 草酸(C2H2O4 2H2O)溶解于水 ,并稀释至 1L。4.5 0.1 mol/L I2 碘标准滴定溶液:按GB 601 第 2 章第 10 条配制与标定,贮存于棕色瓶中。4.6 0.01 mol/L I2 碘标准滴定溶液:将0.1mol/L
3、 碘标准滴定溶液在使用时稀释V25mL V250mL ,浓度以 C1 表示。4.7 0.88mg/mL 抗坏血酸标准溶液: 称取 0.22g 抗坏血酸,用 2%草酸溶液 (4.4)溶解并稀释到 250mL。标定:吸取抗坏血酸标准溶液25.00mL,加0.5%淀粉指示液 (4.10)1mL,用0.01 mol/L I2 碘标准滴定溶液滴定至呈 微蓝色 为止。C1 V1 C2 = 176 (1)25 式中: C2-L-抗坏血酸溶液的浓度, mg/mL; C1-碘标准滴定溶液的浓度,mol/L; V1-标定时所用碘标准滴定溶液的体积,mLl; 176-1 mL 1 mol/L 碘标准滴定溶液相当于L
4、-抗坏血酸的毫克数。4.8 0.088 mg/mL L-抗坏血酸标准溶液:吸取0.88 mg/mL L-抗坏血酸标准溶液(4.7) 25.00mL,用 2%草酸溶液稀释, V25mL V250mL 。注: 4.7 和 4.8 的 L-抗坏血酸溶液在 使用时配制 。4.9 2-6-二氯靛酚标准滴定溶液:称取200mg 2,6-二氯靛酚,用少量热的重蒸馏水湿润,然后再慢慢加入热的重蒸水,搅拌溶解,过滤。冷却后,滤液用重蒸馏水稀释到1L。标定:吸取 10.00mL L-抗坏血酸标准溶液 (4.8)置于 250mL 锥形瓶中,用 2.6-二氯靛酚标准溶液滴定至玫瑰红出现为止,耗去体积记为V。m T=
5、(2)V 式中:T-2,6-二氯靛酚溶液的滴定度, 即 1 mL 2,6-二氯靛酚溶液相当于L-抗坏血酸的毫克数, mg/mL;m-10 mL L-抗坏血酸标准溶液中含抗坏血酸的量,mg; V-标定时所用 2.6-二氯靛酚溶液的体积 ,mL. 4.10 5g/L 淀粉指示液:称取0.5g 可溶性淀粉,用5mL 冷水调匀,将所得乳浊液在搅拌下徐徐注入100 mL 沸腾着的水中,再煮沸23min,使溶液透明。5 仪器 实验室常用仪器及下列各项5.1 10 mL 微量滴定管(或用酸式滴定管代替) 。5.2 50 mL 100mL 比色管。5.3 125 mL 分液漏斗。6 试液的制备水果、蔬菜中抗坏
6、血酸的含量见附录 A。6.1 浓缩汁在浓缩汁中加入与在浓缩过程中失去的天然水分等量的水,使成为原汁。然后同原汁一样取一定量样品,稀释、混匀供测。6.2 原汁称取含抗坏血酸 410 mg 有代表性的样品(精确到0.001g) ,用 2%草酸溶液稀释到 250 mL,混匀供测。6.3 果汁饮料、果蔬汁水6.3.1 抗坏血酸含量在 0.05mg/mL 以下的样品,混匀后直接取样测定。6.3.2 抗坏血酸含量在 0.05mg/mL 以上的样品,称取含抗坏血酸410mg有代表性的样品(精确到 0.001g) ,用 2%草酸溶液稀释到 250mL,混匀供测。6.4 果蔬汁碳酸饮料先将样品旋摇到基本无气泡后
7、,按 6.3 条制备。6.5 固体饮料称取含抗坏血酸410mg 有代表性的样品 (精确到 0.001g),用 2%草酸溶液溶解并稀释 至 200mL,混匀供测。6.6 乙醚抽提处理对于高度乳化或样液色泽较深且易被乙醚抽提的样品,取 10.00mL 样品,置分液漏斗中。加 30mL 乙醚,充分振摇但勿使之乳化。 待分层后将下层样液放入250mL 容量瓶中,分液漏斗中加入 20mL2%草酸溶液。适当振摇,待分层后,将下层水溶液放入上面的 250mL 容量瓶中。如此反复操作4 次,将每次的下层水溶液均放入250mL 容量瓶内,然后用 2%草酸溶液稀释至刻度。6.7 空白试液的制备按试液制备中所确定的
