《分支杆菌鉴定方法的比较研究(1)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分支杆菌鉴定方法的比较研究(1)（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分支杆菌鉴定方法的比较研究分支杆菌鉴定方法的比较研究(1)(1)作者:刘金伟 匡铁吉 王金河 裴宁 宋萍 仲斌关键词：分支杆菌鉴定方法比较了微菌落法、多重聚合酶链反应法和传统法用于分支杆菌临床分离物菌种鉴定的效果，现报告如下。材料与方法：试验菌株：标准菌株：结核分支杆菌H37RV、牛分支杆菌、鸟分支杆菌、胞内分支杆菌、堪萨斯分支杆菌、瘰疬分支杆菌、偶然分支杆菌和耻垢分支杆菌标准株，均购自北京结核病胸部肿瘤研究所。临床分离株：来自我院结核病住院患者的痰、胸液和脑脊液。传统分型鉴定试验：培养鉴定试验：按常规制备对硝基苯甲酸和噻吩-2-羧酸肼培养基，取试验菌株菌悬液 ml接种，37培养，4 周看结果
2、。生化试验：68耐热过氧化氢酶试验、硝酸还原试验和吐温 80 水解试验，均按常规操作。微菌落观察法：取试验菌株在 37培养 23 周的斜面生长物，用无菌生理盐水配制相当于 10-3mg 湿菌/ml 接种液，取 ml 接种匡氏琼脂平皿 3 个，涂匀后置 36含 5%CO2的温箱培养 3、7、12d 后分别在 100 倍显微镜下观察微菌形态，记录结果。多重 PCR 鉴定法：多重 PCR 的三对引物是：MT1 和MT2、PT1 和 PT2、IS5 和 IS6，它们分别扩增表达 32000 蛋白的基因序列1 、MTP40 蛋白的基因序列2和 IS6110插入序列3 。DNA 扩增采用的 PCR 仪为英
3、国 Techne 公司产品，型号为 GeneE，操作见参考文献4 。结果与讨论 三种菌种鉴定法用于分支杆菌鉴定所耗时间见表 1。表 1 三种方法用于 200 株分支杆菌鉴别耗用时间比较鉴别方法鉴别内容平均耗时传统法结核、牛分支杆菌与非结核分支杆菌 28 微菌落观察法结核菌群与非结核分支杆菌多重 PCR 法结核、牛分支杆菌与非结核分支杆菌 23表 2 三种方法用于分支杆菌菌型鉴别的结果比较方 法 受试菌株数正确鉴别菌株数%传统法微菌落观察法多重 PCR 法注：经 2 检验，三种方法鉴别正确率比较 P 三种方法用于 200 株分支杆菌鉴定结果见表 2。200 株受试菌株中，有非结核分支杆菌 11
4、株，牛分支杆菌 2 株，其余187 株均为结核分支杆菌，其中非结核分支杆菌株占%。采用传统鉴定法，有 4 株结核分支杆菌株和 2 株非结核分支杆菌菌株鉴别不明确。微菌落法鉴别错误的有 4 株，其中2 株由于平皿上有杂菌污染而错误地鉴定为非结核分支杆菌菌株。故在操作过程中严防杂菌污染，对提高微菌落法鉴定分支杆菌的准确率具有重要意义。多重 PCR 扩增分支杆菌 DNA 时产生 13 条带，其中引物 MT1-MT2 扩增一条500bp 的分支杆菌属特异 DNA 片段；引物 IS5-IS6 扩增一条1000bp 长的结核分支杆菌菌群特异 DNA 带；引物 PT1-PT2扩增一条约 400bp 的结核分
5、支杆菌种特异片段。扩增产物电泳后，结核分支杆菌 DNA 标本产生 3 条带，牛分支杆菌DNA 标本产生 2 条带，非结核分支杆菌 DNA 标本产生 1 条带。影响多重 PCR 鉴定分支杆菌效果的主要因素是复性温度和Taq 酶质量。多重 PCR 法复性温度为 71，与延伸温度只差 1，必须很准确。表 1 结果表明，采用传统法鉴定分支杆菌需 28d，与微菌落法和多重 PCR 法相比差异有非常显著性；微菌落法需 d，与多重 PCR 法相比差异有显著性。三种方法相比，多重 PCR 法用于分支杆菌菌种鉴定所耗时间最短，其次是微菌落法，传统法耗时最长。表 2 结果表明，三种方法用于分支杆菌菌种鉴定的正确率
6、差异无显著性。本研究提示，微菌落法和多重 PCR 法对分支杆菌菌种鉴定具有快速、准确的优点，较传统法更能满足结核病临床的需要。参考文献M,deWittL,VolckaertG,etal.Cloning,sequencedetermination,andexpressionofa32kilodaltonproteinofMycobacteriumtuberculosis.InfectImmun,1989,57：3123-3130.CA,LondonoLP,DelPortilloP,etal.Characterizationandmolecularcloningofaspecies-specifi
7、csequence.InfectImmun,1991,59:3411-3417.D,Brisson-NoelA,Vincent-Levy-FrebaultV,etal.CharacteristicofaMycobacteriumtuberculosisinsertionsequence,IS6110,anditsapplicationindiagnosis.JClinMicrobiol,1990,28:2668-2673.PatriciaP,ThomasMC,MartineE,etal.MultiprimerPCRsystemfordifferentialidentificationofMycobacteriainclinicalsamples.JClinMicrobiol,1996,34:324-328.（作者：3COME 未知本文来源于爬虫自动抓取，如有侵犯权益请联系 service立即删除）