8、取样量称取同一样品(精确到 0.001g), 置于 250mL 锥形瓶中,加 20mL10%硫酸铜溶液,加水使总体积约为100mL,置于垫有石棉网的电炉上,小心加热至沸并保持微沸15min,然后用流动水冷却到室温。 将此溶液转移到250mL 容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,供空白测定。7 分析步骤7.1 试液的制定取 6 支 50mL 比色管,在每支比色管中加入10.00mL 按第 6 章制备好的试液,各加2. 5mL 丙酮。放置 3min 后,在第一支比色管中加入1 mL2,6-二氯靛酚溶液 ,充分混匀,精确控制 40s后,加入 2 mL 乙醚,充分振摇,放置几分钟,待乙醚与水溶液分层后,观
9、察醚层有无 出现玫瑰红色。 当出现淡玫瑰红色时, 则表明已达到测定的暂定终点。如果 2,6-二氯靛酚全部被抗坏血酸还原,乙醚层保持无色,则在第二支比色管中加入1.5mL 2,6-二氯靛酚溶液, 充分混匀,精确控制40s后,加入 2 mL 乙醚,充分振摇,放置几分钟,待乙醚与水溶液分层后,观察醚层有无出现玫瑰红色 。如还不显红色,再逐一按 2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mL 的量加入 2,6-二氯靛 酚溶液,直到乙醚层出现玫瑰红色达到暂定终点为止。这时所加的2,6-二氯靛酚的量常常是 过量的,所以需进一步试验, 确定精确的终点 。如果加到 3.0mL 2,6-二氯靛酚溶液
10、时出现玫瑰红色,则从第六支加有试液的比色管中开始分别加入2.6、2.7、2.8、2.9mL 2,6-二氯靛酚溶液,直至呈现淡玫瑰红色为止。 如在 2.9mL 刚呈红色,则 2.9mL 为精确终点。如加到 2.9mL 2,6-二氯靛酚溶液仍不显玫瑰红色,则上面的3.0mL 就是精确终点。 所用 2,6-二氯靛酚溶液为 毫升。对于抗坏血酸含量低于2mg/100g 的样品,用 100mL 比色管直接加倍取样测定。丙酮与乙醚的加量也相应加倍,操作同上。 对于同一个被测样液需平行测定三次。7.2 空白试液的测定吸取空白试液10.00mL 于比色管中,同7.1 加丙酮并逐一按0.05、0.10、0.15、
11、0.20mL 的量加入 2,6-二氯靛酚溶液, 测得在乙醚层中刚呈现玫瑰红色所需的2,6-二氯靛酚溶液的 量为 b 毫升。8 结果的表示8.1 计算(a-b) T X = 100(3)m 式中: X-100g(或 100mL)样品所含 L-抗坏血酸的毫克数, mg/100g(或 100mL); a-测定试液时所需 2,6-二氯靛酚溶液的体积 ,mL; b-测定空白试液时所需2,6-二氯靛酚溶液的体积 ,mL; T-2,6-二氯靛酚溶液的滴定度, mg/mL,即每 mL 此溶液相当于 L-抗坏血酸的mg 数;m-10 mL 试液中所含样品的量 ,g(或 mL)。注: 以误差在允许范围内的三次测定
12、结果的算术平均值报告结果,精确到小数点后第一位。8.2 允许误差同一样品三次测定结果的相对偏差为:其抗坏血酸含量大于或等于10mg/100g的样品应小 于 2%,含量小于 10mg/100g的样品应小于 5%。实训萃取分离 一、实验目的(1)了解萃取分离的基本原理,乳化及破乳化。 (2)熟练掌握分液漏斗的各项操作。二、仪器药品 漏斗架、分液漏斗(60mL ) 、移液管( 10mL) 、碱式滴定管(25mL) 、三角瓶( 50mL ) 、烧杯乙醚(或石油醚、氯仿、四氯化碳)、冰醋酸、 0.1mol/L氢氧化钠标准溶液、酚酞指示剂 三、基本原理 萃取是利用物质在两种不互溶(或微溶)溶剂中溶解度或分
13、配比的不同来达到分离、提取或纯 化目的一种操作。 例:将含有有机化合物的水溶液用有机溶剂萃取时,有机化合物就在两液相之间进行分配。在 一定温度下,此有机化合物在有机相中和在水相中的浓度之比为一常数,即所谓“分配定律”。 四、操作要点和说明 在实验中用得最多的是水溶液中物质的萃 取,最常使用的萃取器皿为分液漏斗。 1、在使用分液漏斗前必须仔细检查:玻璃塞和活塞是否紧密配套。然后在活塞孔两边轻轻 地抹上一层凡士林,插上活塞旋转一下,再看是否漏水。 2、将漏斗放于固定在铁架上的铁圈中,关 好活塞,将要萃取的水溶液和萃取剂(一般为溶 液体积的13)依次从上口倒入漏斗中,塞紧塞 子。 3、取下分液漏斗,
14、用右手掌顶住漏斗顶塞 并握漏斗,左手握住漏斗活塞处,大拇指压紧活 塞,旋转振摇(如图所示),振摇几次后,将漏 斗的上口向下倾斜,下部的支管指向斜上方(朝无人处),左手仍握在活塞支管处,用拇指和食指旋 开活塞放气 (释放漏斗内的压力) ,如此重复几次, 将漏斗放回铁圈中静置,待两层液体完全分开后, 打开上面的玻璃塞,再将活塞缓缓旋开,下层液体自活塞放出,然后将上层液体从分液漏斗的上口 倒出(切记! )将水溶液倒回分液漏斗,再用新的萃取剂萃取。如此重复35 次。 五、实验步骤 1用移液管准确量取10mL冰醋酸与水的混合液(冰醋酸与水以1:19 的体积比相混合) ,放入 分液漏斗中, 用 30mL乙
15、醚萃取。(注意实验室内不许有明火)待分层后, 放出水层到50mL三角瓶内, 加 2 滴酚酞指示剂,用0.1mol/L标准氢氧化钠溶液滴定, 记录用去氢氧化钠的体积. 计算 :(1)留在 水中的醋酸量及百分率.(2)留在乙醚中的醋酸量及百分率. 2. 用移液管准确量取10mL冰醋酸与水的混合液于分液漏斗中, 用 10mL乙醚如上法萃取, 分去 乙谜溶液 , 水层再用 10mL乙醚萃取 , 再分去乙醚溶液后, 水层仍用 10mL乙醚萃取 . 如此前后共计三次,最后将三次萃取后的水层放入50mL三角瓶中 , 用 0.1mol/L标准氢氧化钠溶液滴定, 记录用去氢氧化 钠的体积 . 计算 : (1)留
16、在水中的醋酸量及百分率. (2)留在乙醚中的醋酸量及百分率. (3)醋酸的分配系数. (4)比较萃取醋酸的效率. 将乙醚溶液倒入指定回收瓶. 六、注意事项 ( 1) 分液时一定要尽可能分离干净,有时在两相间可能出现一些絮状物,也应同时放去 (下层)。 ( 2)要弄清哪一层是水溶液。若搞不清,可任取一层的少量液体,置于试管中,并滴少量自来 水,若分为两层,说明该液体为有机相,若加水后不分层则是水溶液。 ( 3)在萃取时,可利用“盐析效应”,即在水溶液中加入一定量的电解质(如氯化钠),以降低 有机物在水中的溶解度,提高萃取效果。水洗操作时,不加水而加饱和食盐水也是这个道理。 ( 4)在萃取时,特别是当溶液呈碱性时,常常会产生乳化现象。这样很难将它们完全分离,所图 1 分液漏斗的振摇以要进行破乳,可加些酸。 萃取溶剂的选择要根据被萃取物质在此溶剂中的溶解度而定,同时